人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）試(shi)劑盒使(shi)用說(shuo)明(ming)

人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）試(shi)劑盒使(shi)用說(shuo)明(ming)

本(ben)試(shi)劑盒僅(jin)供(gong)研究使(shi)用。

檢(jian)測範(fan)圍(wei)：96T
2.5 ng/mL -80 ng/mL                 

使(shi)用目(mu)的(de)：本(ben)試(shi)劑盒用於測(ce)定(ding)人血清、血漿(jiang)及(ji)相關(guan)液(ye)體樣(yang)本(ben)中高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）含量(liang)。

實驗原(yuan)理
本(ben)試(shi)劑盒應(ying)用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)法測定(ding)標(biao)本(ben)中人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)GP73水平(ping)。用(yong)純(chun)化的(de)人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）抗體包被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固(gu)相抗(kang)體，往包(bao)被(bei)單(dan)抗的(de)微孔(kong)中依次加(jia)入高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73），再與(yu)HRP標記(ji)的(de)高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）抗體結(jie)合(he)，形(xing)成抗體-抗原(yuan)-酶標(biao)抗體復合(he)物，經過*洗滌(di)後加底物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在酸的(de)作(zuo)用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)zui終(zhong)的(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）呈(cheng)正相關(guan)。用酶(mei)標儀(yi)在450nm波長(chang)下(xia)測定(ding)吸(xi)光度(du)（OD值），通過標準(zhun)曲(qu)線計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)-73（GP73）濃度(du)。

標本(ben)要(yao)求

．標(biao)本(ben)采集(ji)後盡早(zao)進行(xing)提取(qu)，提取(qu)按(an)相關(guan)文獻(xian)進行(xing)，提取(qu)後應(ying)盡快(kuai)進行(xing)實驗。若不(bu)能馬(ma)上(shang)進行試(shi)驗(yan)，可將標(biao)本(ben)放(fang)於-20℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍(dong)融(rong)

2．不能檢測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因NaN3抑(yi)制(zhi)辣根(gen)過氧化物酶的(de)（HRP）活性(xing)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

標(biao)準(zhun)品的(de)稀釋(shi)：本(ben)試(shi)劑盒提供(gong)原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可按(an)照下(xia)列圖(tu)表(biao)在小試(shi)管(guan)中進(jin)行稀釋(shi)。

80 ng/mL5號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的(de)原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)

40 ng/mL4號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的(de)5號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)

20 ng/mL3號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的(de)4號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)

0 ng/mL2號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的(de)3號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)

5 ng/mL號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的(de)2號(hao)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)50μl標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)

加(jia)樣(yang)：人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)GP73分別(bie)設(she)空白(bai)孔（空白(bai)對(dui)照孔不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標試(shi)劑，其余各步操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標準(zhun)孔、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡量(liang)不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻(yun)。
溫(wen)育：用(yong)封(feng)板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。  
配(pei)液(ye)：將(jiang)20倍濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)20倍稀(xi)釋(shi)後備用(yong)
洗滌(di)：小(xiao)心(xin)揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體，甩幹(gan)，每孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒後棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復5次，拍(pai)幹。
加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入酶標試(shi)劑50μl，空白孔除(chu)外。
溫(wen)育：操(cao)作(zuo)同(tong)3。
洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong)5。
顯色(se)：每(mei)孔先加(jia)入顯色(se)劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光顯色(se)5分鐘(zhong).
終(zhong)止(zhi)：每孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此(ci)時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。
測(ce)定：以空(kong)白空(kong)調零(ling)，450nm波長(chang)依序測量各孔的(de)吸光度(du)（OD值）。 測定(ding)應(ying)在加終(zhong)止(zhi)液(ye)後5分鐘(zhong)以內(nei)進行(xing)。

註意事(shi)項(xiang)

．試(shi)劑盒從冷(leng)藏(zang)環境(jing)中取(qu)出應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡(heng)5-30分鐘(zhong)後方可(ke)使(shi)用，酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)開(kai)封後如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密封袋(dai)中保(bao)存。

2．濃洗滌液(ye)可(ke)能會有結(jie)晶(jing)析(xi)出，稀釋(shi)時(shi)可在水浴中加(jia)溫(wen)助溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不影響結(jie)果。

3．各(ge)步(bu)加樣(yang)均應(ying)使(shi)用加(jia)樣(yang)器(qi)，並經(jing)常校對(dui)其準(zhun)確(que)性(xing)，以避(bi)免試(shi)驗(yan)誤差。壹(yi)次加(jia)樣(yang)時(shi)間控制在5分鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標(biao)本(ben)數(shu)量多，使(shi)用排(pai)槍加(jia)樣(yang)。

請(qing)每(mei)次測(ce)定的(de)同(tong)時(shi)做標準(zhun)曲(qu)線，做(zuo)復孔。如(ru)標(biao)本(ben)中待(dai)測物質含(han)量(liang)過高（樣(yang)本(ben)OD值大於標準(zhun)品孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值），請先用(yong)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋壹(yi)定(ding)倍數（n倍）後再測(ce)定，計(ji)算(suan)時(shi)請zui後乘以總(zong)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。
封板(ban)膜只限(xian)壹(yi)次性(xing)使(shi)用，以避(bi)免交叉汙染。

6．底物請避(bi)光保(bao)存。

7．嚴格按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進行，試(shi)驗(yan)結(jie)果判定(ding)必(bi)須(xu)以酶(mei)標儀(yi)讀數為(wei)準(zhun).

8．所有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液(ye)和(he)各種廢(fei)棄物都應(ying)按(an)傳(chuan)染物處理。

9．本(ben)試(shi)劑不同(tong)批號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混用。

0.人高爾基(ji)蛋(dan)白(bai)GP73如(ru)與(yu)英文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)有異，以英文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)準(zhun)。

保(bao)存條件及有(you)效(xiao)期(qi)

．試(shi)劑盒保(bao)存：；2-8℃。

2．有效(xiao)期(qi)：6個月