【概要描述】大鼠關節軟骨(gu)細胞公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：NCI-H2170非(fei)小(xiao)細胞肺癌(ai)小(xiao)鼠頸動(dong)脈成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠頸靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠主(zhu)動(dong)脈瓣膜(mo)間(jian)質(zhi)細胞(bao)小(xiao)鼠大(da)隱靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠腎(shen)動(dong)脈平(ping)滑肌細胞(bao)小鼠腎(shen)動(dong)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠食(shi)管上皮(pi)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠食(shi)管平(ping)滑肌細胞(bao)小鼠食(shi)管成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)

本公司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅供科學實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科學實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

大鼠關節軟骨(gu)分(fen)離(li)自關節軟骨(gu)組織(zhi)；關節軟骨(gu)屬於(yu)透明(ming)軟骨(gu)，表面光(guang)滑(hua)、呈(cheng)淡(dan)藍色(se)、有(you)光(guang)澤(ze)，它是由(you)壹種特殊(shu)的(de)叫(jiao)做(zuo)致密(mi)結締(di)組織(zhi)的(de)膠原纖(xian)維(wei)構(gou)成(cheng)的(de)基(ji)本框(kuang)架，這種(zhong)框架呈(cheng)半(ban)環(huan)形，類似拱形球(qiu)門，其底(di)端緊緊(jin)附(fu)著在(zai)下面的(de)骨(gu)質上，上端朝向關節面(mian)，這(zhe)種(zhong)結構(gou)使(shi)關節軟骨(gu)緊緊與骨(gu)結合起來而(er)不(bu)會(hui)掉下來(lai)，同(tong)時(shi)當受到(dao)壓力時(shi)候(hou)，還(hai)可(ke)以(yi)有(you)少許(xu)的(de)變(bian)形，起(qi)到(dao)緩(huan)沖(chong)壓力的(de)作(zuo)用(yong)。在(zai)這些纖(xian)維(wei)之(zhi)間(jian)，散在(zai)分(fen)布著軟骨(gu)細胞，軟骨(gu)細胞由(you)淺(qian)層向深層逐漸由(you)扁(bian)平樣至(zhi)橢圓(yuan)或(huo)圓(yuan)形的(de)細(xi)胞組成(cheng)，這(zhe)些(xie)軟骨(gu)細胞維(wei)持關節軟骨(gu)的(de)正(zheng)常(chang)代謝(xie)。關節軟骨(gu)沒有(you)神(shen)經支(zhi)配，也(ye)沒(mei)有(you)血(xue)管(guan)，其營(ying)養(yang)成分(fen)必須從關節液(ye)中(zhong)取(qu)得，而(er)其代謝(xie)廢(fei)物也(ye)必須排至(zhi)關節液(ye)中(zhong)，關節軟骨(gu)的(de)這(zhe)種營(ying)養(yang)代謝(xie)必須通過關節運(yun)動(dong)，使(shi)關節軟骨(gu)不(bu)斷的(de)受(shou)到(dao)壓力刺(ci)激(ji)才(cai)行，所(suo)以(yi)關節運(yun)動(dong)對(dui)於(yu)維(wei)持關節軟骨(gu)的(de)正(zheng)常(chang)結構(gou)起重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)。關節軟骨(gu)細胞位(wei)於(yu)關節軟骨(gu)陷窩內(nei)。幼稚的(de)關節軟骨(gu)細胞位(wei)於(yu)關節軟骨(gu)組織(zhi)的(de)表層，單(dan)個(ge)分(fen)布、體(ti)積(ji)較小(xiao)、呈(cheng)橢圓(yuan)形，長軸(zhou)與關節軟骨(gu)表面平行，越向深層的(de)關節軟骨(gu)細胞體(ti)積(ji)之間(jian)增(zeng)大呈(cheng)圓(yuan)形，細(xi)胞核(he)圓形或(huo)卵(luan)圓(yuan)形、染色(se)淺，細胞(bao)質(zhi)弱(ruo)嗜(shi)堿性(xing)，常(chang)見(jian)數(shu)量(liang)不(bu)壹的(de)脂(zhi)滴。成熟的(de)關節軟骨(gu)細胞多(duo)2-8個(ge)成(cheng)群分(fen)布於(yu)關節軟骨(gu)陷窩內(nei)，這些(xie)關節軟骨(gu)細胞由(you)同(tong)壹個(ge)母細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)增殖而(er)成(cheng)，稱(cheng)為同(tong)源細胞群。電鏡下(xia)，關節軟骨(gu)細胞有(you)突(tu)起(qi)和(he)皺(zhou)褶，細胞質內(nei)有(you)大(da)量(liang)的(de)粗面(mian)內(nei)質網(wang)和(he)發(fa)達的(de)高(gao)爾(er)基(ji)復(fu)合體(ti)及(ji)少量(liang)的(de)線(xian)粒(li)體(ti)。在(zai)組織(zhi)切(qie)片中(zhong)，關節軟骨(gu)細胞收(shou)縮(suo)為不(bu)規則(ze)形，在(zai)軟骨(gu)囊和(he)細胞之(zhi)間(jian)出(chu)現(xian)較大(da)的(de)腔(qiang)隙。體(ti)外培養(yang)的(de)關節軟骨(gu)細胞對(dui)於(yu)研(yan)究(jiu)其生(sheng)理(li)功能、藥物作(zuo)用(yong)以(yi)及(ji)各(ge)種(zhong)致病(bing)因素作用(yong)下的(de)病(bing)理(li)生理(li)改(gai)變(bian)具重(zhong)要意(yi)義(yi)。
方(fang)法(fa)簡介：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠關節軟骨(gu)采用(yong)膠原酶(mei)聯(lian)合中(zhong)性(xing)dan白酶(mei)消(xiao)化(hua)制備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠關節軟骨(gu)經Ⅱ型膠原蛋白免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可(ke)達90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌、酵(jiao)母和(he)真菌等。

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率(lv) 每(mei)3-4天(tian)換液壹次

生長特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形態(tai) 梭(suo)形、多(duo)角形

傳代特性(xing) 可傳5代左(zuo)右(you)；3代以(yi)內(nei)狀態(tai)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準備無(wu)菌的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心(xin)管(guan)、手術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌或其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制或購買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在(zai)有(you)效期內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物或(huo)組織(zhi)來(lai)源準備：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的(de)動(dong)物並(bing)進(jin)行相應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從(cong)已有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條件(jian)下，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數次，以(yi)去除(chu)血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕(qing)搖(yao)晃離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸液或(huo)小細胞團(tuan)時(shi)，加入含(han)血(xue)清的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與離心(xin)：用(yong)細胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然後將濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察細胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行計數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細胞(bao)的(de)生(sheng)長情(qing)況和(he)健康狀態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根據(ju)組織(zhi)類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化(hua)導致細胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過顯(xian)微鏡觀(guan)察細胞解離狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特(te)定生(sheng)長因子的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞需添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較弱(ruo)，可能需要(yao)包(bao)被培養(yang)皿（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時密(mi)度(du)建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導致接觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙染控(kong)制

1. 無菌操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材，避(bi)免(mian)交叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可能影(ying)響細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查細胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片增多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍(dong)存(cun)

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期代次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度降溫後液氮保(bao)存(cun)。