人(ren)載(zai)脂(zhi)蛋白(bai)E（ApoE）試劑盒實(shi)驗(yan)檢測

人(ren)載(zai)脂(zhi)蛋白(bai)E（ApoE）試劑盒實(shi)驗(yan)檢測

本(ben)試劑僅(jin)供研(yan)究(jiu)使用  標本：血清(qing)或(huo)血(xue)漿(jiang)

試驗(yan)原理：
人(ren)載(zai)脂(zhi)蛋白(bai)ApoE試劑盒是(shi)固(gu)相(xiang)夾(jia)心法酶(mei)聯免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已知(zhi)ApoE濃(nong)度(du)的標準品、未(wei)知濃度(du)的樣品加(jia)入微(wei)孔(kong)酶(mei)標板(ban)內進行(xing)檢測。先(xian)將ApoE和(he)標記的抗(kang)體(ti)同時(shi)溫育。洗滌(di)後(hou)，加入親(qin)和(he)素標記過的HRP。再(zai)經(jing)過溫(wen)育(yu)和(he)洗滌(di)，去(qu)除未(wei)結合(he)的酶(mei)結合(he)物(wu)，然(ran)後(hou)加入底物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結合(he)物(wu)同時(shi)作(zuo)用。產生(sheng)顏(yan)色。顏(yan)色的深淺和(he)樣品中(zhong)ApoE的濃(nong)度(du)呈比例關(guan)系(xi)。

操作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項

試劑應按標簽說明(ming)書儲存(cun)，使(shi)用前恢(hui)復到(dao)室(shi)溫。稀稀過後(hou)的標準品應丟棄，不可(ke)保(bao)存(cun)。
實(shi)驗(yan)中(zhong)不用的板(ban)條(tiao)應立即放(fang)回包裝袋(dai)中(zhong)，密(mi)封(feng)保(bao)存(cun)，以(yi)免(mian)變(bian)質。
不用的其它(ta)試劑應包裝好(hao)或蓋(gai)好(hao)。不同批(pi)號的試劑不要混(hun)用。保質(zhi)前使(shi)用。
使用壹次(ci)性的吸頭(tou)以免(mian)交叉汙染(ran)，吸取(qu)終(zhong)止液(ye)和(he)底物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避免(mian)使用帶金屬部分(fen)的加(jia)樣器。
使(shi)用幹(gan)凈的塑(su)料容(rong)器配(pei)置(zhi)洗滌(di)液(ye)。使(shi)用前充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)試劑盒裏的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
洗(xi)滌(di)酶(mei)標板(ban)時(shi)應充分(fen)拍幹(gan)，不要將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直接(jie)放入(ru)酶(mei)標反(fan)應孔中(zhong)吸水(shui)。
底(di)物(wu)A應揮發，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間打開(kai)蓋(gai)子(zi)。底物(wu)B對光敏(min)感，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)光下。避免(mian)用手接(jie)觸(chu)，有毒。實(shi)驗(yan)完成(cheng)後(hou)應立即讀(du)取(qu)OD值。
加入試劑的順序(xu)應壹致，以(yi)保證所有反(fan)應板(ban)孔溫(wen)育的時(shi)間壹樣。
按照說明(ming)書中(zhong)標明(ming)的時(shi)間、加液(ye)的量(liang)及順序(xu)進行(xing)溫育(yu)操作(zuo)

樣品收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法

血清(qing)-----操作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任何(he)細(xi)胞刺激。使(shi)用不含熱原和(he)內毒素的試管。收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離(li)心0分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅細(xi)胞迅速小(xiao)心地(di)分(fen)離(li)。
人(ren)載(zai)脂(zhi)蛋白(bai)ApoE血(xue)漿-----EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)、肝(gan)素血(xue)漿可(ke)用於檢(jian)測。000×g離(li)心30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)。
細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離(li)心0分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
保(bao)存(cun)------如(ru)果(guo)樣品不立(li)即(ji)使用，應將其分(fen)成小(xiao)部分(fen)-70 ℃保存(cun)，避(bi)免(mian)反(fan)復冷(leng)凍。盡可(ke)能(neng)的不要使(shi)用溶血(xue)或高(gao)血脂(zhi)血。如(ru)果(guo)血(xue)清(qing)中(zhong)大量(liang)顆粒(li)，檢(jian)測前(qian)先離(li)心或(huo)過濾。不要在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫(wen)度(du)加熱解凍。應在室(shi)溫下(xia)解凍並確(que)保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解凍。

