人血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB）試(shi)劑(ji)盒檢(jian)測說明(ming)

人血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB）試(shi)劑(ji)盒檢(jian)測說明(ming)

目的(de)：本(ben)試(shi)劑(ji)盒用(yong)於測定人(ren)血(xue)清(qing)，血(xue)漿及(ji)相關液(ye)體樣(yang)本(ben)中血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） 的含(han)量(liang)。

實驗(yan)原理(li)：
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗體夾心(xin)法測定標本(ben)中人血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽FPB水平(ping)。用純化(hua)的(de)人(ren)血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） 抗體包(bao)被微(wei)孔板(ban)，制成固相(xiang)抗體，往(wang)包(bao)被單(dan)抗的微(wei)孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） ，再與HRP標記(ji)的血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） 抗體結合，形(xing)成抗體-抗原-酶(mei)標抗體復合(he)物(wu)，經過*洗(xi)滌(di)後加(jia)底物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化成藍色(se)，並在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化成zui終的黃色(se)。顏色(se)的深(shen)淺和樣(yang)品中的血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） 呈正(zheng)相關(guan)。用(yong)酶(mei)標儀在450nm波長下測(ce)定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值），通(tong)過標準(zhun)曲(qu)線(xian)計算樣品中人血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽B（FPB） 濃(nong)度(du)。

樣本(ben)處理(li)及(ji)要(yao)求(qiu)：

. 血(xue)清(qing)：室(shi)溫血(xue)液(ye)自(zi)然(ran)凝固0-20分(fen)鐘(zhong)，離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)，保存過程(cheng)中(zhong)如出現(xian)沈澱(dian)，應再次(ci)離心。

2. 血(xue)漿：應根(gen)據標本(ben)的要(yao)求(qiu)選(xuan)擇(ze)EDTA或(huo)檸(ning)檬酸(suan)鈉(na)作(zuo)為抗凝劑(ji)，混合(he)0-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)，保存過程(cheng)中(zhong)如有沈澱(dian)形(xing)成，應該再次(ci)離心。

3. 尿液(ye)：用無(wu)菌(jun)管收(shou)集(ji)，離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)，保存過程(cheng)中(zhong)如有沈澱(dian)形(xing)成，應再次(ci)離心。胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦脊液(ye)參(can)照實(shi)行。

4. 細胞(bao)培養(yang)上清(qing)：檢(jian)測分(fen)泌(mi)性(xing)的成份時(shi)，用無菌(jun)管收(shou)集(ji)。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)。檢(jian)測細胞(bao)內的(de)成份時(shi)，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋細胞(bao)懸液(ye)，細胞(bao)濃(nong)度(du)達到(dao)00萬(wan)/ml左右(you)。通(tong)過反(fan)復凍(dong)融，以(yi)使細胞(bao)破壞並放出細胞(bao)內成份。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)。保存過程(cheng)中(zhong)如有沈澱(dian)形(xing)成，應再次(ci)離心。

5. 組織標本(ben)：切割標本(ben)後，稱取(qu)重量(liang)。加(jia)入(ru)壹定量(liang)的PBS，PH7.4。用(yong)液(ye)氮迅(xun)速冷(leng)凍(dong)保存備(bei)用。標本(ben)融化後仍然(ran)保持2-8℃的(de)溫度(du)。加(jia)入(ru)壹定量(liang)的PBS（PH7.4），用(yong)手工(gong)或(huo)勻漿器(qi)將標本(ben)勻漿充(chong)分(fen)。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔細收集(ji)上清(qing)。分(fen)裝後(hou)壹份(fen)待(dai)檢(jian)測，其(qi)余冷(leng)凍(dong)備用(yong)。

6. 人血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽FPB標本(ben)采集後盡(jin)早(zao)進(jin)行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相(xiang)關文獻(xian)進行，提(ti)取(qu)後應盡(jin)快(kuai)進行實驗(yan)。若(ruo)不能(neng)馬(ma)上進行試(shi)驗(yan)，可將(jiang)標本(ben)放於-20℃保存，但應避免(mian)反(fan)復凍(dong)融.

