人(ren)抗(kang)骨骼肌(ji)抗(kang)體(ti)（ASA）試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書

人(ren)抗(kang)骨骼肌(ji)抗(kang)體(ti)(ASA)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書

實(shi)驗(yan)原理(li)：
人(ren)抗(kang)骨骼肌(ji)抗(kang)體(ti)ASA試劑(ji)盒是(shi)固(gu)相(xiang)夾心(xin)法(fa)酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)實驗(yan)（ELISA）.已(yi)知(zhi)BFGF濃(nong)度(du)的標準(zhun)品(pin)、未知(zhi)濃度(du)的樣(yang)品(pin)加入(ru)微孔酶標(biao)板內進(jin)行檢(jian)測。先將(jiang)BFGF和標(biao)記的抗(kang)體(ti)同時(shi)溫育(yu)。人(ren)堿(jian)性(xing)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞生長(chang)因(yin)子ELISA 檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒洗(xi)滌(di)後，加入親和素標(biao)記(ji)過(guo)的HRP。再經(jing)過(guo)溫(wen)育和洗(xi)滌，去(qu)除(chu)未(wei)結合(he)的酶結合(he)物(wu)，然(ran)後加入底(di)物(wu)A、B，和酶結合(he)物(wu)同(tong)時作(zuo)用。產生顏色(se)。顏色(se)的深(shen)淺(qian)和樣(yang)品(pin)中(zhong)BFGF的濃度(du)呈比(bi)例(li)關系(xi)。

操作(zuo)註意(yi)事(shi)項

．試劑(ji)應按標簽(qian)說明(ming)書儲(chu)存(cun)，使(shi)用前(qian)恢(hui)復(fu)到(dao)室溫。稀稀(xi)過(guo)後的標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄，不可(ke)保存(cun)。
2．實驗(yan)中(zhong)不用的板條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放回包(bao)裝袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保存(cun)，以免(mian)變(bian)質(zhi)。
3．不用的其它(ta)試劑(ji)應包(bao)裝好或(huo)蓋(gai)好。不同(tong)批(pi)號(hao)的試劑(ji)不要(yao)混(hun)用。保質前(qian)使(shi)用。
4．使(shi)用壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭(tou)以(yi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染，吸(xi)取(qu)終(zhong)止液(ye)和底(di)物(wu)A、B液(ye)時，避免(mian)使(shi)用帶金屬部(bu)分(fen)的加樣(yang)器。
5．使(shi)用幹凈(jing)的塑料容器配置(zhi)洗(xi)滌液(ye)。使(shi)用前(qian)充分(fen)混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒裏(li)的各(ge)種成(cheng)份(fen)及(ji)樣(yang)品(pin)。
6．洗滌(di)酶標(biao)板時應(ying)充分拍(pai)幹，不要(yao)將(jiang)吸(xi)水(shui)紙直接放入酶標(biao)反應(ying)孔中(zhong)吸(xi)水(shui)。
7．底(di)物(wu)A應(ying)揮發，避免(mian)長(chang)時間打(da)開蓋(gai)子。底(di)物(wu)B對(dui)光敏(min)感，避免(mian)長(chang)時間暴(bao)露(lu)於光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後應立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值。
8．加入(ru)試(shi)劑(ji)的順(shun)序(xu)應(ying)壹(yi)致，以(yi)保證(zheng)所有反應(ying)板(ban)孔溫育的時間壹(yi)樣(yang)。
9．按照說明書中(zhong)標(biao)明的時間、加液(ye)的量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操作(zuo)。

樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方法(fa)
、血清(qing)-----人(ren)抗(kang)骨骼肌(ji)抗(kang)體(ti)ASA操作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任(ren)何(he)細胞刺(ci)激。使(shi)用不含熱(re)原和內毒(du)素的試管。收集(ji)血(xue)液(ye)後，000×g離心(xin)0分鐘將(jiang)血(xue)清和紅細胞迅(xun)速小(xiao)心(xin)地分(fen)離(li)。
2、血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可用於(yu)檢(jian)測。000×g離(li)心(xin)30分鐘去除(chu)顆(ke)粒。
3、細胞上(shang)清液(ye)---000×g離心(xin)0分鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物(wu)。
4、保存(cun)------如果(guo)樣(yang)品(pin)不立(li)即(ji)使(shi)用，應(ying)將(jiang)其分(fen)成小(xiao)部分(fen)-70 ℃保存(cun)，避免(mian)反復(fu)冷(leng)凍。盡(jin)可(ke)能的不要(yao)使(shi)用溶血或(huo)高(gao)血(xue)脂(zhi)血(xue)。如(ru)果血清中(zhong)大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測前(qian)先離心(xin)或過(guo)濾(lv)。不要(yao)在(zai)37℃或更高的溫度(du)加熱(re)解(jie)凍。應(ying)在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保樣(yang)品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍。

操作(zuo)步(bu)驟
．使(shi)用前(qian)，將(jiang)所有試(shi)劑(ji)充分(fen)混(hun)勻。不要(yao)使(shi)液(ye)體(ti)產生大(da)量(liang)的泡(pao)沫(mo)，以(yi)免加樣(yang)時加(jia)入大(da)量(liang)的氣(qi)泡(pao)，產生加(jia)樣(yang)上的誤差。
2．根據待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加上(shang)標準(zhun)品(pin)的數(shu)量(liang)決定(ding)所需的板條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標(biao)準(zhun)品(pin)和空白(bai)孔建議(yi)做(zuo)復孔。每個樣(yang)品(pin)根據自(zi)己(ji)的數(shu)量(liang)來定(ding)，能使(shi)用復(fu)孔的盡(jin)量(liang)做(zuo)復孔。
3．加入稀釋(shi)好後的標準(zhun)品(pin)50ul於反應(ying)孔、加入待測樣(yang)品(pin)50ul於反應(ying)孔內。立(li)即(ji)加(jia)入(ru)50ul的標記(ji)的抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上膜(mo)板(ban)，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育小(xiao)時。
4．甩(shuai)去孔內液(ye)體(ti)，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
5．每(mei)孔加入80ul的親和鏈(lian)酶素-HRP，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育30分鐘。
6．甩去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，振蕩(dang)30秒(miao)，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍幹。重(zhong)復此操作(zuo)3次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
7．每(mei)孔加入底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育0分鐘。避免(mian)光照。
8．取(qu)出(chu)酶標(biao)板，迅速(su)加入50ul終(zhong)止液(ye)，加入(ru)終(zhong)止液(ye)後應立(li)即(ji)測定(ding)結果(guo)。
9．在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各(ge)孔的OD值。

局限(xian)
6號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)以上(shang)的結果(guo)為非(fei)線性的，根據此標(biao)準(zhun)曲線無法(fa)得到(dao)的結果(guo)。

人(ren)抗(kang)骨骼肌(ji)抗(kang)體(ti)ASA試劑(ji)盒性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏(min)度(du)：zui小(xiao)的檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)。稀釋(shi)度(du)的線性。樣(yang)品(pin)線性回(hui)歸與預期(qi)濃度(du)相(xiang)關系(xi)數(shu)R值為0.990。
2. 特(te)異(yi)性(xing)：不與其它(ta)細胞因(yin)子反應(ying)。
3. 重(zhong)復性(xing)：板內、板(ban)間變(bian)異(yi)系(xi)數(shu)均(jun)小(xiao)於0%。

結果(guo)判斷(duan)與分析
、儀器值：於波(bo)長(chang)450nm的酶標(biao)儀上(shang)讀取(qu)各(ge)孔的OD值

2、以吸(xi)光度(du)OD值為縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應的BFGF標準(zhun)品(pin)濃度(du)為橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得相(xiang)應的曲線，樣(yang)品(pin)的BFGF含量(liang)可根據其OD值由標(biao)準(zhun)曲線換算(suan)出相(xiang)應的濃度(du)。

3、檢測值範圍：0-800pg/ml

4、敏(min)感度(du)： .0 pg/ml