人白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)-8（IL-8）試(shi)劑盒(he)實(shi)驗步(bu)驟

人(ren)白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)-8（IL-8）試(shi)劑盒(he)實(shi)驗步(bu)驟

本試(shi)劑僅供(gong)研(yan)究使(shi)用  標(biao)本：血(xue)清或血(xue)漿(jiang)

試(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)：
人(ren)白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)IL-8試(shi)劑盒(he)是固相夾心法(fa)酶聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知IL-8濃(nong)度的(de)標(biao)準品、未(wei)知濃(nong)度的(de)樣(yang)品加入微(wei)孔酶標(biao)板(ban)內(nei)進行(xing)檢測。先(xian)將(jiang)IL-8和(he)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)同時(shi)溫(wen)育。洗(xi)滌後，加入親和(he)素標(biao)記(ji)過的(de)HRP。再經過溫(wen)育和(he)洗(xi)滌，去除(chu)未(wei)結(jie)合的(de)酶結(jie)合物，然(ran)後加入底(di)物A、B，和(he)酶結(jie)合物同時(shi)作(zuo)用。產(chan)生顏色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和樣(yang)品中IL-8的(de)濃(nong)度呈比(bi)例(li)關(guan)系(xi)。

操(cao)作(zuo)註意(yi)事(shi)項
試(shi)劑應按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前(qian)恢(hui)復到室溫(wen)。稀稀過後的(de)標(biao)準品應丟(diu)棄，不(bu)可(ke)保存(cun)。
實(shi)驗中不(bu)用的(de)板(ban)條(tiao)應立即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋中，密(mi)封(feng)保存(cun)，以免(mian)變質(zhi)。
不(bu)用的(de)其它試(shi)劑應包(bao)裝好或蓋(gai)好。不(bu)同批(pi)號的(de)試(shi)劑不(bu)要混用。保(bao)質(zhi)前使(shi)用。
使(shi)用壹(yi)次性(xing)的(de)吸頭以免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)，吸取終止(zhi)液和底(di)物A、B液時(shi)，避免(mian)使用帶(dai)金屬部(bu)分(fen)的(de)加(jia)樣(yang)器(qi)。
使用幹(gan)凈(jing)的(de)塑料容器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌液。使用前(qian)充(chong)分混勻試(shi)劑盒(he)裏的(de)各種(zhong)成份(fen)及樣品。
洗滌酶標(biao)板(ban)時(shi)應充分(fen)拍幹(gan)，不(bu)要將(jiang)吸水紙直(zhi)接(jie)放(fang)入酶標(biao)反應孔中吸水。
底(di)物A應揮發(fa)，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)。底(di)物B對(dui)光(guang)敏感(gan)，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於光(guang)下(xia)。避免(mian)用手接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗完(wan)成後應立即(ji)讀取(qu)OD值(zhi)。
加入試劑的(de)順序(xu)應壹致(zhi)，以保證所(suo)有(you)反(fan)應板(ban)孔(kong)溫(wen)育的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
按照(zhao)說(shuo)明書(shu)中標(biao)明的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液的(de)量(liang)及順序(xu)進行(xing)溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

樣(yang)品收集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方(fang)法(fa)
血清(qing)-----操(cao)作(zuo)過程中避免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)。使(shi)用不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試(shi)管。收(shou)集(ji)血液後，000×g離心0分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地(di)分離。
人白細(xi)胞(bao)介素(su)IL-8血(xue)漿-----EDTA、檸檬(meng)酸鹽、肝素血(xue)漿可(ke)用於檢測。000×g離心30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒。
細(xi)胞(bao)上清(qing)液---000×g離心0分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合物。
保(bao)存(cun)------如(ru)果樣品不(bu)立即(ji)使用，應將(jiang)其分成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反復(fu)冷凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的(de)不(bu)要使用溶血(xue)或高(gao)血(xue)脂(zhi)血。如(ru)果血(xue)清中大量(liang)顆粒，檢測前先(xian)離心或過濾(lv)。不(bu)要在37℃或更(geng)高(gao)的(de)溫(wen)度加熱(re)解(jie)凍(dong)。應在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。

操作(zuo)步(bu)驟
使用前(qian)，將(jiang)所(suo)有(you)試(shi)劑充(chong)分(fen)混勻(yun)。不(bu)要使液體產生大量(liang)的(de)泡沫，以免(mian)加樣(yang)時(shi)加(jia)入大量(liang)的(de)氣泡，產生加樣(yang)上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
根(gen)據(ju)待(dai)測樣品數量(liang)加(jia)上(shang)標(biao)準品的(de)數量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數。每(mei)個(ge)標(biao)準品和空白(bai)孔(kong)建(jian)議(yi)做(zuo)復孔。每(mei)個(ge)樣品根據(ju)自(zi)己(ji)的(de)數量(liang)來定(ding)，能使(shi)用復(fu)孔(kong)的(de)盡(jin)量(liang)做(zuo)復孔。
加(jia)入稀釋好後的(de)標(biao)準品50ul於反應孔、加(jia)入待(dai)測樣品50ul於反應孔內(nei)。立即(ji)加(jia)入50ul的(de)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育小(xiao)時(shi)。
甩去孔(kong)內液體，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌液，振(zhen)蕩30秒，甩去洗(xi)滌液，用吸水紙拍(pai)幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌，洗滌次數增加壹次。
每(mei)孔加(jia)入80ul的(de)親和(he)鏈酶素(su)-HRP，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。
甩去孔(kong)內液體，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌液，振(zhen)蕩30秒，甩去洗(xi)滌液，用吸水紙拍(pai)幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌，洗滌次數增加壹次。
每(mei)孔加(jia)入底(di)物A、B各50ul，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘(zhong)。避免(mian)光(guang)照(zhao)。
取出(chu)酶標(biao)板(ban)，迅(xun)速(su)加入50ul終止液，加入終止液後應立即(ji)測定(ding)結果(guo)。
在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

試劑盒(he)性(xing)能
. 靈(ling)敏度：zui小的(de)檢測濃(nong)度小於號標(biao)準品。稀釋度的(de)線(xian)性(xing)。樣(yang)品線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與(yu)預(yu)期濃(nong)度相關(guan)系(xi)數R值(zhi)為0.990。
2. 特異性(xing)：人(ren)白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)IL-8不(bu)與其它細(xi)胞(bao)因子(zi)反(fan)應。
3. 重復(fu)性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變異(yi)系(xi)數均小於0%。

結 果(guo) 判 斷(duan) 與 分(fen) 析
、儀(yi)器(qi)值(zhi)：於波(bo)長(chang)450nm的(de)酶標(biao)儀上(shang)讀取(qu)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)

2、以吸光(guang)度OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)（Y），相應的(de)IL-8標(biao)準品濃(nong)度為橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應的(de)曲(qu)線(xian)，樣品的(de)IL-8含(han)量(liang)可(ke)根據(ju)其OD值(zhi)由標(biao)準曲(qu)線(xian)換算出相應的(de)濃(nong)度。

3、檢測值(zhi)範圍(wei)：0-800pg/ml

4、敏(min)感(gan)度： .0 pg/ml