7. 不能(neng)檢(jian)測含(han)NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧化物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟

. 標準(zhun)品的稀(xi)釋與加(jia)樣(yang)：在酶(mei)標包(bao)被板(ban)上設標準(zhun)品孔0孔，在*、第二(er)孔中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品00μl，然(ran)後(hou)在*、第二(er)孔中(zhong)加(jia)標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)從*孔(kong)、第(di)二(er)孔中(zhong)各(ge)取(qu)00μl分(fen)別加(jia)到(dao)第三(san)孔和第(di)四(si)孔(kong)，再在第三(san)、第四(si)孔(kong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)；然(ran)後(hou)在第三(san)孔和第(di)四(si)孔(kong)中先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄掉，再各(ge)取(qu)50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第五(wu)、第六(liu)孔中(zhong)，再在第五(wu)、第六(liu)孔中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)50ul，混勻(yun)；混(hun)勻(yun)後從第(di)五(wu)、第六(liu)孔中(zhong)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別加(jia)到(dao)第七、第八(ba)孔(kong)中(zhong)，再在第七、第八(ba)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)七(qi)、第八(ba)孔(kong)中(zhong)分(fen)別取(qu)50μl加(jia)到(dao)第九、第十孔中，再在第九第十(shi)孔(kong)分(fen)別加(jia)標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻(yun)後(hou)從第(di)九(jiu)第十孔中各(ge)取(qu)50μl棄掉。（稀(xi)釋後(hou)各(ge)孔加(jia)樣(yang)量(liang)都為50μl，濃(nong)度(du)分(fen)別為800ng/L，200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 50ng/L）。

2. 加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空(kong)白孔(kong)（空白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操(cao)作(zuo)相(xiang)同(tong)）、待(dai)測樣品孔。在酶(mei)標包(bao)被板(ban)上待測樣品孔中先(xian)加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品0μl（樣品zui終稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻。

3. 溫育(yu)：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

4. 配(pei)液(ye)：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾水(shui)30（48T的20倍(bei)）倍稀(xi)釋後(hou)備用(yong)。

5. 洗(xi)滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去，如此重復5次(ci)，拍(pai)幹。

6. 加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外。

7. 溫育(yu)：操(cao)作(zuo)同(tong)3。

8. 洗(xi)滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong)5。

9. 顯(xian)色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)5分(fen)鐘(zhong).

0. 終止：每孔(kong)加(jia)終止液(ye)50μl，終止反(fan)應（此時藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。

. 測定：以(yi)空(kong)白(bai)空調(tiao)零，450nm波長(chang)依序(xu)測量(liang)各(ge)孔的(de)吸光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定應在加(jia)終止液(ye)後5分(fen)鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行。

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

． 試(shi)劑(ji)盒從冷(leng)藏(zang)環境(jing)中(zhong)取(qu)出應在室(shi)溫平(ping)衡5-30分(fen)鐘(zhong)後(hou)方(fang)可(ke)使用，酶(mei)標包(bao)被板(ban)開封(feng)後(hou)如未用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋中保存。

2． 濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)可能(neng)會(hui)有(you)結晶析出(chu)，稀(xi)釋時(shi)可在水浴(yu)中加(jia)溫助(zhu)溶(rong)，洗(xi)滌(di)時不影響(xiang)結果。

3． 各(ge)步加(jia)樣(yang)均應使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並經常(chang)校對(dui)其(qi)準確性，以(yi)避免(mian)試(shi)驗(yan)誤差。壹次(ci)加(jia)樣(yang)時(shi)間控(kong)制在5分(fen)鐘(zhong)內，如標本(ben)數量(liang)多，使用排槍(qiang)加(jia)樣(yang)。

4． 請(qing)每次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時(shi)做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，做(zuo)復孔(kong)。如標本(ben)中待測物(wu)質含量(liang)過高（樣本(ben)OD值大於標準(zhun)品孔*孔的OD值(zhi)），請(qing)先(xian)用(yong)樣(yang)品稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹定倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後再測(ce)定，計算時請(qing)zui後乘以總(zong)稀(xi)釋倍(bei)數（×n×5）。

5． 封(feng)板(ban)膜只限壹次(ci)性(xing)使用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

6． 底物(wu)請避光(guang)保存。

7． 嚴(yan)格(ge)按(an)照說明(ming)書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗(yan)結果判定必(bi)須(xu)以(yi)酶(mei)標儀讀(du)數(shu)為準(zhun).

8． 人(ren)血(xue)纖(xian)肽(tai)/纖(xian)維(wei)蛋白肽FPB所有(you)樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各(ge)種廢(fei)棄(qi)物(wu)都應按(an)傳(chuan)染(ran)物(wu)處理(li)。

9． 本(ben)試(shi)劑(ji)不同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不得混(hun)用(yong)。

0. 如與英文說明(ming)書(shu)有(you)異(yi)，以英(ying)文說明(ming)書(shu)為準(zhun)。