大鼠(shu)纖(xian)溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)劑(ji)抑制(zhi)物（PAI-）試劑(ji)盒(he)分(fen)析(xi)

大(da)鼠纖溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)劑(ji)抑制(zhi)物（PAI-）試劑(ji)盒(he)分(fen)析(xi)

本試劑(ji)僅供(gong)研(yan)究使(shi)用  標本：血清或血漿

試驗(yan)原(yuan)理(li)：
大(da)鼠(shu)纖(xian)溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)劑(ji)抑制(zhi)物PAI-試劑(ji)盒(he)是(shi)固相(xiang)夾心(xin)法酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附實(shi)驗(yan)（ELISA）.已知(zhi)PAI-濃度(du)的標準(zhun)品、未知(zhi)濃(nong)度的樣品加入(ru)微孔(kong)酶標板(ban)內進(jin)行檢測(ce)。先(xian)將PAI-和(he)標記(ji)的抗體同(tong)時(shi)溫育(yu)。洗(xi)滌後(hou)，加入(ru)親(qin)和素標記(ji)過(guo)的HRP。再經過(guo)溫育(yu)和洗滌，去(qu)除(chu)未結(jie)合的(de)酶結合物，然(ran)後(hou)加入(ru)底(di)物A、B，和酶結合物同時(shi)作(zuo)用。產(chan)生(sheng)顏(yan)色。顏色的(de)深淺(qian)和樣品中(zhong)PAI-的濃(nong)度呈比例(li)關(guan)系。

操作(zuo)註意(yi)事(shi)項
． 試劑(ji)應按(an)標簽說明(ming)書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用前恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準(zhun)品應丟(diu)棄，不可保存(cun)。
2． 實(shi)驗(yan)中(zhong)不用的板(ban)條應(ying)立即放(fang)回包裝袋中(zhong)，密封(feng)保存(cun)，以(yi)免變質(zhi)。
3． 不用的其(qi)它(ta)試劑(ji)應包裝好(hao)或蓋好(hao)。不同批號(hao)的(de)試劑(ji)不要混(hun)用。保質(zhi)前使(shi)用。
4． 使(shi)用壹次性的吸(xi)頭(tou)以(yi)免交叉汙(wu)染，吸(xi)取(qu)終止液(ye)和底(di)物A、B液(ye)時，避(bi)免使(shi)用帶金(jin)屬部(bu)分的加樣器。
5． 使(shi)用幹凈的塑料(liao)容(rong)器配(pei)置(zhi)洗滌液(ye)。使(shi)用前充分混(hun)勻(yun)試劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)各種(zhong)成(cheng)份及(ji)樣品。
6． 洗滌酶標板(ban)時應(ying)充分拍幹，不要將(jiang)吸(xi)水紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶標反(fan)應孔中(zhong)吸(xi)水。
7． 底(di)物A應揮(hui)發(fa)，避免長(chang)時(shi)間打(da)開(kai)蓋子。底(di)物B對(dui)光敏(min)感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴露於光下。避免用手接(jie)觸，有(you)毒。實(shi)驗(yan)完成(cheng)後(hou)應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值。
8． 加入(ru)試劑(ji)的順(shun)序應壹致，以(yi)保(bao)證所有(you)反應(ying)板(ban)孔溫(wen)育的時間壹(yi)樣。
9． 按照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時間、加液(ye)的量(liang)及(ji)順序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作(zuo)。

樣品收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方(fang)法
、 血清-----操作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免(mian)任何(he)細胞刺激(ji)。使(shi)用不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素的試管。收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離(li)心(xin)0分(fen)鐘(zhong)將血清和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小心地(di)分離(li)。
2、 大(da)鼠(shu)纖(xian)溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)劑(ji)抑制(zhi)物PAI-血漿-----EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽、肝素血漿可用於檢測(ce)。000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘去除顆粒(li)。
3、 細胞上清液(ye)---000×g離心(xin)0分鐘(zhong)去除顆粒(li)和聚合物。
4、 保存(cun)------如(ru)果樣品不立即使(shi)用，應將其(qi)分(fen)成(cheng)小部(bu)分-70 ℃保存(cun)，避(bi)免反復(fu)冷(leng)凍。盡(jin)可能的不要使(shi)用溶血或高(gao)血(xue)脂(zhi)血。如(ru)果血清中(zhong)大量(liang)顆粒(li)，檢測(ce)前(qian)先(xian)離心(xin)或過(guo)濾。不要在(zai)37℃或更高(gao)的(de)溫度加熱(re)解凍。應在(zai)室溫下解凍並(bing)確保樣品均勻(yun)地充(chong)分(fen)解凍。

