谷研試(shi)劑(ji)-標(biao)準(zhun)品的制備

              谷研(yan)試(shi)劑(ji)-標(biao)準(zhun)品的制備

．標(biao)準(zhun)品的制備：標(biao)準(zhun)品的制備是非常復(fu)雜(za)的問題(ti)，也(ye)是標(biao)記(ji)免(mian)疫分(fen)析(xi)中比較難(nan)於制備的壹個成分(fen)。以(yi)下(xia)討(tao)論的是實(shi)驗室標(biao)準(zhun)品(或商品化(hua)試(shi)劑(ji)中(zhong)標(biao)準(zhun)品)的制備。
   ）基(ji)質的制備：如前所述(shu)，作為(wei)標(biao)準(zhun)品的介(jie)質(zhi)(基(ji)質)成分(fen)應(ying)與被測(ce)樣(yang)品相(xiang)同。對(dui)大(da)多(duo)數(shu)用(yong)於測(ce)定血(xue)清(qing)中某物質的標(biao)準(zhun)品，應(ying)用(yong)不含(han)

被測(ce)物質的零(ling)血(xue)清(qing)制備，以(yi)求(qiu)反應(ying)的介(jie)質(zhi)環境(jing)相(xiang)當。但有時零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)的制備十(shi)分(fen)困(kun)難(nan)，所以(yi)有些(xie)標(biao)準(zhun)品用(yong)適當的緩沖(chong)液(ye)制備，並在(zai)緩沖(chong)液(ye)中加(jia)入(ru)壹定量的載(zai)體蛋(dan)白(壹般用(yong)%～2%的牛血(xue)清(qing)白蛋(dan)白)，以(yi)便使其(qi)與樣(yang)品的介(jie)質(zhi)環境(jing)相(xiang)近。
   零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)的制備方法(fa)有：
   ()吸附(fu)法(fa)：血(xue)清(qing)中小(xiao)分(fen)子(zi)物質如三碘(dian)甲狀(zhuang)腺(xian)原氨酸(suan)(T3)、甲狀(zhuang)腺(xian)素(T4)等，可用(yong)活性(xing)炭(tan)吸附(fu)去除。這(zhe)種方(fang)法(fa)簡便，但待測(ce)物質難(nan)以(yi)清(qing)除幹凈(jing)，而且大(da)分(fen)子(zi)活性(xing)物質不(bu)能用(yong)此法(fa)進(jin)行制備。 
   (2)反復凍融(rong)法(fa)：對(dui)大(da)分(fen)子(zi)活性(xing)物質可選(xuan)用(yong)低值(zhi)血(xue)清(qing)，經反復凍融(rong)使(shi)被測(ce)物質失(shi)活。用(yong)這種(zhong)方(fang)法(fa)可使(shi)某些(xie)蛋(dan)白類(lei)激素大部分(fen)失(shi)活，但(dan)也(ye)難(nan)以(yi)得(de)到真(zhen)正(zheng)的零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)。 
   (3)親和(he)層析(xi)法(fa)：用(yong)特(te)異(yi)性(xing)抗體制備親和層析(xi)柱(zhu)，用(yong)以(yi)吸附(fu)被(bei)測(ce)抗原。用(yong)這種(zhong)方(fang)法(fa)可以(yi)得(de)到高(gao)質量(liang)的零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)，但本(ben)法(fa)比較復雜(za)而且成本(ben)也(ye)高(gao)。
    2）標(biao)準(zhun)物純品的選(xuan)擇(ze)：應(ying)選擇高(gao)化(hua)學(xue)純和(he)高(gao)免疫(yi)純的純品作標(biao)準(zhun)品。其中(zhong)免(mian)疫純尤為重(zhong)要(yao)，在(zai)標(biao)準(zhun)品中不(bu)應(ying)含(han)有與被測(ce)物質有交叉反應(ying)的物質。
    3）標(biao)準(zhun)品的制備：先(xian)用(yong)零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)配(pei)置(zhi)高(gao)濃度(du)的標(biao)準(zhun)品，然後根據實(shi)驗系(xi)統(tong)的要(yao)求(qiu)，用(yong)零(ling)值(zhi)血(xue)清(qing)將(jiang)高(gao)值(zhi)血(xue)清(qing)稀(xi)釋至(zhi)應(ying)有的濃度(du)，制成符(fu)合預(yu)定要求(qiu)的，由(you)不(bu)同濃度(du)組成的系(xi)列標(biao)準(zhun)品。2．標(biao)準(zhun)品的鑒定
）免疫(yi)活性(xing)的鑒定：選用(yong)高(gao)特(te)異(yi)性(xing)的抗血(xue)清(qing)分(fen)別(bie)作*標(biao)準(zhun)品(如WHO的參(can)考(kao)品或國(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)品)的待鑒定標(biao)準(zhun)品的劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)，並觀(guan)察兩條(tiao)曲線(xian)的平(ping)行性(xing)。如兩條(tiao)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)平(ping)行，說(shuo)明(ming)兩(liang)種(zhong)物質對(dui)同(tong)壹抗體有相(xiang)同的親(qin)和(he)力，即(ji)二者是同質性(xing)物質。如兩條(tiao)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)不(bu)平(ping)行，說(shuo)明(ming)兩(liang)種(zhong)物質具(ju)有異(yi)質(zhi)性(xing)，因而這壹待鑒定的標(biao)準(zhun)品是不能使用(yong)的。
2）濃度(du)的標(biao)定：用(yong)已(yi)鑒定過(guo)的，免(mian)疫(yi)活性(xing)合(he)格的標(biao)準(zhun)品，與*的標(biao)準(zhun)品作濃度(du)相(xiang)同的劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)。此時，兩條(tiao)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)應(ying)該是基(ji)本重(zhong)合(he)的。如果(guo)兩者平(ping)行但(dan)不重(zhong)合(he)，則(ze)取(qu)兩條(tiao)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)的50%結合處(chu)的相(xiang)應(ying)劑(ji)量(liang)( ED50 )計(ji)算(suan)二(er)者的換(huan)算系(xi)數(shu)，然後調(tiao)整待鑒定標(biao)準(zhun)品的濃度(du)，直至(zhi)使兩(liang)條(tiao)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線(xian)*或(huo)基(ji)本重(zhong)合(he)為(wei)止(zhi)。
3．標(biao)準(zhun)品的計(ji)量(liang)：許(xu)多(duo)小(xiao)分(fen)子(zi)抗原或(huo)半(ban)抗原已(yi)能得(de)到純品或進(jin)行合(he)成，它(ta)們對(dui)作為(wei)標(biao)準(zhun)品的要(yao)求(qiu)可以(yi)得(de)到基(ji)本的滿(man)足，其(qi)計(ji)量(liang)多(duo)直(zhi)接用(yong)單位體積(ji)中的重(zhong)量(liang)表(biao)示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。zui近WHO用(yong)質量(liang)單(dan)位取(qu)代(dai)重(zhong)量(liang)單(dan)位，即(ji)mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對(dui)大(da)分(fen)子(zi)的活性(xing)物質則(ze)比較復雜(za)。由(you)於得(de)不到(dao)的純品，故(gu)很(hen)難(nan)直接用(yong)單位體積(ji)中的重(zhong)量(liang)或(huo)單(dan)位體積(ji)中的質(zhi)量(liang)計(ji)量(liang)。因此，常用(yong)該物質的生(sheng)物活性(xing)單(dan)位表(biao)示，如IU / L、mIU / L等。