大鼠生長(chang)激(ji)素(su)受體(ti)（GHR）試(shi)劑(ji)盒實(shi)驗(yan)原理

大(da)鼠生長(chang)激(ji)素(su)受體(ti)（GHR）試(shi)劑(ji)盒實(shi)驗(yan)原理

本試劑(ji)僅供(gong)研究(jiu)使(shi)用  標本：組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)

試驗(yan)原理：
大鼠生長(chang)激(ji)素(su)受體(ti)GHR試(shi)劑(ji)盒是(shi)固相(xiang)夾(jia)心(xin)法酶(mei)聯(lian)免疫吸附實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知GHR濃(nong)度(du)的標準品、未(wei)知(zhi)濃(nong)度(du)的樣品加入微孔(kong)酶標板內(nei)進行(xing)檢(jian)測(ce)。先將GHR和標記的抗體同(tong)時(shi)溫育(yu)。洗(xi)滌(di)後(hou)，加(jia)入親和素(su)標記過的HRP。再經過溫育(yu)和洗(xi)滌(di)，去(qu)除(chu)未(wei)結合(he)的酶結合(he)物(wu)，然後(hou)加(jia)入底物(wu)A、B，和酶結合(he)物(wu)同(tong)時(shi)作用。產生顏色。顏色的深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中GHR的濃(nong)度(du)呈比例(li)關(guan)系。

操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項
． 試劑(ji)應(ying)按標簽說明書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用前恢(hui)復到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的標準品應(ying)丟棄(qi)，不可(ke)保存(cun)。
2． 實(shi)驗(yan)中不用的板條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)包裝袋中，密封(feng)保(bao)存(cun)，以(yi)免變質(zhi)。
3． 不(bu)用的其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包裝好(hao)或蓋好(hao)。不同(tong)批(pi)號(hao)的試劑(ji)不要(yao)混用。保質(zhi)前(qian)使(shi)用。
4． 使(shi)用壹(yi)次性(xing)的吸頭(tou)以(yi)免交叉汙(wu)染，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液和底物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避免使(shi)用帶(dai)金(jin)屬(shu)部分的加樣器(qi)。
5． 使(shi)用幹凈的塑料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液。使(shi)用前充(chong)分混勻試劑(ji)盒裏的各種(zhong)成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。
6． 洗(xi)滌(di)酶標板時(shi)應(ying)充(chong)分拍(pai)幹，不(bu)要將吸水紙直(zhi)接放(fang)入酶標反應(ying)孔中吸水。
7． 底物(wu)A應(ying)揮發(fa)，避免長(chang)時(shi)間打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)。底(di)物(wu)B對(dui)光敏(min)感(gan)，避免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於(yu)光下。避免用手接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成後(hou)應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
8． 加(jia)入試劑(ji)的順序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以保(bao)證所有(you)反應(ying)板孔(kong)溫育(yu)的時(shi)間壹(yi)樣。
9． 按照說明書(shu)中標明的時(shi)間、加(jia)液的量及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)。

樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方(fang)法
、 血(xue)清-----操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)。使(shi)用不含熱(re)原和內(nei)毒(du)素(su)的試管。收集血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離(li)心(xin)0分鐘將血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心(xin)地分(fen)離。
2、 血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸檬酸鹽(yan)、肝素(su)血(xue)漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢測。000×g離心(xin)30分鐘去(qu)除(chu)顆粒。
3、 大(da)鼠生長(chang)激(ji)素(su)受體(ti)GHR細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)---000×g離(li)心(xin)0分鐘去(qu)除(chu)顆粒和聚合物(wu)。
4、 保(bao)存(cun)------如(ru)果樣(yang)品不立(li)即(ji)使(shi)用，應(ying)將其(qi)分(fen)成(cheng)小部分-70 ℃保存(cun)，避免反復冷(leng)凍。盡(jin)可(ke)能的不要使(shi)用溶血(xue)或高血(xue)脂血(xue)。如(ru)果血(xue)清中大量顆粒，檢(jian)測前先離(li)心(xin)或過濾(lv)。不要(yao)在(zai)37℃或更高的溫度(du)加(jia)熱(re)解(jie)凍。應(ying)在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍並(bing)確保樣(yang)品均(jun)勻地充(chong)分解(jie)凍。

