人囊(nang)蟲(chong)病(bing)抗體CYT-Ab試劑(ji)盒(he)實(shi)驗原理

人囊(nang)蟲(chong)病(bing)抗體CYT-Ab試劑(ji)盒(he)實(shi)驗原理

試驗原理：
人囊(nang)蟲(chong)病(bing)抗體CYT-Ab試劑(ji)盒(he)是(shi)間接(jie)法(fa)酶聯免疫(yi)吸附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知CYT-Ab濃(nong)度的標(biao)準(zhun)品、未知濃(nong)度的樣(yang)品(pin)加(jia)入(ru)微(wei)孔酶(mei)標(biao)板(ban)內進行檢測(ce)。先(xian)將CYT-Ab和(he)標(biao)記(ji)的抗體同時(shi)溫(wen)育(yu)。洗滌後，加(jia)入(ru)親和素標(biao)記(ji)過(guo)的HRP。再經過(guo)溫(wen)育(yu)和(he)洗滌，去除(chu)未(wei)結(jie)合的酶結(jie)合物，然後加(jia)入(ru)底(di)物A、B，和(he)酶結(jie)合物同(tong)時(shi)作(zuo)用(yong)。產生顏(yan)色(se)。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣(yang)品(pin)中CYT-Ab的濃(nong)度呈(cheng)比(bi)例關(guan)系。

自(zi)備(bei)材(cai)料(liao)
蒸餾水(shui)。
加(jia)樣(yang)器(qi)：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振(zhen)蕩(dang)器及(ji)磁(ci)力(li)攪拌(ban)器(qi)等。

安(an)全(quan)性
避(bi)免(mian)直接(jie)接(jie)觸終止液(ye)和底(di)物A、B。壹(yi)旦接(jie)觸到這些液(ye)體，請盡(jin)快(kuai)用(yong)水沖(chong)洗。
實(shi)驗中不(bu)要吃喝(he)、抽煙(yan)或使(shi)用(yong)化妝(zhuang)品。
不(bu)要用(yong)嘴吸取(qu)試劑(ji)盒(he)裏(li)的任何(he)成份。

操作(zuo)註(zhu)意(yi)事項(xiang)
試劑(ji)應按(an)標(biao)簽(qian)說(shuo)明(ming)書(shu)儲存，使(shi)用(yong)前恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀稀過(guo)後的標(biao)準(zhun)品應丟棄，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)。
實(shi)驗中不(bu)用(yong)的板(ban)條(tiao)應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋中，密(mi)封(feng)保(bao)存(cun)，以免變質(zhi)。
不(bu)用(yong)的其(qi)它(ta)試劑(ji)應包(bao)裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同批(pi)號(hao)的試劑(ji)不(bu)要混用(yong)。保(bao)質(zhi)前使(shi)用(yong)。
使(shi)用(yong)壹次(ci)性的吸頭以免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取(qu)終止液(ye)和底(di)物A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)帶(dai)金屬(shu)部分的加(jia)樣(yang)器(qi)。
使(shi)用(yong)幹凈(jing)的塑(su)料(liao)容器配置(zhi)洗滌液(ye)。使(shi)用(yong)前充(chong)分混勻(yun)試劑(ji)盒(he)裏(li)的各種成份及樣(yang)品(pin)。
洗滌酶標(biao)板(ban)時(shi)應充(chong)分拍幹，不(bu)要將吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放入(ru)酶(mei)標(biao)反(fan)應孔(kong)中吸水(shui)。
底(di)物A應揮(hui)發(fa)，避(bi)免(mian)長時(shi)間打(da)開(kai)蓋(gai)子。底物B對光敏感(gan)，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於(yu)光(guang)下。避(bi)免(mian)用(yong)手接(jie)觸，有(you)毒(du)。實(shi)驗完成後應立(li)即(ji)讀(du)取OD值(zhi)。
加(jia)入(ru)試劑(ji)的順序應壹(yi)致(zhi)，以保(bao)證所有(you)反(fan)應板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時(shi)間壹(yi)樣(yang)。
按(an)照說明書(shu)中標(biao)明(ming)的時(shi)間、加(jia)液(ye)的量(liang)及順序進行溫(wen)育(yu)操作(zuo)。

樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理及保(bao)存(cun)方法(fa)
血清(qing)-----人囊(nang)蟲(chong)病(bing)抗體CYT-Ab操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任何細胞(bao)刺激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內毒素的試管。收(shou)集(ji)血液(ye)後，000×g離心0分鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和紅細胞(bao)迅速(su)小心地分離。
血漿(jiang)-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)、肝素血(xue)漿(jiang)可(ke)用(yong)於檢測(ce)。000×g離心30分鐘(zhong)去除(chu)顆粒(li)。
細胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離心0分鐘(zhong)去除(chu)顆粒(li)和聚合物。
組織勻(yun)漿(jiang)-----將組織加(jia)入(ru)適量(liang)生理鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。000×g離心0分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)液(ye)
保(bao)存(cun)------如果樣(yang)品(pin)不(bu)立即(ji)使(shi)用(yong)，應將其(qi)分成小部分-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免(mian)反復冷(leng)凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的不(bu)要使(shi)用(yong)溶血(xue)或高血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中大量(liang)顆粒(li)，檢測(ce)前(qian)先(xian)離心或過(guo)濾(lv)。不(bu)要在(zai)37℃或(huo)更高的溫(wen)度加(jia)熱(re)解(jie)凍(dong)。應在(zai)室溫(wen)下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

操作(zuo)步驟
使(shi)用(yong)前，將所(suo)有(you)試劑(ji)充(chong)分混勻(yun)。不(bu)要使(shi)液(ye)體產生大(da)量(liang)的泡(pao)沫(mo)，以(yi)免(mian)加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量(liang)的氣(qi)泡(pao)，產生加(jia)樣(yang)上(shang)的誤差(cha)。
根據(ju)待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上(shang)標(biao)準(zhun)品的數(shu)量(liang)決定(ding)所需(xu)的板(ban)條(tiao)數(shu)。每(mei)個標(biao)準(zhun)品和空(kong)白孔建議(yi)做(zuo)復孔(kong)。每(mei)個(ge)樣(yang)品(pin)根據自(zi)己的數(shu)量(liang)來定(ding)，能使(shi)用(yong)復孔(kong)的盡(jin)量(liang)做復孔(kong)。標(biao)本用(yong)標(biao)本稀釋(shi)液(ye)：稀釋(shi)後加(jia)入(ru)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內。
加(jia)入(ru)稀釋(shi)好(hao)後的標(biao)準(zhun)品50ul於反(fan)應孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於反應孔(kong)內。立即加(jia)入(ru)50ul的標(biao)記(ji)的抗體。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板(ban)，輕(qing)輕振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小(xiao)時(shi)。
甩去(qu)孔(kong)內液(ye)體，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩去(qu)洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹。重(zhong)復(fu)此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗板(ban)機(ji)洗滌，洗滌次數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。
每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的親和鏈酶素(su)-HRP，輕輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。
甩去(qu)孔(kong)內液(ye)體，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩去(qu)洗滌液(ye)，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍幹。重(zhong)復(fu)此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗板(ban)機(ji)洗滌，洗滌次數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。
每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物A、B各50ul，輕(qing)輕振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。
取(qu)出(chu)酶標(biao)板(ban)，迅速(su)加(jia)入(ru)50ul終止液(ye)，加(jia)入(ru)終止液(ye)後應立(li)即(ji)測定(ding)結果。
在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔(kong)的OD值(zhi)。

局限(xian)
6號標(biao)準(zhun)品以上(shang)的結果為(wei)非(fei)線(xian)性(xing)的，根據(ju)此(ci)標(biao)準(zhun)曲線無法(fa)得到(dao)的結果。

人囊(nang)蟲(chong)病(bing)抗體CYT-Ab試劑(ji)盒(he)性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏度：zui小(xiao)的檢測(ce)濃(nong)度小(xiao)於號標(biao)準(zhun)品。稀釋(shi)度的線性(xing)。樣(yang)品(pin)線性回歸(gui)與預(yu)期(qi)濃(nong)度相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特(te)異(yi)性(xing)：不(bu)與其(qi)它(ta)細胞(bao)因子反應。
3. 重(zhong)復(fu)性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異(yi)系數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)0%。

結(jie) 果 判(pan) 斷(duan) 與(yu) 分 析(xi)
、儀器值(zhi)：於波(bo)長(chang)450nm的酶標(biao)儀上(shang)讀(du)取各孔(kong)的OD值(zhi)
2、以吸光(guang)度OD值(zhi)為(wei)縱坐標(biao)（Y），相(xiang)應的CYT-Ab標(biao)準(zhun)品濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐標(biao)（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應的曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的CYT-Ab含(han)量(liang)可(ke)根據其(qi)OD值(zhi)由(you)標(biao)準(zhun)曲線換(huan)算(suan)出(chu)相應的濃(nong)度。
3、檢測(ce)值(zhi)範(fan)圍：0-40IU/L
4、敏感(gan)度： 0. IU/L