IgG試(shi)劑(ji)盒(he)檢測分析(xi)

IgG試(shi)劑(ji)盒檢測分析(xi)

本(ben)試劑(ji)僅(jin)供(gong)研究使用(yong)  標(biao)本(ben)：血清(qing)或血(xue)漿(jiang)   

試驗原理(li)：
IgG試(shi)劑(ji)盒(he)是(shi)間接法酶聯(lian)免(mian)疫吸附實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知IgG濃度(du)的標(biao)準品(pin)、未(wei)知(zhi)濃度(du)的樣品加(jia)入微(wei)孔酶標(biao)板(ban)內(nei)進(jin)行檢測。先(xian)將IgG和標(biao)記的抗(kang)體同時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌(di)後(hou)，加(jia)入親(qin)和素標(biao)記過(guo)的HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)和(he)洗(xi)滌(di)，去(qu)除(chu)未(wei)結合(he)的酶結合(he)物(wu)，然後加(jia)入底物(wu)A、B，和(he)酶結合(he)物(wu)同時(shi)作用(yong)。產生顏(yan)色(se)。顏(yan)色(se)的深(shen)淺(qian)和樣品中IgG的濃(nong)度(du)呈(cheng)比(bi)例(li)關系。

操作註意事項(xiang)
試(shi)劑應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書儲存，使用(yong)前恢(hui)復(fu)到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的標(biao)準品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保(bao)存。
實(shi)驗中不(bu)用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)，密(mi)封保(bao)存，以(yi)免變(bian)質。
不(bu)用(yong)的其(qi)它試(shi)劑應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或蓋好。不同批(pi)號的試(shi)劑(ji)不要混用(yong)。保(bao)質前使用(yong)。
使用(yong)壹次(ci)性的吸(xi)頭(tou)以免交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取終(zhong)止液和(he)底物(wu)A、B液時(shi)，避免使用(yong)帶金(jin)屬部(bu)分的加(jia)樣器。
使用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑(su)料(liao)容(rong)器配(pei)置洗(xi)滌(di)液。使用(yong)前充分混勻(yun)試劑(ji)盒裏(li)的各種成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
洗滌(di)酶標(biao)板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將吸(xi)水(shui)紙直接(jie)放(fang)入酶標(biao)反(fan)應孔中(zhong)吸水。
底物(wu)A應(ying)揮發(fa)，避免長(chang)時(shi)間打開(kai)蓋子。底物(wu)B對光(guang)敏感，避免長(chang)時(shi)間暴露(lu)於光(guang)下(xia)。避免用(yong)手接觸，有毒。實(shi)驗完成(cheng)後(hou)應立即讀(du)取OD值(zhi)。
加(jia)入試(shi)劑的順(shun)序(xu)應壹致，以(yi)保(bao)證所(suo)有(you)反(fan)應板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時(shi)間(jian)壹樣。
按照(zhao)說(shuo)明書中標(biao)明的時(shi)間(jian)、加(jia)液的量(liang)及(ji)順序(xu)進行溫(wen)育(yu)操(cao)作。

樣品收集、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存方法
血(xue)清(qing)-----IgG操作過(guo)程中(zhong)避免任(ren)何(he)細胞刺激。使用(yong)不含熱(re)原和內(nei)毒(du)素的試(shi)管。收集血液後(hou)，000×g離心(xin)0分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。
血漿(jiang)-----EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可(ke)用(yong)於檢測。000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒。
細胞上(shang)清(qing)液---000×g離心(xin)0分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒和聚合(he)物(wu)。
保(bao)存------如果(guo)樣品不立即(ji)使用(yong)，應將(jiang)其(qi)分成(cheng)小(xiao)部(bu)分-70 ℃保(bao)存，避免反(fan)復冷凍(dong)。盡可(ke)能(neng)的不(bu)要(yao)使用(yong)溶(rong)血(xue)或高血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果(guo)血清(qing)中大(da)量顆(ke)粒，檢測前先離心(xin)或(huo)過(guo)濾。不(bu)要在(zai)37℃或更高的溫(wen)度(du)加(jia)熱(re)解凍(dong)。應在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍(dong)。

操作步(bu)驟(zhou)
使用(yong)前，將所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)充分混勻(yun)。不要(yao)使液體產生大量的泡(pao)沫(mo)，以免(mian)加(jia)樣時加(jia)入大(da)量的氣(qi)泡(pao)，產生加(jia)樣上的誤差(cha)。
根據(ju)待測樣品數(shu)量加(jia)上(shang)標(biao)準品(pin)的數(shu)量決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的板(ban)條(tiao)數(shu)。每個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空白孔(kong)建(jian)議做復(fu)孔(kong)。每個樣品根據(ju)自己的數(shu)量來定(ding)，能(neng)使用(yong)復孔(kong)的盡(jin)量(liang)做復孔(kong)。
加(jia)入稀(xi)釋(shi)好後的標(biao)準品(pin)50ul於反(fan)應孔、加(jia)入待(dai)測樣品50ul於反(fan)應孔內(nei)。立即加(jia)入50ul的標(biao)記的抗(kang)體。蓋上膜板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小(xiao)時。
甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸水(shui)紙拍幹(gan)。重復此(ci)操作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加(jia)壹次(ci)。
每孔(kong)加(jia)入80ul的親(qin)和(he)鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。
甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸水(shui)紙拍幹(gan)。重復此(ci)操作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加(jia)壹次(ci)。
每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各50ul，輕輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘(zhong)。避免光(guang)照(zhao)。
取(qu)出酶標(biao)板(ban)，迅速(su)加(jia)入50ul終(zhong)止液，加(jia)入終(zhong)止液後(hou)應(ying)立即(ji)測定(ding)結果(guo)。
在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔的OD值(zhi)。

試(shi)劑盒性(xing)能(neng)
. 靈敏度(du)：zui小(xiao)的檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於號標(biao)準品(pin)。稀(xi)釋(shi)度(du)的線性。樣品線性回(hui)歸與(yu)預期濃(nong)度(du)相(xiang)關系數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特(te)異性(xing)：IgG不(bu)與(yu)人(ren)其(qi)它細胞因(yin)子反(fan)應。
3. 重復性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數(shu)均(jun)小(xiao)於0%。

結 果(guo) 判(pan) 斷 與(yu) 分 析(xi)
、儀(yi)器值：於波(bo)長(chang)450nm的酶標(biao)儀(yi)上(shang)讀(du)取(qu)各孔的OD值(zhi)

2、以(yi)吸光(guang)度(du)OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相應(ying)的IgG標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做得(de)相(xiang)應(ying)的曲(qu)線，樣品的IgG含量(liang)可(ke)根據(ju)其(qi)OD值由(you)標(biao)準曲(qu)線換(huan)算出相(xiang)應(ying)的濃(nong)度(du)。

3、檢測值(zhi)範圍：0-80g/L

4、敏感度(du)： 0. g/L