動物(wu)細(xi)菌(jun)學監(jian)測(ce)標準實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)內容

動(dong)物(wu)細(xi)菌(jun)學監(jian)測(ce)標準實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)內容

主體內(nei)容(rong)：
. 標本的(de)采集(ji)
正(zheng)常(chang)動(dong)物(wu)細(xi)菌(jun)檢測(ce)主要(yao)檢查(zha)呼吸道(dao)和腸道，分別(bie)取(qu)氣(qi)管分(fen)泌(mi)物(wu)及(ji)腸(chang)內(nei)容物(wu)做(zuo)細菌(jun)培養(yang)檢查(zha)。對(dui)於(yu)發(fa)病動(dong)物(wu)，采取(qu)其(qi)病(bing)變(bian)組(zu)織和臟器(qi)做(zuo)細菌(jun)學檢(jian)查(zha)。
2. 細(xi)菌(jun)的(de)培養(yang)
細菌(jun)是單細胞(bao)的(de)原(yuan)核(he)生物(wu)，絕大部(bu)分都可以在人(ren)工(gong)培(pei)養(yang)基上(shang)進行(xing)繁殖，只有(you)少數(shu)例(li)外(wai)，如(ru)泰澤病原(yuan)體需在活(huo)細胞中(zhong)繁殖。不(bu)同細菌(jun)種類(lei)所(suo)要求的(de)zui適(shi)生(sheng)長條件(jian)不(bu)盡(jin)相(xiang)同，有些(xie)細菌(jun)需在有(you)氧(yang)的(de)環境下才(cai)能(neng)生長，稱為(wei)需氧(yang)菌(jun)；有些(xie)只能(neng)在無(wu)氧(yang)環(huan)境下生(sheng)長，稱為(wei)厭氧(yang)菌(jun)；還(hai)有(you)壹些(xie)細菌(jun)在有(you)氧(yang)、無(wu)氧(yang)環(huan)境下都可以生長，稱為(wei)兼性(xing)厭氧(yang)菌(jun)。
培養(yang)細菌(jun)的(de)目的(de)，是從(cong)不(bu)純的(de)被檢(jian)材料中(zhong)找出特(te)定的(de)細菌(jun)或全(quan)部(bu)細菌(jun)，這壹過(guo)程(cheng)稱為(wei)分離培養(yang)。如(ru)果只是培養(yang)性(xing)質(zhi)明確(que)的(de)壹種細(xi)菌(jun)，則稱(cheng)為(wei)純培(pei)養(yang)。為(wei)了從(cong)被(bei)檢材料中(zhong)分離出所(suo)要檢(jian)查(zha)的(de)細菌(jun)，可以利用多種性(xing)質(zhi)不(bu)同的(de)選擇性(xing)培養(yang)基，檢(jian)查(zha)各種不(bu)同的(de)目的(de)細菌(jun)。
（）培養(yang)基的(de)種類(lei)：按(an)物(wu)理(li)性(xing)狀(zhuang)可把(ba)培養(yang)基分(fen)為(wei)液(ye)體培(pei)養(yang)基、半固(gu)體培(pei)養(yang)基和(he)固(gu)體培(pei)養(yang)基三(san)種。
（2）細(xi)菌(jun)培養(yang)的(de)方法：培(pei)養(yang)細菌(jun)的(de)目的(de)不(bu)同，其方法也(ye)不(bu)盡(jin)相(xiang)同，通(tong)常把細(xi)菌(jun)的(de)培養(yang)方法分(fen)為(wei)壹般培養(yang)法、二(er)氧(yang)化(hua)碳培養(yang)法和厭氧(yang)培(pei)養(yang)法三種：
①壹(yi)般(ban)培(pei)養(yang)法 壹般培(pei)養(yang)法又稱需氧(yang)培(pei)養(yang)法，將已接種好(hao)的(de)平皿(min)、斜面(mian)或液(ye)體培(pei)養(yang)基等(deng)，置於37℃孵(fu)育(yu)箱內(nei)培(pei)養(yang)8～24h，壹般細菌(jun)即(ji)可於(yu)培養(yang)基上(shang)生長。但也(ye)有(you)少(shao)數(shu)生(sheng)長緩(huan)慢的(de)細菌(jun)，需培(pei)養(yang)2～7d甚至(zhi)更(geng)長時(shi)間才(cai)能(neng)生長。
