大(da)鼠(shu)凝(ning)溶(rong)膠(jiao)蛋白（Gelsolin）ELISA試劑盒(he)操作步驟

大(da)鼠(shu)凝(ning)溶(rong)膠(jiao)蛋白（Gelsolin）ELISA試(shi)劑盒(he)操作步驟:

1. 標(biao)準品(pin)的稀(xi)釋(shi)與(yu)加(jia)樣(yang)：在酶標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)設(she)標(biao)準品(pin)孔10孔(kong)，在di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)100μl，然(ran)後(hou)在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後(hou)從(cong)di壹(yi)孔、第二(er)孔(kong)中(zhong)各(ge)取100μl分別(bie)加(jia)到(dao)第三(san)孔(kong)和(he)第四孔，再在第三(san)、第四孔分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後(hou)在(zai)第三(san)孔(kong)和(he)第四孔中(zhong)先(xian)各(ge)取50μl棄(qi)掉，再各(ge)取50μl分別(bie)取(qu)50μl分別(bie)加(jia)到(dao)第七、第八(ba)孔中(zhong)，再在第七、第八(ba)孔中(zhong)分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後(hou)從(cong)第七、第八(ba)孔中(zhong)加(jia)到(dao)第五(wu)、第六(liu)孔(kong)中(zhong)，再在第五(wu)、第六(liu)孔(kong)中(zhong)分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50ul，混(hun)勻；混勻後(hou)從(cong)第五(wu)、第六(liu)孔(kong)中(zhong)各(ge)分別(bie)取(qu)50μl加(jia)到(dao)第九、第十(shi)孔(kong)中(zhong)，再在第九第十(shi)孔(kong)分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後(hou)從(cong)第九第十(shi)孔(kong)中(zhong)各(ge)取50μl棄(qi)掉。（稀(xi)釋(shi)後(hou)各(ge)孔加(jia)樣(yang)量都為50μl，濃(nong)度分別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣(yang)：分別(bie)設(she)空(kong)白孔（空白對照孔不加(jia)樣(yang)品及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余各(ge)步操作相(xiang)同）、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)。在酶標包(bao)被(bei)板上(shang)待測(ce)樣(yang)品孔(kong)中先加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待測(ce)樣(yang)品10μl（樣(yang)品最(zui)終稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)於(yu)酶標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡量不觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻。

3. 溫(wen)育：用封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。

4. 配(pei)液：將30（48T的20倍(bei)）倍濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30（48T的20倍(bei)）倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用。

5. 洗(xi)滌(di)：小心揭掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如此重復(fu)5次(ci)，拍幹。

6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔除(chu)外(wai)。

7. 溫(wen)育：操作同3。

8. 洗(xi)滌(di)：操作同5。

9. 顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混(hun)勻，37℃避(bi)光顯(xian)色15分鐘(zhong).

10. 終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。

11. 測(ce)定：以空白空調(tiao)零，450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各(ge)孔的吸(xi)光度（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止液後(hou)15分鐘(zhong)。