植(zhi)物(wu)激素(su)脫(tuo)落酸(suan)（ABA）ELISA免(mian)費代(dai)測試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)

植(zhi)物(wu)激素(su)脫(tuo)落酸(suan)（ABA）ELISA免(mian)費代(dai)測試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟(zhou)

1. 標(biao)準品的稀(xi)釋與(yu)加樣：在(zai)酶標包(bao)被(bei)板(ban)上設(she)標(biao)準品(pin)孔10孔，在(zai)di壹、第(di)二(er)孔中分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)100μl，然後在(zai)di壹、第(di)二(er)孔中加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然後從di壹孔、第(di)二(er)孔中各(ge)取(qu)100μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第(di)三(san)孔和第(di)四(si)孔，再在(zai)第(di)三(san)、第(di)四(si)孔分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)；然後在(zai)第(di)三(san)孔和第(di)四(si)孔中先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄掉，再(zai)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第(di)七(qi)、第(di)八孔中，再(zai)在(zai)第(di)七(qi)、第(di)八孔中分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)七(qi)、第(di)八孔中加(jia)到(dao)第(di)五、第(di)六孔中，再(zai)在(zai)第(di)五、第(di)六孔中分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50ul，混(hun)勻(yun)；混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)五、第(di)六孔中各(ge)分(fen)別(bie)取(qu)50μl加(jia)到(dao)第(di)九(jiu)、第(di)十(shi)孔中，再(zai)在(zai)第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔分別(bie)加(jia)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混(hun)勻(yun)後(hou)從(cong)第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔中各(ge)取(qu)50μl棄掉。（稀(xi)釋後(hou)各(ge)孔加樣(yang)量都(dou)為(wei)50μl，濃(nong)度分別(bie)為(wei)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加(jia)樣：分(fen)別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步操作(zuo)相同）、待測(ce)樣(yang)品孔。在(zai)酶標包(bao)被(bei)板(ban)上待測(ce)樣(yang)品孔中先(xian)加樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)40μl，然後再加(jia)待測(ce)樣(yang)品10μl（樣品最終稀(xi)釋度為5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加(jia)於(yu)酶標板(ban)孔底部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔壁，輕(qing)輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。

3. 溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後置37℃溫(wen)育30分鐘。

4. 配(pei)液(ye)：將(jiang)30（48T的20倍）倍濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水30（48T的20倍）倍稀(xi)釋後(hou)備用(yong)。

5. 洗(xi)滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復5次，拍幹(gan)。

6. 加酶：每孔加入(ru)酶標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔除外(wai)。

7. 溫育：操作(zuo)同3。

8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同5。

9. 顯(xian)色：每孔先(xian)加入顯(xian)色劑A50μl，再(zai)加入(ru)顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色15分鐘.

10. 終止：每(mei)孔加終止液(ye)50μl，終止反(fan)應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

11. 測定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波長(chang)依序測量各(ge)孔的吸光(guang)度（OD值）。 測(ce)定應(ying)在(zai)加終止液(ye)後15分(fen)鐘。