試劑的準(zhun)備

標準品：標準品的系(xi)列稀釋應在實(shi)驗(yan)時(shi)準備，不能(neng)儲(chu)存(cun)。稀釋前(qian)將(jiang)標準品振蕩混(hun)勻(yun)。稀釋比例按(an)下表中(zhong)進行(xing)：

400 mg/L（6號標準品）原倍(bei)濃(nong)度(du)不用稀釋直(zhi)接(jie)加入50ul。

200 mg/L（5號標準品）00ul的原(yuan)倍(bei)標準品加入00ul的標準品稀釋液(ye)

00 mg/L（4號標準品）00ul的5號標準品加入00ul的標準品稀釋液(ye)

50 mg/L（3號標準品）00ul的4號標準品加入00ul的標準品稀釋液(ye)

25 mg/L（2號標準品）00ul的3號標準品加入00ul的標準品稀釋液(ye)

2.5 mg/L（號標準品）00ul的2號標準品加入00ul的標準品稀釋液(ye)

0 mg/L（空白對照）原始濃(nong)度(du)不用稀釋直(zhi)接(jie)加入50ul。

洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)（50×）的稀釋：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)50倍(bei)稀釋。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

使(shi)用前，將(jiang)所有試劑充分(fen)混(hun)勻(yun)。不要使(shi)液(ye)體(ti)產生(sheng)大(da)量(liang)的泡(pao)沫，以(yi)免(mian)加樣時(shi)加入大量的氣(qi)泡(pao)，產生(sheng)加(jia)樣上(shang)的誤(wu)差。
根(gen)據(ju)待(dai)測樣品數量加(jia)上(shang)標準品的數量決定所需(xu)的板(ban)條(tiao)數。每個(ge)標準品和(he)空白孔(kong)建(jian)議做復孔(kong)。每個(ge)樣品根(gen)據(ju)自(zi)己的數量來(lai)定，能(neng)使用復孔(kong)的盡(jin)量做復孔(kong)。
加入(ru)稀釋好(hao)後(hou)的標準品50ul於反(fan)應孔、加入(ru)待測樣品50ul於(yu)反(fan)應孔內。立即(ji)加(jia)入50ul的標記的抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育小時(shi)。
甩去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果(guo)用洗板(ban)機洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加(jia)壹次(ci)。
每(mei)孔(kong)加(jia)入80ul的親(qin)和(he)鏈(lian)酶(mei)素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。
甩去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，用吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果(guo)用洗板(ban)機洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加(jia)壹次(ci)。
每(mei)孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘(zhong)。避免(mian)光照。
取(qu)出(chu)酶(mei)標板(ban)，迅速加(jia)入50ul終(zhong)止液(ye)，加(jia)入(ru)終(zhong)止液(ye)後(hou)應立即測定(ding)結果(guo)。
在450nm波長(chang)處(chu)測定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。

試劑盒性能

. 靈(ling)敏(min)度(du)：人(ren)載(zai)脂(zhi)蛋白(bai)ApoEzui小(xiao)的檢(jian)測濃(nong)度(du)小於(yu)號標準品。稀釋度(du)的線(xian)性。樣品線(xian)性回歸與預期濃度(du)相(xiang)關(guan)系(xi)數R值為(wei)0.990。

2. 特異(yi)性：不與(yu)其它(ta)細(xi)胞因子反(fan)應。

3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異(yi)系(xi)數均小(xiao)於0%。

結果(guo)判(pan)斷與(yu)分(fen)析

、儀(yi)器值：於波長(chang)450nm的酶(mei)標儀(yi)上(shang)讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的OD值

2、以吸光度(du)OD值為(wei)縱坐標（Y），相(xiang)應的ApoE標準品濃度(du)為(wei)橫(heng)坐標（X），做得(de)相(xiang)應的曲(qu)線(xian)，樣品的ApoE含量可(ke)根(gen)據(ju)其OD值由(you)標準曲(qu)線(xian)換(huan)算出(chu)相(xiang)應的濃(nong)度(du)。

3、檢測值範(fan)圍(wei)：0-400mg/L

4、敏(min)感度(du)： .0 mg/L