兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）試劑盒(he)免(mian)疫分析(xi)

兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）試劑盒(he)免(mian)疫分析(xi)

實驗原(yuan)理(li)：
本試(shi)劑盒(he)應(ying)用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心法測定標本中兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)IL-8水(shui)平。用(yong)純化(hua)的(de)兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）抗體(ti)包被(bei)微孔(kong)板，制(zhi)成固(gu)相抗體(ti)，往(wang)包被(bei)單抗的(de)微孔(kong)中依次(ci)加(jia)入白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8），再與(yu)HRP標記(ji)的(de)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）抗體(ti)結合(he)，形成(cheng)抗體(ti)-抗原(yuan)-酶標抗體(ti)復合(he)物(wu)，經過(guo)*洗滌後(hou)加底(di)物(wu)TMB顯色。TMB在HRP酶的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍(lan)色，並在酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)zui終(zhong)的(de)黃色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）呈(cheng)正相(xiang)關。用(yong)酶標儀在450nm波(bo)長下測(ce)定吸光度（OD值），通(tong)過標準(zhun)曲線計(ji)算樣(yang)品(pin)中兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)8（IL-8）濃(nong)度。

試(shi)劑盒(he)組成(cheng)：

標本要(yao)求(qiu)：

．標本采(cai)集後盡早(zao)進(jin)行提取，提取按(an)相(xiang)關文獻(xian)進(jin)行，提取後應盡快進(jin)行實驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上進(jin)行試驗，可(ke)將標本放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)

2．不(bu)能(neng)檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活性(xing)。

操作步驟(zhou)：

.標準(zhun)品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)IL-8試劑盒(he)提(ti)供(gong)原(yuan)倍標準(zhun)品(pin)壹支，用(yong)戶(hu)可(ke)按(an)照下列(lie)圖表(biao)在小試(shi)管(guan)中進(jin)行稀(xi)釋(shi)。

2.加樣(yang)：分別(bie)設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標試劑，其(qi)余(yu)各步操作相(xiang)同(tong)）、標準(zhun)孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標包被(bei)板上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確(que)加樣(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍）。加樣(yang)將樣(yang)品(pin)加於酶(mei)標板孔(kong)底部(bu)，盡量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁，輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻。

3.溫(wen)育(yu)：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。  

4.配液(ye)：將(jiang)20倍濃(nong)縮洗滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)20倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)

5.洗滌：小(xiao)心揭掉(diao)封板膜(mo)，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置30秒後棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

6.加酶(mei)：每孔(kong)加入酶標試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

7.溫(wen)育(yu)：操作同(tong)3。

8.洗滌：操作同(tong)5。

9.顯色：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯色劑A50μl，再加(jia)入顯色劑B50μl，輕輕(qing)震蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色5分鐘(zhong).

0.終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍(lan)色立轉(zhuan)黃色）。

.測定：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測量各(ge)孔(kong)的(de)吸光度（OD值）。 測定應在加終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)5分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行。

計算(suan)：
以標準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐(zuo)標，OD值為(wei)縱坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上繪(hui)出(chu)標準(zhun)曲線，根據(ju)樣(yang)品(pin)的(de)OD值由(you)標準(zhun)曲線查出相(xiang)應(ying)的(de)濃(nong)度；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數；或(huo)用標準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度與(yu)OD值計(ji)算出(chu)標準(zhun)曲線的(de)直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式，將樣(yang)品(pin)的(de)OD值代入方程(cheng)式，計算(suan)出樣(yang)品(pin)濃(nong)度，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，即(ji)為(wei)樣(yang)品(pin)的(de)實際(ji)濃(nong)度。

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

．試劑盒(he)從(cong)冷(leng)藏環(huan)境(jing)中取出應在室溫(wen)平衡(heng)5-30分鐘(zhong)後(hou)方可(ke)使(shi)用(yong)，酶(mei)標包被(bei)板開(kai)封(feng)後如(ru)未用完，板條(tiao)應(ying)裝入密封(feng)袋(dai)中保存。

2．濃(nong)洗滌液(ye)可(ke)能(neng)會有(you)結(jie)晶析出，稀(xi)釋(shi)時可在水(shui)浴中加溫(wen)助溶，洗滌時不(bu)影(ying)響結果(guo)。

3．各步加樣(yang)均(jun)應(ying)使用加樣(yang)器，並經常(chang)校對(dui)其(qi)準(zhun)確(que)性，以避免(mian)試(shi)驗誤(wu)差。壹次(ci)加(jia)樣(yang)時間(jian)控(kong)制(zhi)在5分鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標本數量多，使(shi)用(yong)排槍(qiang)加樣(yang)。

4．請(qing)每次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時做標準(zhun)曲線，做(zuo)復孔(kong)。如標本中待測(ce)物(wu)質含(han)量過(guo)高（樣(yang)本OD值大於標準(zhun)品(pin)孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值），請(qing)先(xian)用(yong)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數（n倍）後再測(ce)定，計算(suan)時請(qing)zui後乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數（×n×5）。

5．封板膜(mo)只限壹次(ci)性(xing)使(shi)用(yong)，以避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

6．底物(wu)請(qing)避光保(bao)存。

7．嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書的(de)操作進(jin)行，試驗結(jie)果(guo)判(pan)定必須以(yi)酶標儀讀數為準(zhun).

8．兔(tu)白(bai)細(xi)胞介(jie)素(su)IL-8所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗滌液(ye)和(he)各(ge)種廢(fei)棄物(wu)都(dou)應按(an)傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。

9．本試(shi)劑不(bu)同(tong)批號(hao)組分不(bu)得(de)混(hun)用(yong)。

0.如與(yu)英文(wen)說明(ming)書有(you)異(yi)，以英文說(shuo)明(ming)書為(wei)準(zhun)。

保存條件及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)：

．試劑盒(he)保(bao)存：；2-8℃。

2．有(you)效(xiao)期(qi)：6個月(yue)