②二(er)氧(yang)化(hua)碳培養(yang)法 某(mou)些(xie)細菌(jun)如(ru)腦(nao)膜炎(yan)奈毖氏菌(jun)、布魯桿(gan)菌(jun)及肺炎支(zhi)原(yuan)體等(deng)，需要(yao)在壹(yi)定的(de)二(er)氧(yang)化(hua)碳環境下才(cai)能(neng)良(liang)好生長，即(ji)二(er)氧(yang)化(hua)碳培養(yang)法，常用的(de)有二(er)氧(yang)化(hua)碳培養(yang)箱、燭缸(gang)法(fa)、重碳酸鈉—鹽酸法(fa)。
③厭(yan)氧(yang)培(pei)養(yang)法 有些(xie)細菌(jun)只能(neng)在無(wu)氧(yang)環(huan)境下生(sheng)長，即(ji)厭氧(yang)培(pei)養(yang)法，目前常(chang)用的(de)厭氧(yang)培(pei)養(yang)法有厭氧(yang)罐(guan)法、氣袋法(fa)及(ji)厭(yan)氧(yang)箱等(deng)。
3. 細(xi)菌(jun)的(de)鑒定和分類(lei)
把(ba)獲得(de)純培(pei)養(yang)的(de)細菌(jun)進行(xing)壹系(xi)列(lie)生(sheng)物(wu)學特(te)性(xing)的(de)檢查(zha)，並(bing)確定(ding)其分(fen)類(lei)學上(shang)的(de)位置，這個過(guo)程(cheng)叫細菌(jun)鑒定。細菌(jun)生物(wu)學性(xing)狀(zhuang)包括(kuo)菌(jun)落(luo)形(xing)態(tai)、菌(jun)體形(xing)態(tai)、染色(se)性(xing)質(zhi)、生化(hua)反應(ying)以及血(xue)清學反應(ying)特(te)性(xing)和特(te)異性(xing)噬菌(jun)體等(deng)。
細(xi)菌(jun)的(de)分類(lei)是根(gen)據其營養(yang)方式及各種生(sheng)物(wu)學特(te)性(xing)親緣(yuan)關系(xi)，將細菌(jun)劃(hua)分為(wei)不(bu)同的(de)門、綱(gang)、目(mu)、科、屬、種，其(qi)基本(ben)分類(lei)單位是種。
（）菌(jun)落(luo)形(xing)態(tai)：菌(jun)落(luo)的(de)特(te)征是識別(bie)細菌(jun)的(de)重要依據，觀察菌(jun)落(luo)特(te)征時(shi)應(ying)註意：邊(bian)緣(yuan)是整(zheng)齊(qi)的(de)、還(hai)是鋸齒的(de)，表面(mian)是光滑(hua)的(de)、還(hai)是粗(cu)糙(cao)的(de)，中(zhong)間是突起的(de)、還(hai)是凹(ao)陷(xian)的(de)，是透(tou)明的(de)、還(hai)是半透(tou)明或(huo)不(bu)透(tou)明的(de)。如(ru)乙(yi)型溶血(xue)性(xing)鏈球菌(jun)，在血(xue)瓊(qiong)脂平(ping)皿(min)上(shang)，菌(jun)落(luo)灰(hui)白色(se)，圓形(xing)，稍(shao)凸(tu)起，透(tou)明或(huo)半透(tou)明，表面(mian)光滑(hua)，菌(jun)落(luo)周(zhou)圍(wei)可見(jian)透(tou)明的(de)溶血(xue)環。而(er)綠膿(nong)桿(gan)菌(jun)，在選擇性(xing)培養(yang)基（NAC）上(shang)菌(jun)落(luo)扁平，邊(bian)緣(yuan)不(bu)整(zheng)齊(qi)，大(da)小不(bu)壹，表面(mian)濕(shi)潤、有(you)光澤，菌(jun)落(luo)周(zhou)圍(wei)有(you)藍(lan)綠色(se)或(huo)褐色(se)色(se)素擴(kuo)散，但也(ye)有(you)不(bu)產生(sheng)色(se)素的(de)菌(jun)株。這些(xie)菌(jun)落(luo)特(te)征在細(xi)菌(jun)的(de)鑒定中(zhong)均有壹(yi)定意義。
