【概要描(miao)述(shu)】人(ren)膀(pang)胱(guang)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產品：KM9304轉化人(ren)淋巴細(xi)胞(bao)大鼠(shu)冠狀動(dong)脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao)293T(STR鑒(jian)定正確)小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)NIH/3T3（種屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)脊索(suo)瘤細(xi)胞(bao)U-CH1(STR鑒(jian)定正確)小(xiao)鼠(shu)宮(gong)頸癌細(xi)胞(bao)帶熒(ying)光(guang)酶(mei)U14+LUC（種屬鑒(jian)定）人(ren)結腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)LS 180(STR鑒(jian)定正確)小(xiao)鼠(shu)小(xiao)膠質(zhi)細(xi)胞(bao)Bv-2 （種屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)甲狀腺(xian)乳頭(tou)狀癌細(xi)胞(bao)IHH4(STR鑒(jian)定正確)人(ren)皮(pi)膚鱗狀細(xi)胞(bao)癌細(xi)胞(bao)Co

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品僅(jin)供科(ke)學(xue)實驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的使用！

人(ren)膀(pang)胱(guang)成纖(xian)維(wei)分(fen)離(li)自(zi)膀(pang)胱(guang)組織(zhi)；膀(pang)胱(guang)是(shi)壹(yi)個(ge)儲(chu)尿(niao)器官(guan)，在哺乳類(lei)動(dong)物(wu)，它(ta)是由平(ping)滑肌(ji)組(zu)成的壹(yi)個(ge)囊形結構(gou)，位(wei)於骨(gu)盆內，其後(hou)端(duan)開口與尿道相通(tong)。膀胱(guang)與尿道的交界處(chu)有括(kuo)約(yue)肌，可(ke)以(yi)控(kong)制尿液的排出。膀胱(guang)壁由三(san)層(ceng)組織(zhi)組(zu)成，由內向(xiang)外(wai)為黏(nian)膜(mo)層(ceng)、肌層和(he)外(wai)膜(mo)。肌(ji)層由平(ping)滑肌(ji)纖(xian)維(wei)構(gou)成，稱為逼(bi)尿(niao)肌(ji)，逼(bi)尿(niao)肌(ji)收縮，可(ke)使膀胱(guang)內壓(ya)升(sheng)高(gao)，壓(ya)迫(po)尿(niao)液(ye)由尿(niao)道排(pai)出。在膀胱與尿(niao)道交(jiao)界處(chu)有較(jiao)厚的環形肌(ji)，形成尿(niao)道內括約(yue)肌。在括約(yue)肌收縮能關閉(bi)尿(niao)道內口，防(fang)止尿(niao)液(ye)自(zi)膀胱(guang)漏(lou)出。膀胱(guang)壁分(fen)為三(san)層：即(ji)漿(jiang)膜(mo)層(ceng)（蜂窩(wo)脂肪組(zu)織(zhi)）、肌(ji)肉(rou)層(ceng)（逼(bi)尿(niao)肌(ji)、膀胱三(san)角(jiao)區(qu)肌(ji)）和(he)黏(nian)膜(mo)層(ceng)（極薄的壹(yi)層(ceng)移行(xing)上(shang)皮(pi)組織(zhi)）。成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松(song)結締組織(zhi)的主(zhu)要細(xi)胞(bao)成分(fen)，由胚(pei)胎(tai)時期(qi)的間充質(zhi)細(xi)胞(bao)分(fen)化而(er)來。成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)較(jiao)大，輪(lun)廓(kuo)清楚，多(duo)為突(tu)起的紡錘(chui)形或(huo)星形的扁平狀結構(gou)，其(qi)細(xi)胞(bao)核呈(cheng)規(gui)則的卵圓形，核(he)仁(ren)大(da)而(er)明(ming)顯。成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功能活動(dong)旺盛，細(xi)胞(bao)質嗜(shi)弱堿(jian)性(xing)，具(ju)明(ming)顯的蛋白質(zhi)合(he)成和(he)分(fen)泌活(huo)動(dong)，在壹(yi)定條件下，它(ta)可(ke)以(yi)實(shi)現跟(gen)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的互(hu)相轉化；成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)對不同(tong)程(cheng)度(du)的細(xi)胞(bao)變性(xing)、壞(huai)死(si)和(he)組織(zhi)缺損的修復有(you)著十(shi)分(fen)重要的作(zuo)用(yong)。剛(gang)分(fen)離(li)的膀胱成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)呈圓(yuan)形、折(zhe)光(guang)性(xing)良好，懸浮於(yu)培養基中。30min細(xi)胞(bao)貼壁，其中部分(fen)開始伸(shen)出偽足(zu)，表現為(wei)小(xiao)的突起；6h後(hou)細(xi)胞(bao)基本貼壁wan全，伸展(zhan)成梭(suo)形，胞(bao)核清晰，分(fen)布較(jiao)均勻(yun)，散在生長，不聚(ju)集成團(tuan)；細(xi)胞(bao)生長(chang)迅(xun)速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈(cheng)融合(he)狀態，細(xi)胞(bao)排列(lie)緊密(mi)，有(you)的交叉(cha)重(zhong)疊生長，平坦(tan)、胞(bao)體較(jiao)大，細(xi)胞(bao)質透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核較(jiao)大，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形，顏(yan)色(se)淡。細(xi)胞(bao)融合(he)，並彼此連(lian)接成網狀；細(xi)胞(bao)呈突(tu)起的紡錘(chui)形或(huo)星形的扁平分(fen)布。膀胱成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)分(fen)泌的生長因(yin)子是(shi)壹(yi)種(zhong)具有多(duo)功能的促有(you)絲(si)分(fen)裂原，研究(jiu)已表明(ming)其(qi)參與惡(e)性(xing)腫瘤的形成過程(cheng)。近年來(lai)，堿(jian)性(xing)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子在膀胱癌發(fa)病(bing)過程(cheng)中的作(zuo)用(yong)、與(yu)生(sheng)物(wu)學(xue)行(xing)為(wei)之(zhi)間(jian)的關系以(yi)及治療(liao)上(shang)的應用已(yi)受(shou)到(dao)重視(shi)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的人(ren)膀(pang)胱(guang)成纖(xian)維(wei)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶(mei)-膠(jiao)原酶混合消化法(fa)結合差速(su)貼壁法制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的人(ren)膀(pang)胱(guang)成纖(xian)維(wei)經Vimentin免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵母(mu)和(he)真菌(jun)等。

