在(zai)生命科學與(yu)醫學研究(jiu)領域(yu),對(dui)細胞因(yin)子(zi)、激(ji)素、抗(kang)體(ti)及其(qi)他生(sheng)物標誌(zhi)物的定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)是(shi)揭示疾(ji)病機(ji)制(zhi)、評估(gu)藥物療(liao)效和(he)理解(jie)免(mian)疫(yi)調(tiao)控的(de)關鍵(jian)環節。其(qi)中,酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附測定(ding)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)因(yin)其(qi)高(gao)靈(ling)敏度、高(gao)特異(yi)性和(he)操(cao)作(zuo)簡便(bian)等(deng)優(you)勢,成為(wei)實驗室中常(chang)用(yong)的蛋(dan)白(bai)檢(jian)測(ce)技(ji)術之(zhi)壹。而針(zhen)對(dui)小(xiao)鼠(shu)模(mo)型(xing)開發(fa)的小(xiao)鼠(shu)ELISA試劑盒,則是(shi)連接基(ji)礎(chu)研究(jiu)與(yu)臨(lin)床(chuang)前驗證(zheng)的(de)重(zhong)要橋梁(liang)。 小(xiao)鼠作(zuo)為廣(guang)泛(fan)使(shi)用(yong)的實驗動物模(mo)型(xing),其(qi)基因(yin)組與(yu)人(ren)類(lei)高(gao)度同(tong)源,且(qie)具有(you)繁(fan)殖(zhi)快、成本(ben)低、遺傳背(bei)景清(qing)晰(xi)等優(you)點,被(bei)廣(guang)泛(fan)應用(yong)於(yu)腫瘤(liu)、自身免(mian)疫(yi)病、感(gan)染(ran)、神經退(tui)行性疾病等(deng)研究(jiu)領域(yu)。然而,要準確(que)解(jie)讀(du)小鼠(shu)體內的(de)生理或病理變化,必須(xu)對(dui)其(qi)血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組織勻(yun)漿(jiang)液(ye)或(huo)細胞培(pei)養上(shang)清(qing)中(zhong)的(de)目標蛋白進行精確定(ding)量(liang)。小鼠(shu)ELISA試劑盒正是(shi)為(wei)此量身定(ding)制(zhi)的標(biao)準化工(gong)具。
這類(lei)試劑盒通(tong)常(chang)采用(yong)“雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心法”原(yuan)理:預(yu)先(xian)包被(bei)在(zai)微(wei)孔板(ban)上(shang)的捕獲(huo)抗(kang)體(ti)特(te)異(yi)性識(shi)別目標小鼠蛋白(bai);加入(ru)樣本(ben)後,目標蛋白被(bei)固定(ding);隨(sui)後加入(ru)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)與(yu)之(zhi)結合(he)形成“抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-抗(kang)體(ti)”復(fu)合(he)物;最(zui)後通(tong)過(guo)酶標二抗(kang)催(cui)化底物顯色(se),顏色(se)深淺與(yu)目標蛋白濃度(du)成正比(bi),可(ke)通(tong)過(guo)酶標儀讀(du)取吸(xi)光度(du)並換算為具(ju)體(ti)濃(nong)度(du)。整(zheng)個(ge)流(liu)程可(ke)在(zai)3–4小時(shi)內完(wan)成,靈(ling)敏度可(ke)達pg/mL級(ji)別,遠(yuan)優(you)於(yu)傳統(tong)Western Blot或免(mian)疫(yi)組化方法。
目前市場上(shang)已有(you)針(zhen)對(dui)數(shu)百(bai)種(zhong)小鼠蛋(dan)白(bai)的(de)ELISA試劑盒,涵蓋(gai)IL-6、TNF-α、IFN-γ等(deng)炎(yan)癥因子,胰島(dao)素(su)、瘦素(su)等(deng)代謝(xie)激(ji)素,以(yi)及VEGF、TGF-β等生(sheng)長(chang)因子。優(you)質試劑盒不(bu)僅(jin)具(ju)備高(gao)批內/批間(jian)重(zhong)復(fu)性(CV<10%),還經(jing)過(guo)嚴格交(jiao)叉(cha)反(fan)應驗證(zheng),確(que)保(bao)對(dui)其(qi)他物種或同(tong)家族(zu)蛋白(bai)無幹(gan)擾(rao)。此外(wai),部(bu)分廠(chang)商(shang)提(ti)供(gong)預(yu)包(bao)被(bei)板、即(ji)用型(xing)標(biao)準(zhun)品(pin)和(he)優(you)化緩(huan)沖(chong)液(ye),極大(da)簡化實驗步驟(zhou),降(jiang)低操(cao)作(zuo)誤差(cha)。
然而,使(shi)用(yong)小鼠ELISA試劑盒仍需(xu)註(zhu)意(yi)若幹(gan)細節。首(shou)先(xian),樣本(ben)采集(ji)與(yu)處理必須(xu)規範(fan),避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融導致蛋白(bai)降(jiang)解(jie);其(qi)次,應根(gen)據預(yu)期濃度(du)範(fan)圍(wei)選(xuan)擇合(he)適量(liang)程的(de)試劑盒,必要時(shi)進(jin)行預(yu)實(shi)驗稀(xi)釋(shi);再(zai)者(zhe),不(bu)同(tong)品牌試劑盒的抗(kang)體(ti)來源(如單克隆(long)vs多克(ke)隆)和(he)檢(jian)測(ce)體(ti)系可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)差(cha)異(yi),跨(kua)研究(jiu)比(bi)較(jiao)時(shi)需(xu)謹慎(shen)。
隨(sui)著(zhe)精準(zhun)醫學與(yu)轉化研究(jiu)的(de)深(shen)入(ru),小(xiao)鼠(shu)ELISA試劑盒的重(zhong)要性愈發(fa)凸(tu)顯。它(ta)不(bu)僅(jin)助(zhu)力科(ke)研人(ren)員(yuan)快速獲(huo)取可(ke)靠(kao)數(shu)據,也(ye)為(wei)新藥篩(shai)選(xuan)、疫(yi)苗(miao)評價和(he)生(sheng)物標誌(zhi)物發現提供(gong)了(le)堅(jian)實(shi)支(zhi)撐(cheng)。未來,隨著多重檢(jian)測(ce)(Multiplex ELISA)和(he)自動化平臺(tai)的(de)發(fa)展,小鼠(shu)ELISA技(ji)術將(jiang)進壹步提(ti)升通(tong)量與(yu)效率,持續推動(dong)生命(ming)科(ke)學前沿(yan)探(tan)索。