人氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）ELISA試(shi)劑盒使用(yong)說(shuo)明(ming)

人氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）ELISA試(shi)劑盒使用(yong)說(shuo)明(ming)

本(ben)試(shi)劑盒僅供研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)。
檢(jian)測(ce)範圍(wei)： 96T
.5 nmol/mL - 50 nmol/mL
ELISA試(shi)劑盒使用(yong)目的：
本(ben)試劑盒用(yong)於測(ce)定(ding)人血(xue)清、血(xue)漿及相(xiang)關(guan)液體(ti)樣(yang)本中(zhong)氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）含量。
實(shi)驗原(yuan)理(li)
本(ben)試劑盒應用(yong)雙抗體(ti)夾(jia)心(xin)法測(ce)定(ding)標(biao)本(ben)中(zhong)人氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）水(shui)平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的人氧(yang)
化(hua)型(xing)（GSSG）抗(kang)體(ti)包(bao)被微孔板，制成固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往(wang)包被單抗的微孔中依次(ci)加(jia)入氧(yang)化(hua)
型(xing)（GSSG），再與HRP 標(biao)記的氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）抗(kang)體(ti)結合(he)，形(xing)成抗體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)
標抗體復合(he)物(wu)，經過*洗(xi)滌後(hou)加(jia)底(di)物(wu)TMB 顯(xian)色。TMB 在(zai)HRP 酶的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍(lan)色，
並在(zai)酸(suan)的(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成zui終的黃色。顏(yan)色的(de)深淺和樣(yang)品中(zhong)的(de)氧(yang)化(hua)型(xing)（GSSG）呈正相
關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm 波長下測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度（OD 值(zhi)），通(tong)過標準(zhun)曲(qu)線(xian)計(ji)算樣(yang)品中(zhong)人氧(yang)化(hua)型(xing)谷
胱甘肽(tai)（GSSG）濃度。
試劑盒組成
30 倍濃縮洗(xi)滌液 20ml× 瓶 7 終(zhong)止(zhi)液 6ml× 瓶
2 酶(mei)標(biao)試劑 6ml× 瓶 8 標(biao)準(zhun)品（80 nmol/mL） 0.5ml× 瓶
3 酶(mei)標(biao)包被板 2 孔×8 條 9 標準(zhun)品稀釋液 .5ml× 瓶
4 樣(yang)品稀釋液 6ml× 瓶 0 說(shuo)明(ming)書 份
5 顯(xian)色劑A 液 6ml× 瓶 封(feng)板膜(mo) 2 張(zhang)
6 顯(xian)色劑B 液 6ml×/瓶 2 密(mi)封袋 個(ge)
ELISA試(shi)劑盒標本要求(qiu)
．標(biao)本采(cai)集後盡(jin)早(zao)進行提取(qu)，提取(qu)按相關(guan)文(wen)獻進行，提取(qu)後(hou)應盡(jin)快(kuai)進行實(shi)驗。若(ruo)不能
馬上進行試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標本放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復凍融(rong)
2．不能檢測(ce)含NaN3 的樣(yang)品，因(yin)NaN3 抑(yi)制(zhi)辣(la)根過氧(yang)化(hua)物酶的（HRP）活性(xing)。
操(cao)作步驟
. 標(biao)準(zhun)品的(de)稀釋：本(ben)試劑盒提供(gong)原(yuan)倍標準(zhun)品壹(yi)支，用(yong)戶(hu)可(ke)按照(zhao)下列(lie)圖(tu)表(biao)在(zai)小試管中(zhong)進行稀
釋。
40 nmol/mL 5 號(hao)標準(zhun)品 50μl 的(de)原(yuan)倍標準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl 標(biao)準(zhun)品稀釋液
20 nmol/mL 4 號(hao)標(biao)準(zhun)品 50μl 的(de)5 號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl 標(biao)準(zhun)品稀釋液
0 nmol/mL 3 號(hao)標(biao)準(zhun)品 50μl 的(de)4 號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl 標(biao)準(zhun)品稀釋液
5nmol/mL 2 號(hao)標(biao)準(zhun)品 50μl 的(de)3 號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl 標(biao)準(zhun)品稀釋液
2.5 nmol/mL 號(hao)標(biao)準(zhun)品 50μl 的(de)2 號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl 標(biao)準(zhun)品稀釋液
2. 加(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)設(she)空白(bai)孔（空白(bai)對照(zhao)孔不加(jia)樣(yang)品及酶(mei)標(biao)試劑，其余各(ge)步操(cao)作相(xiang)同）、標(biao)準(zhun)孔、
待測(ce)樣(yang)品孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板上標準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然(ran)後再加待測(ce)樣(yang)品0μl（樣(yang)品zui終(zhong)稀釋度為5 倍）。加樣(yang)將(jiang)樣品加(jia)於酶(mei)標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡(jin)
量(liang)不觸(chu)及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。
3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)板後置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30 分(fen)鐘(zhong)。
4. 配液：將(jiang)30 倍濃縮洗(xi)滌液用(yong)蒸餾水(shui)30 倍稀釋後(hou)備用(yong)
5. 洗(xi)滌：小心揭(jie)掉封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)30 秒後(hou)棄去，如此(ci)
重復5 次(ci)，拍幹(gan)。
6. 加酶：每孔加入酶標試(shi)劑50μl，空白(bai)孔除外(wai)。
7. 溫(wen)育(yu)：操(cao)作同3。
8. 洗(xi)滌：操(cao)作同5。
9. 顯(xian)色：每孔先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入(ru)顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色
5 分(fen)鐘(zhong).