（2）細菌(jun)的(de)生化(hua)反應(ying)特(te)性(xing)：各種細(xi)菌(jun)具有(you)各自*的(de)酶(mei)系(xi)統(tong)，因而(er)在代(dai)謝過(guo)程(cheng)中(zhong)所(suo)產生(sheng)的(de)分解(jie)與(yu)合(he)成代謝(xie)產物(wu)也(ye)不(bu)同。這些(xie)代謝(xie)產物(wu)又各具不(bu)同的(de)生化(hua)特(te)點。根(gen)據此特(te)點，利(li)用生物(wu)化(hua)學方法來(lai)鑒別(bie)不(bu)同細菌(jun)，稱為(wei)細菌(jun)的(de)生化(hua)反應(ying)試驗。生化(hua)反應(ying)試驗方法很(hen)多，主(zhu)要(yao)有(you)以下幾(ji)種：
①糖(tang)（醇(chun)）類(lei)發(fa)酵試(shi)驗：是鑒定細菌(jun)的(de)生化(hua)反應(ying)試驗中(zhong)zui主要的(de)試驗(yan)，不(bu)同細菌(jun)可發(fa)酵不(bu)同的(de)糖(tang)類(lei)，如(ru)沙門菌(jun)可發(fa)酵葡(pu)萄(tao)糖(tang)，但不(bu)能發(fa)酵乳糖(tang)，大腸(chang)桿(gan)菌(jun)則可發(fa)酵葡(pu)萄(tao)糖(tang)和乳糖(tang)；即(ji)使兩(liang)種細(xi)菌(jun)均可發(fa)酵同壹種糖(tang)類(lei)，其(qi)發(fa)酵結(jie)果也(ye)不(bu)盡(jin)相(xiang)同，如(ru)誌賀菌(jun)和大(da)腸桿(gan)菌(jun)均可發(fa)酵葡(pu)萄(tao)糖(tang)，但前(qian)者僅產(chan)酸，而(er)後者則產(chan)酸、產(chan)氣(qi)，故可利(li)用此試(shi)驗(yan)鑒別(bie)細菌(jun)。
②葡萄(tao)糖(tang)代謝(xie)類(lei)型鑒別(bie)試驗：可用於葡(pu)萄(tao)球菌(jun)與(yu)微球菌(jun)的(de)鑒別(bie)。
③β-半乳糖(tang)苷酶(mei)試驗（ONPG）：分(fen)解乳糖(tang)的(de)細菌(jun)ONPG試驗(yan)為(wei)陽性(xing)，如(ru)埃希(xi)氏菌(jun)屬、枸(gou)櫞(yuan)酸桿(gan)菌(jun)屬、克(ke)雷伯(bo)菌(jun)屬和(he)沙雷氏菌(jun)屬等(deng)。而(er)不(bu)發(fa)酵乳糖(tang)的(de)細菌(jun)如(ru)沙門菌(jun)、變(bian)形桿(gan)菌(jun)和腸(chang)桿(gan)菌(jun)科中(zhong)其他(ta)不(bu)發(fa)酵乳糖(tang)的(de)細菌(jun)ONPG試驗(yan)均為(wei)陰性(xing)。
④其他(ta)生化(hua)試驗：如(ru)澱(dian)粉(fen)水(shui)解試(shi)驗、七(qi)葉苷水(shui)解試(shi)驗、甲(jia)基紅(hong)試驗(yan)及(ji)VP試(shi)驗等(deng)。
（3）革蘭氏染色(se)法(fa)：染色(se)除(chu)能觀察細(xi)菌(jun)形態(tai)外，還(hai)可根(gen)據其染色(se)反應(ying)，將細菌(jun)分為(wei)革蘭氏陽性(xing)和革(ge)蘭氏陰性(xing)菌(jun)兩(liang)大類(lei)。如(ru)沙門菌(jun)屬、誌賀菌(jun)屬、巴斯(si)德(de)桿(gan)菌(jun)及耶(ye)爾森菌(jun)等均(jun)為(wei)革蘭氏陰性(xing)菌(jun)，革蘭(lan)氏陽性(xing)菌(jun)有肺炎鏈球菌(jun)、單核細(xi)胞(bao)增生性(xing)李斯(si)特(te)桿(gan)菌(jun)、金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)、鼠(shu)棒(bang)狀(zhuang)桿(gan)菌(jun)等。
（4）血(xue)清學鑒定：除生化鑒定外，必要時(shi)可進(jin)行(xing)血清學鑒定。如(ru)沙門菌(jun)屬、誌賀菌(jun)屬、綠膿(nong)桿(gan)菌(jun)、耶(ye)爾森菌(jun)等均(jun)可做(zuo)血清學分(fen)型試驗(yan)。
根(gen)據送(song)檢動(dong)物(wu)的(de)不(bu)同級別(bie)，對所(suo)需檢(jian)查(zha)的(de)病原(yuan)菌(jun)進行(xing)逐項(xiang)排(pai)查(zha)，zui後(hou)得(de)出檢測(ce)結論(lun)。