【概要(yao)描述】大(da)鼠(shu)主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞公司(si)正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：NCI-H1838非(fei)小(xiao)細胞肺(fei)癌(ai)大(da)鼠內(nei)括(kuo)約肌平滑肌細胞大鼠(shu)腸粘膜上(shang)皮(pi)細胞小(xiao)鼠腹(fu)腔(qiang)巨(ju)噬細胞大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)管上(shang)皮(pi)細胞大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球系(xi)膜細胞大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球內(nei)皮細胞大鼠(shu)腎(shen)足細胞大鼠(shu)輸尿(niao)管上(shang)皮(pi)細胞大鼠(shu)輸尿(niao)管平滑肌細胞

大(da)鼠主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮分(fen)離自主(zhu)動(dong)脈(mai)組(zu)織(zhi)；主(zhu)動(dong)脈(mai)是(shi)體循(xun)環的(de)動(dong)脈(mai)主(zhu)幹(gan)。其運(yun)行(xing)路徑(jing)為(wei)：升(sheng)主(zhu)動(dong)脈(mai)起(qi)於(yu)左心室(shi)，至右(you)側第2胸(xiong)肋關節(jie)高度(du)移行(xing)為(wei)主(zhu)動(dong)脈(mai)弓，弓行向左後至(zhi)第4胸(xiong)椎(zhui)體(ti)下(xia)緣(yuan)移(yi)行為(wei)降主(zhu)動(dong)脈(mai)；在(zai)第12胸(xiong)椎(zhui)體(ti)高(gao)度(du)穿膈(ge)的(de)主(zhu)動(dong)脈(mai)裂孔移(yi)行(xing)為(wei)腹(fu)主(zhu)動(dong)脈(mai)，以(yi)上(shang)為(wei)胸(xiong)主(zhu)動(dong)脈(mai)，至(zhi)第4腰椎(zhui)體(ti)下(xia)緣(yuan)分(fen)為(wei)左、右髂總(zong)動(dong)脈(mai)；髂總(zong)動(dong)脈(mai)在(zai)骶(di)髂關(guan)節(jie)高度(du)分為(wei)髂內(nei)、外動(dong)脈(mai)。主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞是覆蓋在(zai)主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)面(mian)的(de)單(dan)層細胞，可(ke)分泌(mi)壹(yi)系(xi)列(lie)血(xue)管活(huo)性(xing)物質而保(bao)持血(xue)管穩(wen)態(tai)，當其受到炎(yan)癥或其它因素刺(ci)激後穩態(tai)被(bei)破(po)壞(huai)而導致(zhi)壹(yi)些心血(xue)管疾(ji)病的(de)發生(sheng)。因此(ci)，主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞已成為(wei)研究(jiu)心血(xue)管疾(ji)病發病機制及(ji)治(zhi)療藥物的(de)工(gong)具(ju)。內(nei)皮細胞或血(xue)管內(nei)皮是(shi)壹(yi)薄(bo)層的(de)專(zhuan)門(men)上(shang)皮(pi)細胞，由壹(yi)層扁(bian)平細胞所組(zu)成。它形成血(xue)管的(de)內(nei)壁，是(shi)血(xue)管管腔(qiang)內(nei)血(xue)液及其(qi)他(ta)血(xue)管壁(bi)（單(dan)層鱗狀上(shang)皮(pi)）的(de)接口。內(nei)皮細胞是沿(yan)著整個(ge)循(xun)環系(xi)統(tong)，由心臟(zang)直至(zhi)最(zui)小(xiao)的(de)微(wei)血(xue)管。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮采(cai)用yi蛋白(bai)酶-膠(jiao)原(yuan)酶聯(lian)合(he)消化法(fa)結合(he)差(cha)速貼(tie)壁法(fa)、並(bing)通過內(nei)皮細胞專用培養基(ji)培(pei)養篩選(xuan)制(zhi)備而來(lai)，細胞總量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)主(zhu)動(dong)脈(mai)內(nei)皮經(jing)CD31免(mian)疫熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

本公司(si)所有(you)產品(pin)僅(jin)供科學(xue)實(shi)驗，不做(zuo)其他(ta)科學(xue)實(shi)驗外的(de)使(shi)用！

包(bao)被(bei)條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼(tie)壁

細胞形態(tai) 內(nei)皮細胞樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳2-3代(dai)

消化液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合(he)適的(de)消毒處理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與(yu)處理

1. 取材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消化。

細胞分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量消化酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖床或培養(yang)箱中(zhong)消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消化更均(jun)勻。

2. 終止消化：當組織(zhi)塊大(da)部分(fen)被(bei)消化成單(dan)細胞懸液或小(xiao)細胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。

3. 過濾與離(li)心：用細胞篩過濾細胞懸液，去(qu)除(chu)未(wei)消化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾液以適(shi)當的(de)轉速離(li)心，收集細胞沈澱。

細胞觀察(cha)與檢測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每(mei)天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細胞的(de)變(bian)化(hua)情況，如(ru)發現(xian)細胞汙染或異常，及時采取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采用臺(tai)盼藍染色等方(fang)法對細胞進行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了(le)解細胞的(de)生(sheng)長情況和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或非營(ying)養環境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜(za)質。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型選(xuan)擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過度消化導致(zhi)細胞損傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清或特定(ding)生(sheng)長因子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌或批次(ci)，減(jian)少(shao)細胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼壁(bi)能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯合(he)會導致(zhi)接觸抑制(zhi)和分(fen)化。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌操作

- 全程在(zai)超凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能影響細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細胞。

四、狀態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形態(tai)、密度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時更換(huan)培養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如細胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能提(ti)示汙染或營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞分裂次(ci)數有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫(wen)後液氮保(bao)存(cun)。

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