人β澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋(dan)白(bai)40（Aβ40）試(shi)劑(ji)盒實(shi)驗(yan)檢(jian)測

人β澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋(dan)白(bai)40(Aβ40)試(shi)劑(ji)盒實(shi)驗(yan)檢(jian)測

本試(shi)劑(ji)僅(jin)供(gong)研究使用(yong)  標本：血(xue)清(qing)或(huo)血漿(jiang)

試(shi)驗(yan)原(yuan)理：
人(ren)β澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋(dan)白(bai)Aβ40試(shi)劑(ji)盒是(shi)固(gu)相夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知Aβ40濃(nong)度的(de)標(biao)準品、未(wei)知濃(nong)度的(de)樣(yang)品(pin)加入(ru)微孔酶(mei)標板(ban)內進(jin)行(xing)檢(jian)測。先將Aβ40和標(biao)記(ji)的(de)抗體同時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌後，加入(ru)親和(he)素(su)標記(ji)過(guo)的(de)HRP。再(zai)經(jing)過溫(wen)育(yu)和(he)洗(xi)滌，去(qu)除未(wei)結合的(de)酶(mei)結合物，然(ran)後(hou)加入(ru)底物A、B，和酶(mei)結合物同(tong)時(shi)作(zuo)用(yong)。產生(sheng)顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中Aβ40的(de)濃(nong)度呈比(bi)例(li)關系。

操(cao)作註(zhu)意事項
．試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽(qian)說明(ming)書(shu)儲存，使用(yong)前(qian)恢復到室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準品應丟棄，不(bu)可(ke)保(bao)存。
2．實(shi)驗(yan)中不用(yong)的(de)板(ban)條應(ying)立即(ji)放回包(bao)裝袋(dai)中，密封(feng)保(bao)存，以免(mian)變質(zhi)。
3．不用(yong)的(de)其它試劑(ji)應包(bao)裝好或(huo)蓋(gai)好。不同批號的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質前(qian)使用(yong)。
4．使用(yong)壹(yi)次性的(de)吸頭(tou)以(yi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染，吸取(qu)終止液和(he)底物A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)帶金(jin)屬(shu)部分的(de)加樣(yang)器。
5．使用(yong)幹凈的(de)塑料(liao)容器配置(zhi)洗(xi)滌液。使用(yong)前(qian)充分混(hun)勻(yun)試劑(ji)盒裏(li)的(de)各種(zhong)成(cheng)份及樣(yang)品(pin)。
6．洗(xi)滌酶(mei)標板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分拍(pai)幹，不要(yao)將吸水(shui)紙(zhi)直接放入(ru)酶(mei)標反(fan)應(ying)孔中吸水(shui)。
7．底物A應揮發(fa)，避(bi)免(mian)長時(shi)間打(da)開蓋(gai)子(zi)。底物B對光敏(min)感，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴露於(yu)光下(xia)。避(bi)免(mian)用(yong)手(shou)接觸，有(you)毒。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後(hou)應立即(ji)讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
8．加入(ru)試劑(ji)的(de)順(shun)序應壹(yi)致，以(yi)保(bao)證(zheng)所有(you)反(fan)應(ying)板(ban)孔溫(wen)育(yu)的(de)時(shi)間壹(yi)樣(yang)。
9．按(an)照說明(ming)書(shu)中標明(ming)的(de)時(shi)間、加液的(de)量及順(shun)序進行(xing)溫(wen)育(yu)操(cao)作。

樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及(ji)保(bao)存方法(fa)
、血清(qing)-----操(cao)作過(guo)程中避(bi)免(mian)任何細胞刺激(ji)。使用(yong)不含(han)熱原(yuan)和(he)內毒(du)素的(de)試(shi)管(guan)。收(shou)集血(xue)液後(hou)，000×g離(li)心(xin)0分鐘(zhong)將血清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2、人β澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋(dan)白(bai)Aβ40血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸檬酸(suan)鹽、肝素(su)血漿可(ke)用(yong)於檢(jian)測。000×g離(li)心(xin)30分鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)。
3、細(xi)胞上清(qing)液---000×g離(li)心(xin)0分鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚合物。
4、保(bao)存------如果(guo)樣(yang)品(pin)不(bu)立即(ji)使用(yong)，應將其分成(cheng)小(xiao)部分-70 ℃保(bao)存，避(bi)免(mian)反復冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能的(de)不(bu)要(yao)使用(yong)溶(rong)血(xue)或(huo)高(gao)血脂(zhi)血。如果(guo)血清(qing)中大量顆粒(li)，檢(jian)測前(qian)先離(li)心(xin)或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫(wen)度(du)加熱解(jie)凍(dong)。應在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍(dong)。

操(cao)作步(bu)驟
．使用(yong)前(qian)，將所有(you)試劑(ji)充(chong)分混(hun)勻(yun)。不要(yao)使液體(ti)產生(sheng)大量的(de)泡(pao)沫(mo)，以免(mian)加樣(yang)時(shi)加入(ru)大量的(de)氣泡，產生(sheng)加樣(yang)上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
2．根據(ju)待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量加上(shang)標(biao)準品的(de)數(shu)量決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條數(shu)。每個標(biao)準品和空白(bai)孔建議(yi)做復孔。每個樣(yang)品(pin)根據(ju)自(zi)己(ji)的(de)數(shu)量來定(ding)，能(neng)使用(yong)復孔的(de)盡量做復孔。
3．加入(ru)稀釋好後(hou)的(de)標(biao)準品50ul於反應孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應(ying)孔內。立即(ji)加入(ru)50ul的(de)標(biao)記(ji)的(de)抗體。蓋(gai)上膜(mo)板(ban)，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)小(xiao)時(shi)。
4．甩(shuai)去(qu)孔內液體(ti)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復此操(cao)作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次。
5．每孔加入(ru)80ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶(mei)素-HRP，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。
6．甩(shuai)去(qu)孔內液體(ti)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹。重復此操(cao)作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次。
7．每孔加入(ru)底物A、B各50ul，輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光照。
8．取出酶(mei)標板(ban)，迅(xun)速(su)加入(ru)50ul終止液，加入(ru)終止液後(hou)應立即(ji)測定(ding)結(jie)果(guo)。
9．在(zai)450nm波(bo)長處測定(ding)各孔的(de)OD值(zhi)。

試(shi)劑(ji)盒性能(neng)
. 靈敏(min)度：zui小(xiao)的(de)檢(jian)測濃(nong)度小(xiao)於(yu)號標(biao)準品。稀釋度的(de)線(xian)性。樣(yang)品(pin)線(xian)性回歸(gui)與預期(qi)濃(nong)度相關系數(shu)R值(zhi)為0.990。
2. 特異性：不(bu)與人其它細胞(bao)因(yin)子(zi)反應(ying)。
3. 重復性：板(ban)內、板(ban)間變異系數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)0%。

結 果(guo) 判(pan) 斷 與 分 析(xi)
、儀(yi)器值(zhi)：人(ren)β澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋(dan)白(bai)Aβ40於(yu)波(bo)長450nm的(de)酶(mei)標儀(yi)上讀(du)取(qu)各孔的(de)OD值(zhi)

2、以(yi)吸光度OD值(zhi)為縱坐標（Y），相應(ying)的(de)Aβ40標(biao)準品濃(nong)度為橫坐標（X），做得(de)相應(ying)的(de)曲線，樣(yang)品(pin)的(de)Aβ40含(han)量可(ke)根據(ju)其OD值(zhi)由(you)標(biao)準曲線換(huan)算(suan)出相應(ying)的(de)濃(nong)度。

3、檢測值(zhi)範(fan)圍(wei)：0-80ng/ml

4、敏(min)感度： 0. ng/ml