試劑(ji)的準(zhun)備
． 標準(zhun)品：標準(zhun)品的系(xi)列(lie)稀(xi)釋(shi)應在(zai)實驗(yan)時準(zhun)備，不能儲(chu)存(cun)。稀(xi)釋(shi)前將標(biao)準(zhun)品振蕩混勻(yun)。稀(xi)釋(shi)比例(li)按(an)下表中(zhong)進(jin)行：
80 ng/ml （6號(hao)標(biao)準(zhun)品） 原(yuan)倍濃度不用稀(xi)釋(shi)直接(jie)加入(ru)50ul。
40 ng/ml （5號(hao)標(biao)準(zhun)品） 00ul的原(yuan)倍標準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)
20 ng/ml （4號(hao)標(biao)準(zhun)品） 00ul的5號(hao)標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （3號(hao)標(biao)準(zhun)品） 00ul的4號(hao)標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)
5.0 ng/ml （2號(hao)標(biao)準(zhun)品） 00ul的3號(hao)標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)
2.5 ng/ml （號(hao)標(biao)準(zhun)品） 00ul的2號(hao)標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （空白(bai)對(dui)照） 原(yuan)始(shi)濃(nong)度(du)不用稀(xi)釋(shi)直接(jie)加入(ru)50ul。

2． 洗滌緩(huan)沖(chong)液(ye)（50×）的稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)50倍稀(xi)釋(shi)。

操作(zuo)步驟
． 使(shi)用前，將所有(you)試劑(ji)充分(fen)混勻。不要使(shi)液(ye)體產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡沫(mo)，以(yi)免加樣時加入(ru)大量(liang)的(de)氣泡，產(chan)生(sheng)加樣上的誤差。
2． 根(gen)據待(dai)測(ce)樣品數量(liang)加上標準(zhun)品的數量(liang)決(jue)定(ding)所需的(de)板(ban)條數。每個標(biao)準(zhun)品和空(kong)白(bai)孔建(jian)議(yi)做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個樣品根(gen)據自己的(de)數量(liang)來(lai)定(ding)，能(neng)使(shi)用復(fu)孔(kong)的盡(jin)量(liang)做(zuo)復(fu)孔(kong)。
3． 加入(ru)稀(xi)釋(shi)好(hao)後(hou)的(de)標(biao)準(zhun)品50ul於反(fan)應(ying)孔、加入(ru)待(dai)測(ce)樣品50ul於反(fan)應(ying)孔內。立(li)即加入(ru)50ul的標(biao)記的抗體。蓋上膜板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫育小時。
4． 甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液(ye)，振蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，用吸(xi)水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操作(zuo)3次。如果用洗板(ban)機(ji)洗滌，洗(xi)滌次數增加壹次。
5． 每孔(kong)加入(ru)80ul的親(qin)和鏈(lian)酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫育30分(fen)鐘。
6． 甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液(ye)，振蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，用吸(xi)水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操作(zuo)3次。如果用洗板(ban)機(ji)洗滌，洗(xi)滌次數增加壹次。
7． 每孔(kong)加入(ru)底(di)物A、B各50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩混勻(yun)，37℃溫育0分(fen)鐘。避免(mian)光照。
8． 取(qu)出(chu)酶標板(ban)，迅(xun)速(su)加入(ru)50ul終止(zhi)液(ye)，加入(ru)終止(zhi)液(ye)後(hou)應(ying)立(li)即(ji)測(ce)定(ding)結(jie)果。
9． 在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各孔(kong)的(de)OD值。

大(da)鼠纖溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)劑(ji)抑制(zhi)物PAI-試劑(ji)盒(he)性能
. 靈(ling)敏(min)度(du)：zui小的檢測(ce)濃(nong)度(du)小於號(hao)標(biao)準(zhun)品。稀(xi)釋(shi)度的線(xian)性。樣品線性回歸(gui)與預期(qi)濃度相(xiang)關(guan)系數R值為0.990。
2. 特異性：不與人其(qi)它(ta)細胞因(yin)子反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復(fu)性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異系數均小於0%。

結(jie) 果 判 斷(duan) 與 分 析(xi)
、儀(yi)器值：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的(de)酶標儀(yi)上讀取(qu)各孔(kong)的(de)OD值

2、以(yi)吸(xi)光度(du)OD值為縱(zong)坐標（Y），相(xiang)應的(de)PAI-標(biao)準(zhun)品濃度(du)為橫坐標（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應(ying)的曲(qu)線(xian)，樣品的PAI-含(han)量(liang)可根(gen)據其(qi)OD值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線(xian)換(huan)算(suan)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度。

3、檢測(ce)值(zhi)範圍：0-80ng/ml

4、敏(min)感(gan)度(du)： 0. ng/ml