PCR試劑盒(he)使(shi)用前後(hou)的(de)註意(yi)事項

　　PCR試(shi)劑(ji)盒裏分好(hao)幾部(bu)分，最重(zhong)要(yao)的(de)是PCR反(fan)應(ying)體系(xi)：DNA聚合(he)酶(mei)，鎂(mei)離(li)子，引物（測2個(ge)基(ji)因(yin)和(he)1個(ge)內(nei)標需要(yao)3對引物），探(tan)針(zhen)（也(ye)要(yao)3對探(tan)針(zhen)，發出(chu)三(san)種(zhong)波(bo)長的(de)熒光），逆(ni)轉錄酶(mei)，dNTP（ATUCG會(hui)用部(bu)分U代(dai)替(ti)T），還(hai)有用於抗幹(gan)擾(rao)的(de)UDG酶（正(zheng)常(chang)的(de)DNA只有(you)ATCG，PCR擴(kuo)增出(chu)來(lai)的(de)DNA會(hui)有(you)AT（會(hui)用部(bu)分U代(dai)替(ti)T）CG，這樣擴增出(chu)來(lai)的(de)DNA鏈中有(you)U，UDG酶能切(qie)斷含U的(de)DNA鏈，所以(yi)擴增DNA在(zai)空氣(qi)中形(xing)成(cheng)的(de)氣(qi)溶(rong)膠，不(bu)會(hui)影響其(qi)他(ta)樣(yang)本）、RNA酶(mei)抑(yi)制劑（空氣(qi)中液(ye)體裏全都是(shi)RNA酶(mei)，會(hui)降(jiang)解(jie)病(bing)毒的(de)RNA）、Taq酶的(de)抗體（Hotstart，常(chang)溫(wen)下能抑(yi)制Taq酶的(de)活性(xing)，PCR擴(kuo)增時(shi)高溫(wen)讓其(qi)失(shi)活(huo)，Taq酶(mei)就在高溫(wen)時(shi)恢(hui)復(fu)活(huo)性(xing)開(kai)始擴增了(le)）。

　　PCR試(shi)劑盒(he)註意(yi)事項

　　壹、試(shi)劑盒(he)使(shi)用註意(yi)事項

　　（1）所有試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)照(zhao)適(shi)合(he)溫(wen)度儲(chu)存。請(qing)勿反(fan)復(fu)凍(dong)融。

　　（2）使(shi)用後(hou)均需要(yao)對操作區(qu)進(jin)行(xing)消毒，消毒方(fang)式(shi)可以(yi)采用75%乙醇或(huo)核(he)酸(suan)消除劑(ji)等(deng)。耗(hao)材均(jun)需使用商品化(hua)的(de)無(wu)酶耗(hao)材。

　　二(er)、樣本註意(yi)事項

　　（1）細(xi)胞在含/不(bu)含血清的(de)環境(jing)中均(jun)可直接(jie)使(shi)用試(shi)劑盒(he)。

　　（2）擴(kuo)增2kb以(yi)內(nei)片段，細(xi)胞樣品濃度(du)不(bu)超(chao)過(guo)1000個(ge)細(xi)胞。如若(ruo)擴增片段超(chao)過(guo)2kb，可適當提高細(xi)胞濃度(du)。

　　（3）不(bu)同(tong)組織(zhi)使(shi)用不(bu)同(tong)的(de)眼科(ke)剪和(he)眼(yan)科(ke)鑷進(jin)行(xing)處理(li)，防(fang)止(zhi)交(jiao)叉汙染導致(zhi)檢測結果偏差(cha)。

　　三(san)、試劑(ji)盒使用過(guo)程中註意(yi)事項

　　（1）PCR過(guo)程中推(tui)薦(jian)使(shi)用陰(yin)性(xing)對照(zhao)和(he)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。

　　（2）整(zheng)個(ge)過(guo)程中使(shi)用的(de)吸(xi)頭、離心(xin)管等(deng)耗(hao)材應(ying)丟棄在(zai)含有75%乙醇或(huo)核(he)酸(suan)消除劑(ji)的(de)容器中，防(fang)止(zhi)形(xing)成(cheng)環(huan)境(jing)汙染。

　　（4）PCR產物(wu)3’末端含有A，可直接(jie)進(jin)行(xing)TA克隆。

　　四、試(shi)劑(ji)盒(he)使用後(hou)註意(yi)事項

　　（1）PCR反(fan)應(ying)完(wan)成(cheng)後(hou)，嚴禁在實(shi)驗(yan)區開(kai)蓋。應在(zai)汙(wu)染區進(jin)行(xing)瓊脂(zhi)糖(tang)凝膠電泳(yong)，防止(zhi)氣(qi)溶(rong)膠汙染。

　　（2）為防(fang)止(zhi)試(shi)劑(ji)盒(he)汙染，請(qing)勿將(jiang)不(bu)同(tong)批號試劑(ji)盒(he)混用。