大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶MB（CK-MB）試(shi)劑(ji)盒產品直(zhi)銷(xiao)

大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶MB（CK-MB）試(shi)劑(ji)盒產品直(zhi)銷(xiao)

實驗(yan)原理
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心法(fa)測定(ding)標(biao)本中(zhong)大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶CK-MB水(shui)平(ping)。用純化(hua)的(de)大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶MB(CK-MB)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微孔(kong)板，制(zhi)成固(gu)相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包(bao)被(bei)單抗(kang)的(de)微孔(kong)中(zhong)依(yi)次(ci)加入肌酸(suan)激(ji)酶同工(gong)酶MB(CK-MB)，再(zai)與(yu)HRP標記(ji)的肌酸激(ji)酶同工(gong)酶MB(CK-MB)抗(kang)體(ti)結(jie)合，形(xing)成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶標(biao)抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌(di)後(hou)加底(di)物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的作(zuo)用下(xia)轉化(hua)成(cheng)zui終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深(shen)淺和樣(yang)品中的(de)肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶MB(CK-MB)呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通(tong)過標(biao)準(zhun)曲線(xian)計算樣(yang)品中大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶MB(CK-MB)濃度(du)。

標(biao)本(ben)要(yao)求

．標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關(guan)文(wen)獻進行，提(ti)取(qu)後(hou)應(ying)盡(jin)快(kuai)進行實驗(yan)。若不(bu)能馬(ma)上(shang)進行試(shi)驗(yan)，可將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免反復凍融(rong)

2．不(bu)能檢測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制(zhi)辣(la)根過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)（HRP）活(huo)性。

操(cao)作(zuo)步驟

標(biao)準(zhun)品的稀(xi)釋(shi)：本(ben)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)原倍標(biao)準(zhun)品壹(yi)支，用(yong)戶可按(an)照下(xia)列圖表(biao)在小試(shi)管(guan)中(zhong)進行稀釋(shi)。

20U/L5號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品加入50μl標準(zhun)品稀釋(shi)液

60U/L4號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的5號(hao)標(biao)準(zhun)品加入50μl標準(zhun)品稀釋(shi)液

30U/L3號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的4號(hao)標(biao)準(zhun)品加入50μl標準(zhun)品稀釋(shi)液

5U/L2號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的3號(hao)標(biao)準(zhun)品加入50μl標準(zhun)品稀釋(shi)液

7.5U/L號(hao)標(biao)準(zhun)品50μl的2號(hao)標(biao)準(zhun)品加入50μl標準(zhun)品稀釋(shi)液

加樣(yang)：大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶CK-MB分別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加樣(yang)品及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步操作(zuo)相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確加樣(yang)50μl，待測樣(yang)品孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣(yang)品稀釋(shi)液40μl，然後(hou)再(zai)加待(dai)測樣(yang)品0μl（樣(yang)品zui終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加於(yu)酶(mei)標板孔(kong)底(di)部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。
溫(wen)育(yu)：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。  
配液：將(jiang)30倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備用
洗(xi)滌(di)：小心揭掉封板膜(mo)，棄去液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)30秒後(hou)棄去(qu)，如(ru)此重復5次，拍(pai)幹(gan)。
加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。
溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。
洗(xi)滌(di)：操(cao)作(zuo)同5。
顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加入顯色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色5分(fen)鐘(zhong).
終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃(huang)色）。
測定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在加終止(zhi)液後(hou)5分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行。

註意事(shi)項(xiang)

．試(shi)劑(ji)盒從冷藏(zang)環境(jing)中取(qu)出應(ying)在室(shi)溫(wen)平衡(heng)5-30分鐘(zhong)後(hou)方可使(shi)用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板開(kai)封後(hou)如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝入密封袋(dai)中(zhong)保存(cun)。

2．濃洗(xi)滌(di)液可能會(hui)有結(jie)晶析出，稀釋(shi)時可(ke)在水(shui)浴(yu)中加溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影響結(jie)果。

3．各(ge)步加樣(yang)均應(ying)使(shi)用(yong)加樣(yang)器，並(bing)經(jing)常校對(dui)其(qi)準(zhun)確性，以避免(mian)試(shi)驗(yan)誤差(cha)。壹(yi)次(ci)加樣(yang)時間(jian)控(kong)制在5分(fen)鐘內(nei)，如(ru)標(biao)本(ben)數(shu)量多(duo)，使(shi)用(yong)排(pai)槍(qiang)加樣(yang)。

請(qing)每次測定(ding)的(de)同時做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待測物(wu)質含(han)量(liang)過(guo)高(gao)（樣(yang)本OD值(zhi)大於標(biao)準(zhun)品孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值(zhi)），請(qing)先用樣(yang)品稀釋(shi)液稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍數(shu)（n倍）後(hou)再(zai)測定(ding)，計算時請(qing)zui後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀釋(shi)倍數(shu)（×n×5）。
封板膜(mo)只限壹(yi)次(ci)性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免交叉汙(wu)染。

6．底物請(qing)避光(guang)保存(cun)。

7．嚴(yan)格(ge)按(an)照說明書的(de)操(cao)作(zuo)進行，試(shi)驗(yan)結(jie)果判定(ding)必(bi)須(xu)以(yi)酶(mei)標(biao)儀讀數(shu)為(wei)準(zhun).

8．所(suo)有(you)樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液和各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都應(ying)按(an)傳染物處理。

9．本(ben)試(shi)劑(ji)不(bu)同批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不(bu)得混(hun)用。

0.如(ru)與(yu)英文(wen)說明書有(you)異(yi)，以英(ying)文說明書為(wei)準(zhun)。

保存(cun)條件(jian)及(ji)有效期(qi)

．大鼠肌(ji)酸激(ji)酶同工(gong)酶CK-MB試(shi)劑(ji)盒保存(cun)：；2-8℃。

2．有效期(qi)：6個月