人血栓調節蛋白（TM）試劑盒實(shi)驗(yan)檢測

人血(xue)栓調節蛋白（TM）試劑盒實(shi)驗(yan)檢測

本(ben)試劑僅供研(yan)究(jiu)使用 標本(ben)：血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)漿(jiang)

試驗(yan)原理：
人(ren)血(xue)栓調節蛋白TM試劑盒是(shi)固(gu)相(xiang)夾(jia)心法(fa)酶聯(lian)免疫吸(xi)附實驗(yan)（ELISA）.已知TM濃(nong)度(du)的標準品、未(wei)知(zhi)濃(nong)度(du)的樣(yang)品加入(ru)微(wei)孔酶標板(ban)內進行(xing)檢測。先將TM和(he)標記的抗體同時溫育(yu)。洗(xi)滌後，加(jia)入(ru)親(qin)和(he)素標記過的HRP。再經(jing)過(guo)溫育(yu)和(he)洗(xi)滌，去除(chu)未(wei)結(jie)合的酶結合(he)物(wu)，然後加入(ru)底物(wu)A、B，和(he)酶結合(he)物(wu)同時作用。產生(sheng)顏色(se)。顏色(se)的深(shen)淺和(he)樣品中TM的濃(nong)度(du)呈比(bi)例(li)關系。

操(cao)作註(zhu)意(yi)事項
試劑應按(an)標簽(qian)說(shuo)明(ming)書儲存(cun)，使用前(qian)恢(hui)復(fu)到(dao)室溫。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的標準品應丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保存(cun)。
實驗(yan)中不用的板(ban)條應立(li)即放回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密封(feng)保存(cun)，以免變質。
不用的其它試劑應包(bao)裝(zhuang)好或(huo)蓋好。不同批(pi)號(hao)的試劑不要混(hun)用(yong)。保質(zhi)前(qian)使用。
使用壹(yi)次性的吸(xi)頭以免交叉(cha)汙染(ran)，吸(xi)取(qu)終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免使用帶(dai)金屬(shu)部分(fen)的加(jia)樣器。
使用幹(gan)凈(jing)的塑(su)料容器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌液(ye)。使用前(qian)充(chong)分混勻(yun)試劑盒裏(li)的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
洗(xi)滌酶標板(ban)時應充(chong)分拍(pai)幹(gan)，不要將吸(xi)水紙(zhi)直(zhi)接放入(ru)酶標反應孔(kong)中吸水。
底物(wu)A應揮(hui)發(fa)，避(bi)免長時間打(da)開蓋子。底物(wu)B對光(guang)敏感(gan)，避(bi)免長時間暴露(lu)於光(guang)下。避(bi)免用手(shou)接觸，有毒(du)。實驗(yan)完(wan)成(cheng)後應立(li)即讀(du)取(qu)OD值。
加入(ru)試劑的順序(xu)應壹(yi)致，以保證所有反(fan)應板(ban)孔溫育(yu)的時間壹(yi)樣。
按(an)照(zhao)說明(ming)書中標明(ming)的時間、加液(ye)的量(liang)及(ji)順序(xu)進行(xing)溫育(yu)操(cao)作。

樣品收集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法(fa)
血清(qing)-----操(cao)作過程中避(bi)免任何(he)細胞刺(ci)激。使用不含熱(re)原(yuan)和(he)內毒素(su)的試管(guan)。收集血(xue)液(ye)後，000×g離心0分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅細胞迅速(su)小(xiao)心地(di)分(fen)離。
血(xue)漿(jiang)-----人(ren)血(xue)栓調節蛋白TMEDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢(jian)測。000×g離心30分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒。
細胞上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離心0分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合物(wu)。
組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)-----將組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水搗(dao)碎(sui)。000×g離心0分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)
保存(cun)------如果(guo)樣品不立(li)即使用，應將其分成(cheng)小部分(fen)-70 ℃保存(cun)，避(bi)免反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能的不要使用溶(rong)血(xue)或(huo)高(gao)血脂血。如果(guo)血清(qing)中大量(liang)顆(ke)粒，檢測前先離心或(huo)過(guo)濾(lv)。不要在(zai)37℃或(huo)更(geng)高的溫度加熱(re)解(jie)凍。應在(zai)室溫下解凍(dong)並(bing)確(que)保樣(yang)品均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

