【概(gai)要(yao)描(miao)述】大(da)鼠膀(pang)胱移行上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)公(gong)司正在(zai)出售的產品：NCI-H1563非(fei)小細(xi)胞(bao)肺(fei)癌人(ren)扁(bian)桃體動脈內皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)扁(bian)桃體動脈平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)人(ren)腮腺腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)人(ren)扁(bian)桃體間質(zhi)細(xi)胞(bao)人(ren)頜(he)下(xia)腺囊(nang)腫(zhong)細(xi)胞(bao)人(ren)甲(jia)狀腺微血管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)扁(bian)桃體上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)扁(bian)桃體靜脈平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)人(ren)扁(bian)桃體成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)

大鼠膀(pang)胱上(shang)皮(pi)分(fen)離自膀(pang)胱組織(zhi)；膀(pang)胱是(shi)壹個(ge)儲(chu)尿器官，在(zai)哺乳類(lei)動物，它(ta)是(shi)由(you)平(ping)滑(hua)肌組成(cheng)的壹個(ge)囊(nang)形(xing)結構(gou)，位於骨(gu)盆(pen)內，其(qi)後(hou)端開(kai)口與(yu)尿道相(xiang)通。膀(pang)胱與(yu)尿道的交(jiao)界(jie)處(chu)有(you)括(kuo)約(yue)肌，可(ke)以(yi)控(kong)制尿液的排(pai)出。膀(pang)胱壁(bi)由(you)三(san)層(ceng)組織(zhi)組成(cheng)，由內(nei)向外為(wei)黏膜層、肌層和外膜。肌層由平(ping)滑(hua)肌纖維構成(cheng)，稱(cheng)為(wei)逼尿肌，逼尿肌收縮，可(ke)使膀(pang)胱內(nei)壓升高(gao)，壓迫尿液由尿道排(pai)出。在膀(pang)胱與(yu)尿道交(jiao)界(jie)處(chu)有(you)較厚的環(huan)形(xing)肌，形成(cheng)尿道內括(kuo)約(yue)肌。在括(kuo)約(yue)肌收縮能關(guan)閉(bi)尿道內口，防(fang)止(zhi)尿液自膀(pang)胱漏(lou)出。膀(pang)胱壁(bi)分(fen)為(wei)三(san)層(ceng)：即漿膜層（蜂窩脂(zhi)肪組織(zhi)）、肌肉層（逼尿肌、膀(pang)胱三(san)角(jiao)區(qu)肌）和黏膜層（極薄的壹層(ceng)移行上(shang)皮(pi)組織(zhi)）。其(qi)主(zhu)要(yao)作(zuo)用有(you)：①組成(cheng)過濾(lv)屏(ping)障內壁(bi)的重(zhong)要(yao)部(bu)分(fen)；②在炎(yan)癥(zheng)和致血栓物質(zhi)的刺激合成(cheng)必要(yao)的生物(wu)活(huo)性(xing)分(fen)子；③受損(sun)後影(ying)響(xiang)系膜細(xi)胞(bao)和上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)，進而影響(xiang)腎臟(zang)病變(bian)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分(fen)離的大鼠膀(pang)胱移行上(shang)皮(pi)采(cai)用yi蛋白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)混合消化法結(jie)合差速貼壁(bi)法(fa)，並通過(guo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)專(zhuan)用培(pei)養基(ji)培(pei)養(yang)篩選制(zhi)備(bei)而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分(fen)離的大鼠膀(pang)胱移行上(shang)皮(pi)經(jing)Cytokeratin-AE1/AE3免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所有(you)產(chan)品僅供(gong)科學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗(yan)外的使用！

包被(bei)條件 鼠尾膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天換液壹次(ci)

生長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)1-2代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌(jun)的培養皿、培養(yang)瓶、移液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器械等(deng)，並進行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合適的消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或購買合適的培養基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血清、雙抗(kang)等(deng)試劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合適的動物並進行相(xiang)應的麻(ma)醉(zui)或處(chu)死(si)，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材：在無菌(jun)條件下，迅速取出目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少對組織(zhi)的損(sun)傷，並去(qu)除多(duo)余的脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的組織(zhi)用預冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數次(ci)，以(yi)去(qu)除血液和雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的組織(zhi)塊放(fang)入含有(you)適(shi)量消(xiao)化酶的離心管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化壹段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心管(guan)，使消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織(zhi)塊大部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加入含血清的培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的組織(zhi)碎(sui)片，然後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離心，收集細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天用倒置顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行計數和活力檢測，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的生長(chang)情(qing)況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快速操作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後需立即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長(chang)時間暴露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根據(ju)組織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化時間需嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培養(yang)條件優化

1. 培(pei)養基(ji)選擇(ze)

- 使用含血清或特(te)定生長(chang)因(yin)子(zi)的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌或批次(ci)，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代時密度(du)建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯合會導(dao)致接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺操作(zuo)，使用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每天檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密度(du)及培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基(ji)（通常每 2-3 天換液壹次(ci)）。

- 異(yi)常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代），需及時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使用 DMSO+血清（或專(zhuan)用凍(dong)存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後液氮(dan)保存。