大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)（MN）試劑(ji)盒定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)

　　大鼠間羥腎上(shang)腺素(su)（MN）試劑(ji)盒定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)
　　
　　本(ben)產品僅(jin)供(gong)研(yan)究使(shi)用(yong)
　　
　　【試劑(ji)盒用(yong)途(tu)】定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)大(da)鼠血清(qing)、血漿及(ji)相關液(ye)體(ti)樣(yang)本(ben)中(zhong)間(jian)羥腎上(shang)腺素(su)（MN）的含(han)量(liang)。
　　
　　【檢(jian)測(ce)原理】
　　
　　本(ben)大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)MN試劑(ji)盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)兩(liang)步(bu)夾心(xin)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)法(fa)（ELISA）。將標(biao)準(zhun)品、待(dai)測樣本加(jia)入到(dao)預(yu)先(xian)包被(bei)大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)（MN）單(dan)克(ke)隆抗(kang)體(ti)透明酶標(biao)包被(bei)板中(zhong)，溫(wen)育足(zu)夠(gou)時(shi)間後(hou)，洗滌(di)除去(qu)未(wei)結合(he)的成分，再加(jia)入酶(mei)標(biao)工(gong)作(zuo)液(ye)，溫(wen)育足(zu)夠(gou)時(shi)間後(hou)，洗滌(di)除去(qu)未(wei)結合(he)的成分。依次加(jia)入底(di)物(wu)A、B，底(di)物(wu)（TMB）在(zai)辣根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)為(wei)藍(lan)色(se)產物(wu)，在(zai)酸的作(zuo)用(yong)下(xia)變(bian)成黃(huang)色(se)，顏色(se)的深淺與(yu)樣(yang)品中(zhong)大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)（MN）濃(nong)度(du)呈(cheng)正(zheng)相關，450nm波長下(xia)測(ce)定(ding)OD值(zhi)，根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)品和樣品的OD值(zhi)，計(ji)算樣(yang)本中(zhong)大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)（MN）含(han)量(liang)。
　　
　　【操(cao)作(zuo)步(bu)驟】
　　
　　、準(zhun)備：從冰箱(xiang)取出試劑(ji)盒，室(shi)溫(wen)復溫(wen)平(ping)衡(heng)30分(fen)鐘(zhong)。
　　
　　2、配(pei)液(ye)：用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)將20倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)稀釋(shi)成(cheng)原(yuan)倍的洗滌(di)液(ye)。
　　
　　3、加(jia)標(biao)準(zhun)品和待(dai)測樣本：取(qu)足(zu)夠(gou)數量的酶標(biao)包被(bei)板，固(gu)定(ding)於框(kuang)架(jia)上(shang)，分別設(she)置標(biao)準(zhun)品孔(kong)、待(dai)測樣本孔(kong)和空白對(dui)照(zhao)孔(kong)，記錄各孔(kong)位置(zhi)，在(zai)標(biao)準(zhun)品孔(kong)中(zhong)加(jia)入標(biao)準(zhun)品50μL；待(dai)測樣本孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)入待(dai)測樣本0μL，再加(jia)樣本(ben)稀釋(shi)液(ye)40μL（即(ji)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)5倍(bei)）；空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)。
　　
　　4、溫(wen)育：37℃水(shui)浴鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育30min。
　　
　　5、洗板：棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置min，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此(ci)重復洗板4次（也(ye)可(ke)用(yong)洗板機按說明書操(cao)作(zuo)洗板）。
　　
　　6、加(jia)酶標(biao)工(gong)作(zuo)液(ye)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)工(gong)作(zuo)液(ye)50μL，空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)。
　　
　　7、溫(wen)育：37℃水(shui)浴鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育30min。
　　
　　8、洗板：棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置min，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此(ci)重復洗板4次（也(ye)可(ke)用(yong)洗板機按說明書操(cao)作(zuo)洗板）。
　　
　　9、顯色(se)：每孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A液(ye)50μL，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B液(ye)50μL，平(ping)板混(hun)勻器(qi)混(hun)勻30s（或(huo)用(yong)手(shou)輕輕震蕩(dang)混(hun)勻30s），37℃避(bi)光顯(xian)色(se)5min。
