人(ren)叉頭型(xing)基(ji)因(yin)P3抗(kang)體（Foxp3-Ab）試(shi)劑盒(he)使用(yong)檢測(ce)

人(ren)叉頭型(xing)基(ji)因(yin)P3抗(kang)體（Foxp3-Ab）試(shi)劑盒(he)使用(yong)檢測(ce)

本(ben)試(shi)劑僅供(gong)研(yan)究使(shi)用 標(biao)本(ben)：血(xue)清(qing)或血(xue)漿

試(shi)驗(yan)原(yuan)理：
人(ren)叉頭型(xing)基(ji)因(yin)P3抗(kang)體Foxp3-Ab試(shi)劑盒(he)是固(gu)相夾心法(fa)酶(mei)聯免疫吸附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知Foxp3-Ab濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準品(pin)、未知濃(nong)度(du)的(de)樣(yang)品(pin)加入微孔酶標(biao)板(ban)內進行(xing)檢(jian)測。先(xian)將(jiang)Foxp3-Ab和標(biao)記的(de)抗(kang)體同(tong)時(shi)溫育(yu)。洗(xi)滌(di)後，加入親和素標(biao)記過的(de)HRP。再(zai)經過(guo)溫育(yu)和洗滌(di)，去除(chu)未結(jie)合的(de)酶結(jie)合物(wu)，然(ran)後加入底物(wu)A、B，和酶結(jie)合物(wu)同(tong)時(shi)作(zuo)用(yong)。產生顏色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣(yang)品(pin)中Foxp3-Ab的(de)濃(nong)度(du)呈(cheng)比例關系。

操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)項
試(shi)劑應(ying)按標(biao)簽說(shuo)明書儲(chu)存，使用(yong)前恢復(fu)到(dao)室溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的(de)標(biao)準品(pin)應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可保存。
實(shi)驗中(zhong)不(bu)用(yong)的(de)板條(tiao)應立(li)即放回(hui)包裝(zhuang)袋中(zhong)，密封保(bao)存(cun)，以免變質。
不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它試(shi)劑應(ying)包裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試(shi)劑不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質前使用(yong)。
使(shi)用(yong)壹次(ci)性的(de)吸頭以(yi)免交叉汙(wu)染(ran)，吸取終(zhong)止液(ye)和底物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免使用(yong)帶金屬部(bu)分的(de)加樣(yang)器。
使用幹凈的(de)塑(su)料容(rong)器配置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使用(yong)前充(chong)分混(hun)勻試(shi)劑盒(he)裏的(de)各種成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。
洗滌(di)酶標(biao)板(ban)時應充(chong)分拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將(jiang)吸水紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入酶標(biao)反(fan)應孔中吸水。
底(di)物A應揮(hui)發，避免長時間(jian)打(da)開(kai)蓋(gai)子。底物(wu)B對光(guang)敏(min)感(gan)，避免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於光(guang)下(xia)。避(bi)免用手(shou)接(jie)觸，有毒。實(shi)驗完(wan)成後應立(li)即讀取OD值(zhi)。
加入試(shi)劑的(de)順(shun)序(xu)應(ying)壹(yi)致，以保證所(suo)有(you)反(fan)應(ying)板孔溫育(yu)的(de)時間(jian)壹樣(yang)。
按(an)照(zhao)說(shuo)明書中標(biao)明(ming)的(de)時間(jian)、加液(ye)的(de)量及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行(xing)溫育(yu)操(cao)作(zuo)。

樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方法(fa)
血(xue)清(qing)-----操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免任何(he)細胞刺(ci)激。使用(yong)不(bu)含熱原(yuan)和內毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)。收集血(xue)液(ye)後，000×g離心0分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和紅細胞迅(xun)速小心地(di)分離。
人(ren)叉頭型(xing)基(ji)因(yin)P3抗(kang)體Foxp3-Ab血(xue)漿-----EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽、肝(gan)素血(xue)漿可用於檢(jian)測。000×g離心30分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)。
細胞上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離心0分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和聚合(he)物。
保存(cun)------如果(guo)樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即使(shi)用，應將(jiang)其(qi)分成(cheng)小部分-70 ℃保(bao)存，避免反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可能的(de)不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)溶(rong)血(xue)或高(gao)血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果(guo)血(xue)清(qing)中大(da)量顆(ke)粒(li)，檢測(ce)前先(xian)離心或過濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或更(geng)高(gao)的(de)溫度(du)加(jia)熱解(jie)凍(dong)。應(ying)在室溫下(xia)解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

操(cao)作(zuo)步驟
使用(yong)前，將(jiang)所有試(shi)劑充(chong)分混(hun)勻。不(bu)要(yao)使(shi)液(ye)體產(chan)生大量的(de)泡(pao)沫(mo)，以(yi)免加樣(yang)時(shi)加(jia)入大量的(de)氣泡(pao)，產(chan)生加樣(yang)上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
根據待測(ce)樣(yang)品(pin)數量加(jia)上(shang)標(biao)準品(pin)的(de)數量決(jue)定(ding)所需(xu)的(de)板條(tiao)數。每(mei)個(ge)標(biao)準品(pin)和空白(bai)孔建議做復(fu)孔。每個樣(yang)品(pin)根據自(zi)己的(de)數量來(lai)定(ding)，能使(shi)用復(fu)孔的(de)盡量做(zuo)復(fu)孔。
加入稀釋(shi)好後的(de)標(biao)準品(pin)50ul於反(fan)應孔、加入待測(ce)樣(yang)品(pin)50ul於反(fan)應孔內。立(li)即加(jia)入50ul的(de)標(biao)記的(de)抗(kang)體。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)小(xiao)時(shi)。
甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿(man)洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果(guo)用洗板機洗滌(di)，洗滌(di)次數(shu)增加壹次(ci)。
每(mei)孔加入80ul的(de)親和鏈(lian)酶素(su)-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)30分鐘。
甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿(man)洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)3次(ci)。如果(guo)用洗板機洗滌(di)，洗滌(di)次數(shu)增加壹次(ci)。
每(mei)孔加入底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫育(yu)0分鐘。避(bi)免光(guang)照(zhao)。
取(qu)出酶標(biao)板(ban)，迅速加入50ul終(zhong)止液(ye)，加入終(zhong)止液(ye)後應立(li)即測(ce)定(ding)結果(guo)。
在450nm波長處測(ce)定(ding)各孔的(de)OD值(zhi)。

試(shi)劑盒(he)性能(neng)
. 靈敏(min)度(du)：zui小(xiao)的(de)檢測(ce)濃(nong)度(du)小於號(hao)標(biao)準品(pin)。稀釋(shi)度的(de)線性(xing)。樣(yang)品(pin)線性(xing)回(hui)歸與(yu)預期(qi)濃(nong)度(du)相關系(xi)數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特異(yi)性(xing)：不(bu)與(yu)其(qi)它細胞因(yin)子反應(ying)。
3. 重復(fu)性(xing)：板內、板間(jian)變(bian)異系(xi)數均小於0%。

結(jie) 果 判 斷 與 分 析(xi)
、儀器值(zhi)：於波(bo)長450nm的(de)酶標(biao)儀(yi)上讀取各孔的(de)OD值(zhi)

2、人(ren)叉頭型(xing)基(ji)因(yin)P3抗(kang)體Foxp3-Ab以(yi)吸光(guang)度(du)OD值(zhi)為(wei)縱坐標(biao)（Y），相應的(de)Foxp3-Ab標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)為(wei)橫坐標(biao)（X），做(zuo)得(de)相應的(de)曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的(de)Foxp3-Ab含量可根據其(qi)OD值(zhi)由(you)標(biao)準曲線(xian)換算出相應的(de)濃(nong)度(du)。

3、檢測(ce)值(zhi)範圍(wei)：0-40U/L

4、敏感(gan)度： 0. U/L