試劑的準(zhun)備
標準品：標準品的系列稀(xi)釋應在(zai)實驗(yan)時準(zhun)備，不能儲存(cun)。稀(xi)釋前(qian)將標準品振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)。稀(xi)釋比(bi)例(li)按(an)下(xia)表中進行(xing)：
4.0 ug/ml （6號(hao)標準品） 原倍(bei)濃(nong)度(du)不用稀(xi)釋直(zhi)接加入(ru)50ul。
2.0 ug/ml （5號(hao)標準品） 00ul的原(yuan)倍(bei)標準品加入(ru)00ul的標準品稀(xi)釋液(ye)
.0 ug/ml （4號(hao)標準品） 00ul的5號(hao)標準品加入(ru)00ul的標準品稀(xi)釋液(ye)
0.5 ug/ml （3號(hao)標準品） 00ul的4號(hao)標準品加入(ru)00ul的標準品稀(xi)釋液(ye)
0.25 ug/ml （2號(hao)標準品） 00ul的3號(hao)標準品加入(ru)00ul的標準品稀(xi)釋液(ye)
0.25 ug/ml （號(hao)標準品） 00ul的2號(hao)標準品加入(ru)00ul的標準品稀(xi)釋液(ye)
0 ug/ml （空白(bai)對照(zhao)） 原始濃(nong)度(du)不用稀(xi)釋直(zhi)接加入(ru)50ul。

洗(xi)滌緩沖(chong)液(ye)（50×）的稀(xi)釋：蒸(zheng)餾水50倍(bei)稀(xi)釋。

操(cao)作步(bu)驟
使用前(qian)，將所(suo)有試劑充分(fen)混勻(yun)。不要使液(ye)體產生(sheng)大量(liang)的泡沫(mo)，以免加樣(yang)時加(jia)入(ru)大量(liang)的氣(qi)泡，產生(sheng)加樣(yang)上的誤差(cha)。
根(gen)據待測樣品數(shu)量(liang)加上(shang)標準品的數(shu)量(liang)決定(ding)所需(xu)的板(ban)條數(shu)。每個標準品和(he)空白(bai)孔(kong)建(jian)議(yi)做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個樣品根(gen)據自己的數(shu)量(liang)來定(ding)，能使用復(fu)孔(kong)的盡量(liang)做復(fu)孔(kong)。標本(ben)用(yong)標本(ben)稀(xi)釋液(ye)：稀(xi)釋後(hou)加入(ru)50ul於反(fan)應孔(kong)內。
加入(ru)稀(xi)釋好後(hou)的標準品50ul於反(fan)應孔(kong)、加入(ru)待測樣品50ul於反(fan)應孔(kong)內。立(li)即加(jia)入(ru)50ul的標記的抗體。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)小時。
甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體，每孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩去(qu)洗(xi)滌液(ye)，用吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作3次。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次。
每孔加入(ru)80ul的親(qin)和(he)鏈(lian)酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
甩去(qu)孔內液(ye)體，每孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩去(qu)洗(xi)滌液(ye)，用吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操(cao)作3次。如果用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次。
每孔加入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)0分鐘(zhong)。避(bi)免光(guang)照(zhao)。
取(qu)出酶標板(ban)，迅速(su)加(jia)入(ru)50ul終止(zhi)液(ye)，加入(ru)終止(zhi)液(ye)後應立(li)即測定(ding)結果(guo)。
在(zai)450nm波(bo)長(chang)處測定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。

人血(xue)栓調節蛋白TM試劑盒性能
. 靈敏(min)度：zui小的檢(jian)測濃(nong)度(du)小於號(hao)標準品。稀(xi)釋度(du)的線(xian)性。樣品線性回(hui)歸(gui)與(yu)預期(qi)濃(nong)度(du)相關系數(shu)R值為0.990。
2. 特(te)異性：不與(yu)其它細胞因(yin)子反應。
3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間變異系數(shu)均(jun)小(xiao)於0%。

結 果(guo) 判(pan) 斷 與(yu) 分(fen) 析
、儀(yi)器值：於波(bo)長(chang)450nm的酶標儀上讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的OD值

2、以吸光(guang)度OD值為縱坐標（Y），相應的TM標準品濃(nong)度(du)為橫坐標（X），做得相應的曲(qu)線，樣品的TM含量(liang)可(ke)根(gen)據其OD值由標準曲線換(huan)算出相(xiang)應的濃(nong)度(du)。

3、檢測值範圍：0-4.0ug/ml

4、敏(min)感(gan)度： 0.0 ug/ml