人(ren)Biopyrrin試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)方法(fa)檢(jian)測

人(ren)Biopyrrin試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)方法(fa)檢(jian)測

本(ben)試(shi)劑(ji)僅供(gong)研(yan)究(jiu)使用 標(biao)本(ben)：血清(qing)或血(xue)漿(jiang)

試驗(yan)原理(li)：
人(ren)Biopyrrin試(shi)劑(ji)盒(he)是固相夾心法酶聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附實驗(yan)（ELISA）.已(yi)知(zhi)Biopyrrin濃(nong)度的標(biao)準品(pin)、未知(zhi)濃(nong)度的樣(yang)品(pin)加(jia)入微孔(kong)酶(mei)標(biao)板(ban)內進行檢測。先將Biopyrrin和(he)標記(ji)的抗(kang)體(ti)同(tong)時溫(wen)育。洗滌(di)後(hou)，加入親(qin)和(he)素標(biao)記過的(de)HRP。再(zai)經(jing)過溫(wen)育和(he)洗滌(di)，去(qu)除(chu)未結(jie)合(he)的酶結合物(wu)，然(ran)後加入底物(wu)A、B，和(he)酶結(jie)合物(wu)同(tong)時作用。產(chan)生(sheng)顏(yan)色。顏色的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)Biopyrrin的濃度呈(cheng)比例(li)關系(xi)。

操(cao)作註(zhu)意(yi)事項
試劑(ji)應(ying)按標簽說(shuo)明書儲(chu)存，使用前(qian)恢(hui)復到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的標(biao)準品(pin)應(ying)丟棄(qi)，不(bu)可保(bao)存。
實驗(yan)中(zhong)不(bu)用的(de)板(ban)條應(ying)立即放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋中，密(mi)封(feng)保(bao)存，以免(mian)變(bian)質(zhi)。
不(bu)用的(de)其(qi)它試(shi)劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要混用。保(bao)質前(qian)使用。
使用壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭以免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)，吸(xi)取終止(zhi)液和(he)底物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免(mian)使用帶金(jin)屬(shu)部(bu)分的(de)加(jia)樣(yang)器(qi)。
使用幹(gan)凈的塑料容器(qi)配(pei)置洗滌(di)液(ye)。使用前(qian)充分混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏的(de)各(ge)種成份及樣品(pin)。
洗滌(di)酶(mei)標板(ban)時應(ying)充分拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將吸(xi)水(shui)紙(zhi)直接(jie)放(fang)入酶標反應(ying)孔(kong)中(zhong)吸(xi)水(shui)。
底物(wu)A應(ying)揮(hui)發(fa)，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)打開(kai)蓋子(zi)。底物(wu)B對(dui)光敏感，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴(bao)露於(yu)光(guang)下。避(bi)免(mian)用手(shou)接(jie)觸(chu)，有(you)毒(du)。實驗(yan)完(wan)成後應(ying)立即讀取(qu)OD值(zhi)。
加入試劑(ji)的順(shun)序應(ying)壹致(zhi)，以保(bao)證所(suo)有(you)反應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育的(de)時間(jian)壹(yi)樣。
按照說明(ming)書中標(biao)明的(de)時間(jian)、加(jia)液的(de)量及順(shun)序進行溫(wen)育操(cao)作。

樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理(li)及保(bao)存方法(fa)
血(xue)清-----操作過程(cheng)中避(bi)免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺激。使用不(bu)含熱(re)原和(he)內毒(du)素的試(shi)管。收集血液(ye)後(hou)，000×g離心0分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速小心地分離。
人(ren)Biopyrrin血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸檬(meng)酸鹽、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可用於(yu)檢(jian)測。000×g離心30分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)。
細(xi)胞(bao)上(shang)清液---000×g離心0分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚合(he)物(wu)。
組織(zhi)勻漿(jiang)-----將組織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗碎(sui)。000×g離心0分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清液
保(bao)存------如(ru)果(guo)樣品(pin)不(bu)立即使用，應(ying)將其(qi)分成小部(bu)分-70 ℃保(bao)存，避(bi)免(mian)反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可能(neng)的不(bu)要使用溶血(xue)或高血(xue)脂(zhi)血(xue)。如(ru)果(guo)血清(qing)中大量顆(ke)粒(li)，檢測前(qian)先離心或過濾(lv)。不(bu)要在37℃或(huo)更(geng)高的(de)溫(wen)度加(jia)熱(re)解(jie)凍。應(ying)在室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻地充(chong)分解(jie)凍。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)
使用前(qian)，將所(suo)有(you)試劑(ji)充分混(hun)勻。不(bu)要使液(ye)體產生(sheng)大量的(de)泡(pao)沫(mo)，以免(mian)加樣(yang)時加入大量的(de)氣(qi)泡(pao)，產(chan)生(sheng)加(jia)樣上(shang)的誤差。
根(gen)據(ju)待測樣(yang)品(pin)數(shu)量加上(shang)標準品(pin)的(de)數量決定(ding)所需(xu)的板(ban)條數(shu)。每個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空白(bai)孔(kong)建(jian)議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自己的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能(neng)使用復(fu)孔(kong)的(de)盡量做(zuo)復(fu)孔(kong)。標(biao)本(ben)用標(biao)本(ben)稀(xi)釋(shi)液(ye)：稀(xi)釋(shi)後(hou)加入50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)內。
加(jia)入稀(xi)釋(shi)好後的(de)標準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)、加(jia)入待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)內。立即加(jia)入50ul的標記的(de)抗(kang)體(ti)。蓋上(shang)膜板(ban)，輕輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育小時。
甩(shuai)去(qu)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此操作3次。如(ru)果(guo)用洗板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
每孔(kong)加(jia)入80ul的親(qin)和(he)鏈酶(mei)素-HRP，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
甩(shuai)去(qu)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此操作3次。如(ru)果(guo)用洗板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。
取出酶標(biao)板(ban)，迅速加入50ul終止(zhi)液，加入終止(zhi)液後應(ying)立即測定(ding)結(jie)果(guo)。
在450nm波(bo)長(chang)處測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

試(shi)劑(ji)盒(he)性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏度(du)：人(ren)Biopyrrinzui小的(de)檢(jian)測濃(nong)度(du)小於(yu)號(hao)標準品(pin)。稀(xi)釋(shi)度(du)的線(xian)性(xing)。樣品(pin)線(xian)性(xing)回歸與預(yu)期(qi)濃度相關系(xi)數R值為0.990。
2. 特異性(xing)：不(bu)與其(qi)它細(xi)胞(bao)因子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異系數均小於(yu)0%。

結(jie) 果(guo) 判(pan) 斷(duan) 與(yu) 分 析(xi)
、儀器(qi)值：於(yu)波(bo)長(chang)450nm的(de)酶標儀上(shang)讀取(qu)各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)

2、以吸(xi)光度OD值為縱坐標（Y），相應(ying)的Biopyrrin標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度為橫坐標（X），做(zuo)得(de)相應(ying)的曲(qu)線(xian)，樣(yang)品(pin)的(de)Biopyrrin含量可根(gen)據(ju)其OD值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線(xian)換算出相應(ying)的濃(nong)度(du)。

3、檢(jian)測值(zhi)範(fan)圍：0-4.0umol/L

4、敏感(gan)度： 0.0 umol/L