試(shi)劑(ji)的準備
． 標準品：標準品的系列(lie)稀(xi)釋(shi)應(ying)在(zai)實(shi)驗(yan)時(shi)準備(bei)，不能(neng)儲(chu)存(cun)。稀(xi)釋(shi)前(qian)將標準品振(zhen)蕩(dang)混勻。稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)按(an)下表(biao)中進行：
80 ng/ml （6號(hao)標準品） 原倍濃(nong)度(du)不(bu)用稀(xi)釋(shi)直(zhi)接(jie)加(jia)入50ul。
40 ng/ml （5號標準品） 00ul的原倍標準品加(jia)入00ul的標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
20 ng/ml （4號(hao)標準品） 00ul的5號標準品加(jia)入00ul的標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （3號(hao)標準品） 00ul的4號標準品加(jia)入00ul的標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
5.0 ng/ml （2號(hao)標準品） 00ul的3號標準品加(jia)入00ul的標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
2.5 ng/ml （號(hao)標準品） 00ul的2號標準品加(jia)入00ul的標準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （空白(bai)對照） 原始濃(nong)度(du)不(bu)用稀(xi)釋(shi)直(zhi)接(jie)加(jia)入50ul。

2． 洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液（50×）的稀(xi)釋(shi)：蒸餾(liu)水50倍稀(xi)釋(shi)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟
． 使(shi)用前，將所(suo)有(you)試劑(ji)充(chong)分混勻。不要使(shi)液(ye)體產(chan)生大量的泡沫，以免加樣時(shi)加入大量的氣泡，產生加樣上(shang)的誤差。
2． 根(gen)據待測樣(yang)品(pin)數量加(jia)上(shang)標準品的數量決(jue)定(ding)所需(xu)的板條數(shu)。每(mei)個標準品和空白(bai)孔建議(yi)做(zuo)復(fu)孔(kong)。每(mei)個(ge)樣品根(gen)據自己的數量來(lai)定(ding)，能使(shi)用復孔的盡量做(zuo)復(fu)孔(kong)。
3． 加(jia)入稀(xi)釋(shi)好(hao)後(hou)的標準品50ul於(yu)反應(ying)孔、加(jia)入待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應(ying)孔內(nei)。立(li)即(ji)加入50ul的標記的抗體。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕振蕩混勻，37℃溫育小時(shi)。
4． 甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸水紙拍(pai)幹。重(zhong)復此操(cao)作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。
5． 每孔(kong)加(jia)入80ul的親和鏈酶(mei)素(su)-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸水紙拍(pai)幹。重(zhong)復此操(cao)作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。
7． 每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育0分鐘。避免光照。
8． 取(qu)出(chu)酶標板，迅速(su)加(jia)入50ul終(zhong)止(zhi)液，加入終(zhong)止(zhi)液後(hou)應(ying)立(li)即(ji)測定結果。
9． 在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔(kong)的OD值(zhi)。

大(da)鼠生長(chang)激(ji)素(su)受體(ti)GHR試(shi)劑(ji)盒性(xing)能(neng)
. 靈敏(min)度(du)：zui小(xiao)的檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於(yu)號標準品。稀(xi)釋(shi)度(du)的線性(xing)。樣(yang)品(pin)線性(xing)回(hui)歸與預(yu)期濃(nong)度(du)相(xiang)關(guan)系數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特(te)異性(xing)：不(bu)與人(ren)其(qi)它(ta)細(xi)胞(bao)因子(zi)反應(ying)。
3. 重復(fu)性(xing)：板(ban)內(nei)、板間(jian)變(bian)異系數均(jun)小於(yu)0%。

結 果 判(pan) 斷(duan) 與 分(fen) 析(xi)
、儀(yi)器(qi)值(zhi)：於(yu)波長(chang)450nm的酶標儀上(shang)讀(du)取(qu)各孔(kong)的OD值(zhi)

2、以(yi)吸光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標（Y），相應(ying)的GHR標準品濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應(ying)的曲線，樣品(pin)的GHR含量可(ke)根(gen)據其(qi)OD值(zhi)由(you)標準曲線換(huan)算(suan)出(chu)相應(ying)的濃(nong)度(du)。

3、檢(jian)測(ce)值(zhi)範圍：0-80ng/ml

4、敏(min)感(gan)度(du)： 0. ng/ml