0. 終止(zhi)：每孔加終止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色立(li)轉黃(huang)色）。
. 測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)空調零，450nm 波長依序測(ce)量(liang)各(ge)孔的吸(xi)光(guang)度（OD 值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終(zhong)止(zhi)
液後(hou)5 分(fen)鐘(zhong)以內(nei)進行。
ELISA試(shi)劑盒操(cao)作程(cheng)序總(zong)結：
計(ji)算
以(yi)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度為橫坐(zuo)標(biao)，OD 值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，根據(ju)樣品的(de)
OD 值(zhi)由(you)標準(zhun)曲(qu)線(xian)查出(chu)相(xiang)應(ying)的濃(nong)度；再乘(cheng)以稀釋倍數；或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度與OD 值(zhi)計(ji)算出(chu)標(biao)
準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品的(de)OD 值(zhi)代(dai)入方程(cheng)式(shi)，計(ji)算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度，再乘(cheng)以稀釋倍數，
即(ji)為(wei)樣品的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度。
註意(yi)事(shi)項(xiang)
．試(shi)劑盒從冷藏(zang)環境中取(qu)出(chu)應在(zai)室溫(wen)平(ping)衡(heng)5-30 分(fen)鐘(zhong)後方(fang)可(ke)使用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被板開封後如(ru)未(wei)
用(yong)完，板條應裝入(ru)密(mi)封袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2．濃(nong)洗(xi)滌液可(ke)能會有結晶析出(chu)，稀釋時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴中加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌時(shi)不影(ying)響結果。
3．各(ge)步加樣(yang)均應(ying)使用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並經(jing)常校對(dui)其準(zhun)確(que)性(xing)，以(yi)避(bi)免(mian)試驗(yan)誤差。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時(shi)間(jian)
控(kong)制(zhi)在(zai)5 分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本(ben)數量(liang)多，使用(yong)排(pai)槍(qiang)加(jia)樣(yang)。
4． 請(qing)每次(ci)測(ce)定(ding)的(de)同時(shi)做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，做(zuo)復孔。如標本中待測(ce)物(wu)質(zhi)含量過(guo)高（樣(yang)本OD 值(zhi)
大(da)於標(biao)準(zhun)品孔*孔的OD 值(zhi)），請(qing)先用(yong)樣(yang)品稀釋液稀釋壹(yi)定(ding)倍數（n 倍）後再測(ce)定(ding)，計(ji)
算時(shi)請(qing)zui後乘(cheng)以總(zong)稀釋倍數（×n×5）。
5． 封(feng)板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。
6．底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。
7．嚴(yan)格(ge)按照(zhao)說明書的操(cao)作進行，試(shi)驗結果判定(ding)必(bi)須以酶(mei)標儀讀數為(wei)準(zhun).
8．所(suo)有樣品，洗(xi)滌液和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都應按傳(chuan)染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試劑不同批(pi)號組分(fen)不得(de)混(hun)用(yong)。
保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)及有效期(qi)
．試劑盒保(bao)存(cun)：；2-8℃。
2．有效期(qi)：6 個月(yue)