人(ren)髓(sui)鞘堿性蛋(dan)白(bai)抗(kang)體MBP-Ab試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗(yan)說明

人(ren)髓(sui)鞘堿性蛋(dan)白(bai)抗(kang)體MBP-Ab試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗(yan)說明

本試(shi)劑(ji)僅供研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)  標(biao)本：血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)漿

試(shi)驗(yan)原理：
人(ren)髓(sui)鞘堿性蛋(dan)白(bai)抗(kang)體MBP-Ab試(shi)劑(ji)盒(he)是固相夾心法(fa)酶(mei)聯免疫吸(xi)附實驗(yan)（ELISA）.已知MBP-Ab濃度的(de)標(biao)準品(pin)、未(wei)知濃度的(de)樣品(pin)加(jia)入微(wei)孔酶標(biao)板內進(jin)行檢(jian)測(ce)。先(xian)將MBP-Ab和標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體同時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌後，加(jia)入親和素(su)標(biao)記(ji)過(guo)的(de)HRP。再經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)和(he)洗滌，去(qu)除未(wei)結(jie)合(he)的(de)酶結(jie)合(he)物，然(ran)後加入底(di)物(wu)A、B，和酶結合(he)物同時(shi)作(zuo)用(yong)。產生顏色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中MBP-Ab的(de)濃度呈(cheng)比(bi)例關系(xi)。

自備(bei)材料
蒸(zheng)餾水(shui)。
加(jia)樣器(qi)：5ul、0ul、50ul、00ul、200、500ul、000ul。
振蕩器及(ji)磁力(li)攪(jiao)拌(ban)器等(deng)。

安(an)全(quan)性
避免直接(jie)接(jie)觸終止(zhi)液(ye)和底(di)物(wu)A、B。壹(yi)旦(dan)接(jie)觸到(dao)這(zhe)些(xie)液體，請(qing)盡(jin)快用(yong)水(shui)沖(chong)洗(xi)。
實驗(yan)中不(bu)要吃喝(he)、抽(chou)煙(yan)或(huo)使(shi)用(yong)化(hua)妝(zhuang)品(pin)。
不(bu)要用(yong)嘴(zui)吸取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)任(ren)何成份。

操(cao)作(zuo)註意(yi)事項(xiang)
試(shi)劑(ji)應按標(biao)簽(qian)說明書儲存，使(shi)用(yong)前(qian)恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀稀過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準品(pin)應(ying)丟棄(qi)，不可保(bao)存。
實(shi)驗(yan)中不(bu)用(yong)的(de)板條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密(mi)封保(bao)存，以免變質(zhi)。
不(bu)用(yong)的(de)其它(ta)試(shi)劑(ji)應包裝好(hao)或蓋好(hao)。不同批(pi)號的(de)試(shi)劑(ji)不要混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使(shi)用(yong)。
使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性的(de)吸頭以免交叉(cha)汙染(ran)，吸取(qu)終止(zhi)液(ye)和底(di)物(wu)A、B液時(shi)，避免使用(yong)帶金(jin)屬部分(fen)的(de)加樣(yang)器。
使(shi)用(yong)幹凈的(de)塑料容器配(pei)置(zhi)洗(xi)滌液。使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)試(shi)劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)各種(zhong)成份及(ji)樣品(pin)。
洗(xi)滌酶標(biao)板時(shi)應(ying)充(chong)分(fen)拍(pai)幹，不要(yao)將吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放入酶(mei)標(biao)反應(ying)孔中吸(xi)水。
底(di)物(wu)A應揮(hui)發，避免長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開蓋子(zi)。底(di)物(wu)B對(dui)光(guang)敏感，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴露於光(guang)下(xia)。避免用(yong)手(shou)接(jie)觸，有毒(du)。實(shi)驗(yan)完成後應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取OD值。
加入試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應(ying)壹(yi)致(zhi)，以保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應板孔溫(wen)育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
按照說明書中標(biao)明的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)的(de)量及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作。

樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理及(ji)保(bao)存方(fang)法(fa)
血(xue)清(qing)-----人(ren)髓(sui)鞘堿性蛋(dan)白(bai)抗(kang)體MBP-Ab操(cao)作(zuo)過(guo)程中避免任(ren)何細胞刺(ci)激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原和內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離(li)心0分(fen)鐘將血清(qing)和(he)紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心地分(fen)離(li)。
血漿(jiang)-----EDTA、檸檬酸鹽(yan)、肝素(su)血(xue)漿可用(yong)於檢(jian)測(ce)。000×g離(li)心30分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒。
細胞(bao)上清(qing)液(ye)---000×g離(li)心0分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。
組(zu)織勻(yun)漿(jiang)-----將組(zu)織加(jia)入適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。000×g離(li)心0分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)液(ye)
保(bao)存------如(ru)果樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即(ji)使(shi)用(yong)，應(ying)將其分(fen)成小部(bu)分(fen)-70 ℃保(bao)存，避免反復(fu)冷(leng)凍。盡(jin)可能的(de)不要(yao)使用(yong)溶(rong)血或高(gao)血(xue)脂(zhi)血(xue)。如(ru)果血(xue)清(qing)中大量顆粒，檢測(ce)前(qian)先(xian)離(li)心或(huo)過(guo)濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或更高的(de)溫(wen)度加熱(re)解(jie)凍(dong)。應(ying)在室溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)
使用(yong)前(qian)，將所有(you)試(shi)劑(ji)充分(fen)混(hun)勻(yun)。不(bu)要使液體產生大量的(de)泡沫，以免加樣(yang)時(shi)加(jia)入大量的(de)氣泡(pao)，產生加(jia)樣(yang)上的(de)誤(wu)差。
根(gen)據(ju)待測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量加上標(biao)準品(pin)的(de)數量(liang)決定所需(xu)的(de)板條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空白(bai)孔建議做(zuo)復(fu)孔。每個(ge)樣品(pin)根(gen)據自己的(de)數量(liang)來定，能使用(yong)復(fu)孔的(de)盡量(liang)做(zuo)復(fu)孔。標(biao)本用(yong)標(biao)本稀釋(shi)液(ye)：稀釋(shi)後(hou)加(jia)入50ul於反(fan)應(ying)孔內。
加(jia)入稀釋(shi)好(hao)後的(de)標(biao)準品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔、加入待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔內。立(li)即(ji)加(jia)入50ul的(de)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體。蓋上膜(mo)板，輕輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小(xiao)時(shi)。
甩去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹。重(zhong)復(fu)此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用(yong)洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
每(mei)孔加入80ul的(de)親和鏈酶素(su)-HRP，輕(qing)輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。
甩去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹。重(zhong)復(fu)此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用(yong)洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次(ci)。
每(mei)孔加入底(di)物(wu)A、B各50ul，輕輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分(fen)鐘。避免光照。
取出酶(mei)標(biao)板，迅速(su)加(jia)入50ul終止(zhi)液(ye)，加入終止(zhi)液(ye)後應(ying)立(li)即(ji)測(ce)定結果。
在450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定各孔的(de)OD值。

人(ren)髓(sui)鞘堿性蛋(dan)白(bai)抗(kang)體MBP-Ab試(shi)劑(ji)盒(he)性能
. 靈(ling)敏度：zui小的(de)檢測(ce)濃(nong)度小於號標(biao)準品(pin)。稀釋(shi)度的(de)線(xian)性。樣(yang)品(pin)線(xian)性回(hui)歸(gui)與(yu)預期濃(nong)度相關(guan)系(xi)數R值為(wei)0.990。
2. 特異性：不(bu)與(yu)人(ren)其(qi)它細胞因(yin)子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復(fu)性：板內、板間(jian)變(bian)異系(xi)數均(jun)小於0%。

結(jie) 果 判 斷 與(yu) 分(fen) 析(xi)
、儀器值：於波(bo)長(chang)450nm的(de)酶標(biao)儀上讀取(qu)各(ge)孔的(de)OD值

2、以吸(xi)光度OD值為(wei)縱(zong)坐標(biao)（Y），相應(ying)的(de)MBP-Ab標(biao)準品(pin)濃(nong)度為(wei)橫坐標(biao)（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應(ying)的(de)曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的(de)MBP-Ab含(han)量可根據(ju)其OD值由標(biao)準曲(qu)線(xian)換(huan)算(suan)出(chu)濃度。

3、檢測(ce)值範(fan)圍(wei)：0-80IU/L

4、敏感度： 0. IU/L