【概要描(miao)述(shu)】大(da)鼠膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞公司正在出(chu)售的(de)產品(pin)：NCI-H1568非小細(xi)胞肺癌人(ren)卵巢(chao)間(jian)質細胞人(ren)輸(shu)卵管(guan)上(shang)皮細(xi)胞人(ren)輸(shu)卵管(guan)平滑(hua)肌細(xi)胞人(ren)子(zi)宮內膜上(shang)皮細(xi)胞人(ren)乳(ru)腺(xian)上(shang)皮細(xi)胞人(ren)乳(ru)腺(xian)成(cheng)纖維(wei)細胞人(ren)乳(ru)腺(xian)導(dao)管(guan)上皮細(xi)胞人(ren)乳(ru)腺(xian)癌(ai)（腫(zhong)瘤(liu)）細(xi)胞人(ren)子(zi)宮內膜間(jian)質細胞

本公司所有(you)產品(pin)僅供(gong)科學(xue)實驗，不做其(qi)他(ta)科學(xue)實驗外的(de)使用！

大(da)鼠膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌分離自膀(pang)胱(guang)組(zu)織；膀(pang)胱(guang)是主(zhu)要由(you)平滑(hua)肌細(xi)胞組成(cheng)的(de)中(zhong)空器官，膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌的(de)舒(shu)張和(he)收(shou)縮使得膀(pang)胱(guang)分別儲(chu)存(cun)和(he)排(pai)出(chu)尿液。膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞表型的(de)調(tiao)控(kong)和可(ke)誘導(dao)壹氧化氮(dan)合酶的(de)表(biao)達(da)與(yu)多(duo)種(zhong)病(bing)理狀(zhuang)況有(you)關(guan)，包括(kuo)膀(pang)胱(guang)功能障礙。研(yan)究(jiu)表(biao)明，組(zu)織缺氧抑制(zhi)膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞的(de)增(zeng)殖(zhi)，膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞的(de)分化依賴(lai)於(yu)膀(pang)胱(guang)上(shang)皮細(xi)胞釋放的(de)因(yin)子(zi)。膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞外基質的(de)分泌(mi)表型(xing)可(ke)通過細胞所經(jing)歷的(de)機(ji)械(xie)變形(xing)頻(pin)率而(er)改(gai)變。平滑(hua)肌是許(xu)多(duo)疾(ji)病(bing)中的(de)共(gong)同(tong)路徑(jing)，因(yin)此(ci)，了解在疾(ji)病(bing)發生(sheng)及(ji)持(chi)續過程(cheng)中平滑(hua)肌怎(zen)樣(yang)變化，這是治療方(fang)法(fa)取(qu)得進(jin)展的(de)重(zhong)要(yao)壹步。膀(pang)胱(guang)壁由(you)三(san)層組(zu)織(zhi)組(zu)成(cheng)，由(you)內而(er)外為(wei)黏(nian)膜層(ceng)、肌層(ceng)和(he)外膜。其(qi)中(zhong)，肌層(ceng)主(zhu)要由(you)平滑(hua)肌構(gou)成(cheng)。膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞原代分離培(pei)養(yang)3天(tian)後，可(ke)見細(xi)胞貼壁伸(shen)展，細(xi)胞形態(tai)大(da)小不(bu)壹，呈梭(suo)形(xing)、不規(gui)則形(xing)、三(san)角形(xing)或(huo)扇形(xing)，核(he)卵圓形(xing)、居(ju)中；2周後細胞匯合，多(duo)數(shu)細(xi)胞伸展呈長梭(suo)形，胞漿豐富，有(you)分枝狀突(tu)起(qi)，細(xi)胞平行排(pai)列(lie)成(cheng)單層或(huo)部(bu)分區域(yu)多(duo)層(ceng)重(zhong)疊(die)生長，高(gao)低起(qi)伏；細胞密度(du)低(di)時(shi)，常交(jiao)織(zhi)成(cheng)網(wang)狀；密(mi)度(du)高(gao)時(shi)，則(ze)排(pai)列(lie)為(wei)旋(xuan)渦狀(zhuang)或柵(zha)欄(lan)狀。傳(chuan)代後細胞生長較(jiao)快，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯合，並(bing)保(bao)持(chi)上(shang)述(shu)形(xing)態(tai)學(xue)特(te)征(zheng)和(he)生(sheng)長特(te)點。體外培養(yang)膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌細(xi)胞不僅為(wei)組(zu)織(zhi)工(gong)程(cheng)膀(pang)胱(guang)、尿道(dao)提(ti)供(gong)種植(zhi)細胞的(de)必要手(shou)段(duan)，也是研(yan)究(jiu)平滑(hua)肌瘤(liu)的(de)基(ji)礎(chu)與前提(ti)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司實驗室分離的(de)大(da)鼠膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶-膠原(yuan)酶聯(lian)合消(xiao)化法(fa)結(jie)合差速貼壁法(fa)制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞總量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測：

公司實驗室分離的(de)大(da)鼠膀(pang)胱(guang)平滑(hua)肌經(jing)α-SMA免疫熒光鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

培養(yang)基 含FBS、生長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率 每2-3天(tian)換液壹次

生長特(te)性 貼壁

細胞形態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細胞樣(yang)

傳代特(te)性 可(ke)傳5代左(zuo)右；3代以(yi)內狀態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試劑準備(bei)：配制(zhi)或購買合適的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗動物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備(bei)：根(gen)據實驗需求，選(xuan)擇合適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行相應(ying)的(de)麻醉(zui)或處死(si)，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織；或從已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲取(qu)組(zu)織。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少對(dui)組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結締組(zu)織等(deng)非目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後續消(xiao)化。

細胞分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入含有(you)適量消(xiao)化酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單細胞懸液或(huo)小細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與(yu)離心：用細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸液，去(qu)除未消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察與檢測

1. 日常觀(guan)察：每天(tian)用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞汙染或異常，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措施。
2. 細胞計數(shu)與活(huo)力檢(jian)測：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞進(jin)行計數(shu)和活(huo)力檢(jian)測，以了解細(xi)胞的(de)生(sheng)長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹、取材(cai)與分離

1. 快速(su)操(cao)作

- 組織取材(cai)後需立即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露於(yu)室溫(wen)或非營養(yang)環境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織，去(qu)除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇

- 根據組織類型選擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過度(du)消(xiao)化導致(zhi)細胞損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條件優(you)化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇

- 使用含(han)血清(qing)或(huo)特(te)定生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞需添加(jia)胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養(yang)基品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少細胞適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原代細(xi)胞貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需要(yao)包被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分化。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作，使用壹次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添加(jia)雙(shuang)抗，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能影(ying)響細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原體汙染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞。

四、狀態(tai)監控

1. 日常觀(guan)察

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞變圓、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞分裂次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議(yi)使用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存(cun)。