人(ren)Apelin-3試(shi)劑盒檢測(ce)說(shuo)明(ming)

人(ren)Apelin-3試(shi)劑(ji)盒檢測(ce)說(shuo)明(ming)

本(ben)試劑(ji)僅(jin)供(gong)研究(jiu)使(shi)用 標本(ben)：血(xue)清或(huo)血(xue)漿(jiang)

試驗原(yuan)理(li)：
人Apelin-3試劑(ji)盒是(shi)固相(xiang)夾心(xin)法(fa)酶聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已知Apelin-3濃(nong)度的標(biao)準品(pin)、未知濃(nong)度的樣(yang)品(pin)加入微孔(kong)酶標(biao)板內進(jin)行(xing)檢測(ce)。先(xian)將Apelin-3和(he)標記的抗(kang)體(ti)同(tong)時(shi)溫(wen)育。洗(xi)滌後，加入(ru)親(qin)和(he)素(su)標記過(guo)的HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育和(he)洗(xi)滌，去除未(wei)結(jie)合的酶結(jie)合物，然後(hou)加(jia)入底物A、B，和(he)酶結(jie)合物同(tong)時(shi)作(zuo)用(yong)。產(chan)生(sheng)顏(yan)色(se)。顏色的深淺和(he)樣品(pin)中Apelin-3的濃(nong)度呈比(bi)例關(guan)系(xi)。

操(cao)作(zuo)註意事(shi)項(xiang)
試(shi)劑應按(an)標簽說明書(shu)儲存(cun)，使用(yong)前恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀稀(xi)過後的標(biao)準品(pin)應丟棄(qi)，不可保(bao)存(cun)。
實驗中不用(yong)的板條(tiao)應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋(dai)中，密封保(bao)存(cun)，以(yi)免(mian)變質(zhi)。
不用(yong)的其(qi)它(ta)試劑(ji)應包(bao)裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不同(tong)批(pi)號(hao)的試(shi)劑不要(yao)混用。保(bao)質前使(shi)用(yong)。
使用(yong)壹次性的吸(xi)頭以(yi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染，吸(xi)取(qu)終止(zhi)液和(he)底物A、B液時，避免(mian)使用(yong)帶金屬(shu)部分的加(jia)樣器(qi)。
使(shi)用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑(su)料容器(qi)配置洗(xi)滌液。使用前充(chong)分(fen)混勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的各(ge)種成(cheng)份及樣品(pin)。
洗(xi)滌酶標(biao)板時(shi)應充(chong)分(fen)拍幹(gan)，不要(yao)將吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶標(biao)反應孔(kong)中吸(xi)水(shui)。
底物A應揮(hui)發(fa)，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底物B對(dui)光(guang)敏感，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)光(guang)下(xia)。避(bi)免(mian)用手接(jie)觸，有(you)毒。實驗完成(cheng)後(hou)應立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值。
加(jia)入試(shi)劑(ji)的順(shun)序(xu)應壹致，以(yi)保(bao)證(zheng)所有反應板孔(kong)溫(wen)育的時(shi)間壹樣。
按(an)照說(shuo)明書(shu)中標明的時(shi)間、加液的量(liang)及順(shun)序(xu)進(jin)行(xing)溫(wen)育操(cao)作。

樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
血(xue)清-----操作(zuo)過程中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)。使用(yong)不含熱原(yuan)和(he)內毒素(su)的試(shi)管(guan)。收(shou)集血(xue)液後，000×g離心(xin)0分鐘(zhong)將血(xue)清和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心(xin)地分離。
血(xue)漿(jiang)-----人Apelin-3EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽、肝(gan)素(su)血(xue)漿(jiang)可用(yong)於(yu)檢測(ce)。000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去除顆(ke)粒。
細胞(bao)上(shang)清液---000×g離心(xin)0分鐘(zhong)去除顆(ke)粒和(he)聚合(he)物。
組織勻(yun)漿(jiang)-----將組織加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。000×g離心(xin)0分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清液
保(bao)存(cun)------如果(guo)樣(yang)品(pin)不立(li)即(ji)使用，應將其(qi)分成(cheng)小部分-70 ℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反復(fu)冷凍。盡(jin)可能的不要(yao)使(shi)用溶血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如果(guo)血(xue)清中大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢測(ce)前先(xian)離心(xin)或(huo)過濾(lv)。不要(yao)在37℃或(huo)更高(gao)的溫(wen)度加熱解(jie)凍。應在室溫(wen)下解(jie)凍並確保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍。

