研究(jiu)解(jie)析(xi)Hechs染色(se)方法的(de)實驗(yan)步驟

研究(jiu)解(jie)析(xi)Hechs染色(se)方法的(de)實驗(yan)步驟

．貼壁(bi)細(xi)胞(bao)

) 取普通潔(jie)凈蓋(gai)玻(bo)片於(yu)70%乙醇(chun)中浸泡5分鐘或更(geng)長(chang)時間，無菌超(chao)凈臺內吹(chui)幹或(huo)用細(xi)胞(bao)培養PBS或0.9%NaCl等溶液(ye)洗(xi)滌(di)三遍，再用(yong)細(xi)胞(bao)培養液洗(xi)滌(di)壹遍。將蓋(gai)玻(bo)片置(zhi)於六(liu)孔(kong)板內，種(zhong)入細(xi)胞(bao)培養過夜(ye)，使約為(wei)50%-80%滿(man)。

2) 刺(ci)激細(xi)胞(bao)發生雕亡(wang)後(hou)，吸盡培養液，加(jia)入0.5ml固(gu)定液(ye)，固(gu)定0分鐘或更(geng)長(chang)時間（可(ke)4℃過(guo)夜(ye)）。

3) 去(qu)固(gu)定液(ye)，用PBS或(huo)0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘，吸盡液體(ti)。洗(xi)滌(di)時宜(yi)用(yong)搖(yao)床(chuang)，或(huo)手(shou)動晃(huang)動(dong)數次。

4) 加(jia)入0.5ml Hoechst 33258染色(se)液，染(ran)色(se)5分鐘。也宜(yi)用(yong)搖(yao)床(chuang)，或(huo)手(shou)動晃(huang)動(dong)數次。

5) 用(yong)PBS或0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘。

6) 滴(di)壹(yi)滴(di)抗(kang)熒光淬滅(mie)封(feng)片液(ye)於(yu)載(zai)玻片上，蓋(gai)上貼有(you)細(xi)胞(bao)的(de)蓋(gai)玻(bo)片，盡量避免(mian)氣泡。使(shi)細(xi)胞(bao)接(jie)觸封片液(ye)，切勿弄(nong)反。

7) 熒光顯(xian)微鏡(jing)可(ke)檢測(ce)到呈(cheng)藍(lan)色(se)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)。

2. 懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)

) 離心收(shou)集細(xi)胞(bao)樣品於(yu).5ml離心管(guan)內，加(jia)入0.5ml固(gu)定液(ye)，緩(huan)緩(huan)懸(xuan)起細(xi)胞(bao)，固(gu)定0分鐘或更(geng)長(chang)時間（可(ke)4℃過(guo)夜(ye)）。

2) 離心去(qu)固(gu)定液(ye)，用PBS或(huo)0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘。洗(xi)滌(di)期間手(shou)動晃(huang)動(dong)。

3) zui後壹次(ci)離心後吸去(qu)大部(bu)分液體(ti)保(bao)留(liu)約50ml液(ye)體(ti)，再緩(huan)緩(huan)懸(xuan)起細(xi)胞(bao)，滴(di)加(jia)至載(zai)玻片上，盡量使細(xi)胞(bao)分布均(jun)勻(yun)。

4) 稍晾幹，使(shi)細(xi)胞(bao)貼在載(zai)玻片上不(bu)易隨液(ye)體(ti)流(liu)動(dong)。

5) 均(jun)勻(yun)滴(di)上0.5ml Hoechst 33258染色(se)液，染(ran)色(se)5分鐘。用吸水(shui)紙從(cong)邊(bian)緣吸去(qu)液(ye)體(ti)，微晾幹。

6) 用(yong)PBS或0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘。

7) 滴(di)壹(yi)滴(di)抗(kang)熒光淬滅(mie)封(feng)片液(ye)於(yu)載(zai)玻片上，蓋(gai)上壹潔(jie)凈的(de)蓋(gai)玻(bo)片，盡量避免(mian)氣泡。

8) H. 熒光顯(xian)微鏡(jing)可(ke)檢測(ce)到呈(cheng)藍(lan)色(se)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)。

3. 組織(zhi)切片

) 常(chang)規(gui)包(bao)埋切片後(hou)，脫(tuo)蠟(la)，透(tou)明(ming)。

2) PBS或(huo)0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘，吸盡液體(ti)。洗(xi)滌(di)時宜(yi)用(yong)搖(yao)床(chuang)，或(huo)手(shou)動晃(huang)動(dong)數次。可(ke)在(zai)六(liu)孔(kong)板中操(cao)作(zuo)。

3) 加(jia)入0.5ml Hoechst 33258染色(se)液，染(ran)色(se)5分鐘。也宜(yi)用(yong)搖(yao)床(chuang)，或(huo)手(shou)動晃(huang)動(dong)。

4) 用PBS或0.9%NaCl洗(xi)兩遍，每次(ci)3分鐘。

5) 將切片置(zhi)於載(zai)玻片上，滴(di)壹(yi)滴(di)抗(kang)淬滅(mie)封(feng)片液(ye)，蓋(gai)上壹潔(jie)凈的(de)蓋(gai)玻(bo)片，盡量避免(mian)氣泡。

6) 熒光顯(xian)微鏡(jing)可(ke)檢測(ce)到呈(cheng)藍(lan)色(se)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)。