【概(gai)要描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)胸腺(xian)上皮細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品：VERO-E6非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞小鼠(shu)脂(zhi)肪幹細胞(bao)永(yong)生化(hua)豬(zhu)子宮內膜(mo)上(shang)皮細胞(bao)永(yong)生化(hua)人前(qian)庭(ting)鞘膜(mo)瘤細(xi)胞永生(sheng)化(hua)人胰腺(xian)神經內(nei)分泌(mi)腫(zhong)瘤細(xi)胞永生化(hua)小鼠(shu)附(fu)睪脂(zhi)肪幹細胞(bao)永(yong)生化(hua)小鼠(shu)骨(gu)髓巨噬細(xi)胞永生(sheng)化(hua)雞胚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)永(yong)生化(hua)豬(zhu)主(zhu)動脈內皮細胞(bao)永(yong)生化(hua)豬(zhu)小腸(chang)上皮細胞(bao)永(yong)生化(hua)

大(da)鼠胸腺(xian)上皮分離(li)自胸腺(xian)組(zu)織(zhi)；胸腺(xian)是(shi)機體(ti)重(zhong)要的淋巴器官，其功能(neng)與(yu)免疫(yi)緊(jin)密相關(guan)，是(shi)T細(xi)胞分化(hua)、發(fa)育、成熟(shu)的場(chang)所，還可(ke)以分泌(mi)胸腺(xian)激素(su)及(ji)激(ji)素類物(wu)質(zhi)，具(ju)有內(nei)分泌(mi)技能(neng)的(de)器官。胸腺(xian)上皮細胞(bao)和胸腺(xian)細胞(bao)是(shi)胸腺(xian)微環境的(de)重(zhong)要組(zu)成部分，其外(wai)，胸腺(xian)上皮細胞(bao)組(zu)成了胸腺(xian)細胞(bao)不同發(fa)育階(jie)段(duan)的三(san)維(wei)結(jie)構，根據其在(zai)胸腺(xian)中位(wei)置(zhi)不同，可分為(wei)皮質胸腺(xian)上皮細胞(bao)和髓質(zhi)胸腺(xian)上皮細胞(bao)。胸腺(xian)細胞(bao)的(de)發(fa)育和成熟(shu)是(shi)通(tong)過(guo)在(zai)胸腺(xian)皮質和髓質(zhi)上皮細胞(bao)的(de)遷移過(guo)程(cheng)中(zhong)相(xiang)互作用完成的(de)。此外(wai)，胸腺(xian)細胞(bao)通(tong)過(guo)皮質胸腺(xian)上皮細胞(bao)介導的(de)陽(yang)性(xing)選(xuan)擇和髓質(zhi)胸腺(xian)上皮細胞(bao)介導的(de)陰性(xing)選(xuan)擇發(fa)育為(wei)能夠識(shi)別(bie)和耐受(shou)自身主(zhu)要組(zu)織(zhi)相容(rong)復合(he)體(ti)和自身抗(kang)原(yuan)的(de)成熟(shu)T淋巴細胞(bao)。胸腺(xian)上皮細胞(bao)是(shi)構成胸腺(xian)微環境的(de)主(zhu)要成份(fen)，其形態、分布(bu)和功能(neng)多樣(yang)。表面(mian)抗(kang)原(yuan)表達(da)具(ju)有高(gao)度(du)異質性(xing)，與(yu)胸腺(xian)細胞(bao)結(jie)合(he)成不同類型(xing)復合(he)體(ti)，部分胸腺(xian)上皮細胞(bao)相(xiang)互排列(lie)構成囊泡(pao)樣(yang)結構。電鏡觀察，可(ke)把胸腺(xian)上皮細胞(bao)分為(wei)3-6型，用抗(kang)胸腺(xian)上皮細胞(bao)單克隆抗(kang)體(ti)熒(ying)光(guang)染色(se)可(ke)把胸腺(xian)上皮細胞(bao)分為(wei)9種類型(xing)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠(shu)胸腺(xian)上皮采用yi蛋(dan)白酶-膠原(yuan)酶混合消化(hua)法(fa)結合(he)差(cha)速貼壁(bi)法，並通(tong)過(guo)上(shang)皮細胞(bao)專(zhuan)用培養基(ji)培養篩選制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠(shu)胸腺(xian)上皮經PCK免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有產(chan)品(pin)僅供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外的(de)使用！

包(bao)被條件 鼠(shu)尾膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞形態 上(shang)皮細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)1-2代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養條件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培養皿、培養瓶(ping)、移液(ye)管、離心(xin)管、手術(shu)器(qi)械等(deng)，並進行高壓滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且(qie)在(zai)有效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動物或(huo)組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據實驗(yan)需求，選(xuan)擇合(he)適的(de)動物並進行相應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條件下(xia)，迅速取出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損傷(shang)，並(bing)去除多余的脂(zhi)肪、結締組(zu)織(zhi)等非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出的組(zu)織(zhi)用預冷的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去除血液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放(fang)入含有適量(liang)消化(hua)酶的離心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊大部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單細胞懸液(ye)或(huo)小細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加入含血清(qing)的(de)培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸液(ye)，去除未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然後將(jiang)濾(lv)液以適當的轉速離心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常觀察(cha)：每(mei)天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的形態、生長狀態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數(shu)和活力(li)檢測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長情(qing)況和健康(kang)狀態。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材後需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非營(ying)養環境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除血液(ye)、雜質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶，避免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導致(zhi)細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需嚴(yan)格(ge)控制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培養條件優化(hua)

1. 培養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用含血清(qing)或(huo)特(te)定生(sheng)長因(yin)子的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻繁(fan)更換(huan)培養基(ji)品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁(bi)能力較弱，可(ke)能需(xu)要包被(bei)培養皿（如膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸抑制和分化(hua)。

三(san)、汙染控制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避免交(jiao)叉汙染。

- 培養基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用可能(neng)影響細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細(xi)胞形態、密度(du)及(ji)培養基(ji)顏色(se)，及(ji)時更換(huan)培養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可能提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍存早(zao)期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍存(cun)培養基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存。