試劑(ji)的準備(bei)
標(biao)準品(pin)：標準品(pin)的系(xi)列(lie)稀(xi)釋(shi)應在實驗時準備(bei)，不能儲存(cun)。稀釋(shi)前將標準品(pin)振蕩混勻(yun)。稀(xi)釋(shi)比(bi)例按(an)下表(biao)中(zhong)進(jin)行(xing)：
80 ng/ml （6號標準品(pin)） 原(yuan)倍(bei)濃(nong)度不用(yong)稀(xi)釋直接(jie)加(jia)入(ru)50ul。
40 ng/ml （5號(hao)標準品(pin)） 00ul的原(yuan)倍(bei)標準品(pin)加入00ul的標(biao)準品(pin)稀釋液
20 ng/ml （4號標準品(pin)） 00ul的5號(hao)標準品(pin)加入00ul的標(biao)準品(pin)稀釋液
0 ng/ml （3號標準品(pin)） 00ul的4號(hao)標準品(pin)加入00ul的標(biao)準品(pin)稀釋液
5.0 ng/ml （2號標準品(pin)） 00ul的3號(hao)標準品(pin)加入00ul的標(biao)準品(pin)稀釋液
2.5 ng/ml （號標準品(pin)） 00ul的2號(hao)標準品(pin)加入00ul的標(biao)準品(pin)稀釋液
0 ng/ml （空白對(dui)照(zhao)） 原(yuan)始濃(nong)度不用(yong)稀(xi)釋直接(jie)加(jia)入(ru)50ul。

洗(xi)滌緩(huan)沖(chong)液（50×）的稀(xi)釋：蒸(zheng)餾(liu)水50倍稀釋(shi)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)
使(shi)用(yong)前，將所有(you)試(shi)劑充(chong)分混勻(yun)。不要(yao)使(shi)液體(ti)產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的泡(pao)沫，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加(jia)入大(da)量(liang)的氣泡，產(chan)生(sheng)加(jia)樣(yang)上(shang)的誤差(cha)。
根(gen)據(ju)待測(ce)樣(yang)品(pin)數量(liang)加(jia)上(shang)標(biao)準品(pin)的數量(liang)決定(ding)所需(xu)的板條(tiao)數。每個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空白孔(kong)建議(yi)做復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自(zi)己的數量(liang)來定(ding)，能使用復(fu)孔(kong)的盡(jin)量(liang)做復(fu)孔(kong)。標本(ben)用標(biao)本(ben)稀釋(shi)液：稀釋後(hou)加(jia)入(ru)50ul於(yu)反應孔(kong)內。
加入稀釋(shi)好(hao)後(hou)的標(biao)準品(pin)50ul於(yu)反應孔(kong)、加入(ru)待測(ce)樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應孔(kong)內。立即加入(ru)50ul的標(biao)記的抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板，輕(qing)輕振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育小(xiao)時。
甩去孔(kong)內液體(ti)，每孔(kong)加滿洗(xi)滌液，振蕩30秒，甩去洗(xi)滌液，用吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復(fu)此操(cao)作3次。如果(guo)用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數增(zeng)加(jia)壹次。
每孔(kong)加入(ru)80ul的親(qin)和(he)鏈酶素(su)-HRP，輕輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
甩去孔(kong)內液體(ti)，每孔(kong)加滿洗(xi)滌液，振蕩30秒，甩去洗(xi)滌液，用吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復(fu)此操(cao)作3次。如果(guo)用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數增(zeng)加(jia)壹次。
每孔(kong)加入(ru)底物A、B各(ge)50ul，輕輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘。避(bi)免(mian)光照(zhao)。
取(qu)出酶標(biao)板，迅(xun)速(su)加(jia)入(ru)50ul終止(zhi)液，加入終止(zhi)液後應立(li)即(ji)測(ce)定(ding)結果(guo)。
在450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

局(ju)限
6號標(biao)準品(pin)以(yi)上(shang)的結(jie)果(guo)為(wei)非(fei)線性的，根(gen)據(ju)此(ci)標(biao)準曲線(xian)無(wu)法(fa)得到(dao)的結(jie)果(guo)。

人(ren)Apelin-3試(shi)劑盒性能
. 靈敏度：zui小的檢測(ce)濃(nong)度小於(yu)號(hao)標(biao)準品(pin)。稀釋度的線(xian)性。樣品(pin)線性回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃(nong)度相(xiang)關系(xi)數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特異性：不與(yu)其(qi)它(ta)細胞(bao)因子反應。
3. 重(zhong)復(fu)性：板內、板間(jian)變異系(xi)數均(jun)小(xiao)於(yu)0%。

結(jie) 果(guo) 判(pan) 斷(duan) 與 分(fen) 析(xi)
、儀(yi)器(qi)值(zhi)：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的酶標(biao)儀上(shang)讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)

2、以(yi)吸(xi)光(guang)度OD值為(wei)縱(zong)坐標（Y），相(xiang)應的Apelin-3標(biao)準品(pin)濃(nong)度為(wei)橫坐標（X），做得相(xiang)應的曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的Apelin-3含量(liang)可根(gen)據(ju)其(qi)OD值由(you)標準曲線(xian)換(huan)算出相(xiang)應的濃(nong)度。

3、檢測(ce)值(zhi)範(fan)圍：0-80ng/ml

4、敏感(gan)度： 0. ng/ml