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準備(bei)：準(zhun)備無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器(qi)械等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合(he)適(shi)的消毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑準備(bei)：配制或購買(mai)合適(shi)的培養基、消化酶(mei)（如(ru)、膠原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣本庫(ku)中獲取組織(zhi)。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速取出目標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損傷，並去除多(duo)余的脂肪、結締組織(zhi)等非(fei)目的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的組織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗數次，以(yi)去(qu)除血液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量(liang)消化酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖床或培(pei)養箱中消化壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被消化成單細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血清的培養基終止消化。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未消化的組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當的轉速離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每(mei)天(tian)用倒置顯微鏡觀察細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或異常，及時采取相應措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢測：在需(xu)要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍染色(se)等方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計數(shu)和(he)活力(li)檢測，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生長情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀態。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養環境。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消化酶(mei)，避(bi)免過度(du)消化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯微鏡觀察細(xi)胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養基選(xuan)擇

- 使用含(han)血清或特定生長因子的培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更換培養基品牌或批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要包被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度(du)建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操作(zuo)，使用壹(yi)次(ci)性耗(hao)材，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培(pei)養基中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可(ke)能影響細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原體汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天(tian)檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培養基顏(yan)色(se)，及時更換培養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙染或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍存早(zao)期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議使用 DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍存培養基），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。