　　
　　0、終止：取出酶標(biao)板，每孔(kong)加(jia)終止液(ye)50μL，終止反(fan)應(ying)（顏色(se)由藍色(se)立轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。
　　
　　、測定(ding)：以(yi)空白孔(kong)調零(ling)，在(zai)終止後(hou)5分(fen)鐘(zhong)內，用(yong)450nm波(bo)長測量各孔(kong)的吸(xi)光值(zhi)（OD值(zhi)）。
　　
　　2、計(ji)算：大(da)鼠間羥腎上(shang)腺素(su)MN根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)品的濃(nong)度(du)及(ji)對(dui)應(ying)的OD值(zhi)，計(ji)算出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(xian)的直線(xian)回(hui)歸方程(cheng)，再根(gen)據(ju)樣本的OD值(zhi)，在(zai)回(hui)歸方程(cheng)上(shang)計算出(chu)對(dui)應(ying)的樣品濃(nong)度(du)，也(ye)可(ke)以使用(yong)各種應用(yong)軟(ruan)件(jian)來(lai)計(ji)算。zui終濃(nong)度(du)為(wei)實(shi)際(ji)測(ce)定(ding)濃(nong)度(du)乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)。
　　
　　【樣本要求】
　　
　　、樣本(ben)不能含(han)疊(die)氮(dan)鈉(na)（NaN3），因(yin)為(wei)疊(die)氮(dan)鈉(na)（NaN3）是(shi)辣根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）的抑(yi)制(zhi)劑(ji)。
　　
　　2、標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻(xian)進行(xing)，提(ti)取(qu)後(hou)應(ying)盡(jin)快進行(xing)實驗(yan)。若(ruo)不能立即試驗(yan)，可(ke)將標(biao)本(ben)放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但應避免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。
　　
　　3、樣(yang)本(ben)應充(chong)分(fen)離(li)心(xin)，不(bu)得(de)有(you)溶血及(ji)顆粒。
　　
　　【註意事項(xiang)】
　　
　　、實驗(yan)嚴(yan)格(ge)按照說明書的操(cao)作(zuo)進行(xing)，實驗(yan)結(jie)果判定(ding)必(bi)須以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀(du)數(shu)為準(zhun)。
　　
　　2、酶(mei)標(biao)包被(bei)板開封(feng)後(hou)如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，應立即裝入密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)加(jia)幹(gan)燥(zao)劑(ji)保存(cun)。
　　
　　3、建議所(suo)有(you)的標(biao)準(zhun)品、樣(yang)本(ben)和空白對(dui)照(zhao)都(dou)做雙(shuang)份(fen)檢測(ce)，取平(ping)均值(zhi)，以(yi)減小實驗(yan)誤(wu)差(cha)。
　　
　　4、牢記樣(yang)本已經稀釋(shi)5倍(bei)，計(ji)算結(jie)果乘(cheng)以5才(cai)是樣(yang)本(ben)實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。
　　
　　5、本(ben)試劑(ji)盒定(ding)量(liang)範圍(wei)為25-800ng/L，超過(guo)此(ci)範圍(wei)，為標(biao)準(zhun)曲線(xian)延(yan)伸計算所(suo)得，不做為(wei)準(zhun)確定(ding)量(liang)結(jie)果(guo)，請(qing)用(yong)特殊稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)後(hou)測(ce)定(ding)準(zhun)確(que)結(jie)果(guo)（25-800ng/L範圍(wei)內），乘(cheng)以總(zong)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)即為樣(yang)本(ben)zui終濃(nong)度(du)。
　　
　　6、若(ruo)顯色(se)過(guo)淺，可(ke)適(shi)當(dang)延(yan)長底(di)物(wu)溫(wen)育時(shi)間。
　　
　　7、為(wei)避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)，標(biao)準(zhun)品、樣(yang)本(ben)和空白對(dui)照(zhao)每(mei)加(jia)壹個就(jiu)要更換壹次吸(xi)頭；酶標(biao)工(gong)作(zuo)液(ye)、樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液(ye)和底(di)物(wu)等公(gong)共(gong)組(zu)分(fen)，要懸臂加(jia)樣，不(bu)得碰(peng)到微孔(kong)；不得(de)重復使(shi)用(yong)封(feng)板膜。
　　
　　8、試劑(ji)盒保(bao)質期(qi)內使(shi)用(yong)，不(bu)同批號(hao)的試劑(ji)不得(de)混(hun)用(yong)。
　　
　　9、底(di)物(wu)B對(dui)光敏(min)感，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於光下(xia)。
　　
　　【檢(jian)測範圍(wei)】25ng/L–800ng/L
　　
　　【規格(ge)】96人份(fen)/盒
　　
　　【貯(zhu)藏】2-8℃，避光防(fang)潮(chao)保存(cun)。
　　
　　【有(you)效(xiao)期(qi)】6個月