雞(ji)粘桿菌(jun)素（Colistin）試(shi)劑(ji)盒實驗(yan)檢測(ce)

 雞(ji)粘桿菌(jun)素（Colistin）試(shi)劑(ji)盒實驗(yan)檢測(ce)

實驗(yan)原(yuan)理
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應(ying)用雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)法測(ce)定標本(ben)中(zhong)雞(ji)粘桿菌(jun)素Colistin水平(ping)。用(yong)純(chun)化的雞(ji)粘桿菌(jun)素（Colistin）抗(kang)體包被(bei)微(wei)孔板，制(zhi)成(cheng)固(gu)相抗(kang)體，往包被(bei)單(dan)抗(kang)的微(wei)孔中(zhong)依次加(jia)入(ru)粘桿菌(jun)素（Colistin），再與(yu)HRP標記的粘桿菌(jun)素（Colistin）抗(kang)體結(jie)合，形成(cheng)抗(kang)體-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標抗(kang)體復(fu)合(he)物，經(jing)過*洗滌(di)後加(jia)底(di)物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催(cui)化下轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，並(bing)在酸(suan)的作用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)zui終的黃色。顏色的深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中(zhong)的(de)粘桿菌(jun)素（Colistin）呈(cheng)正相關。用酶(mei)標儀在450nm波(bo)長下測(ce)定吸光(guang)度(du)（OD值），通過(guo)標準曲線(xian)計算樣品(pin)中(zhong)雞(ji)粘桿菌(jun)素（Colistin）濃度。

試(shi)劑(ji)盒組(zu)成(cheng)

標本(ben)要(yao)求

．標本(ben)采(cai)集(ji)後盡(jin)早(zao)進行提取(qu)，提取(qu)按相關文獻進行，提取(qu)後應(ying)盡快進行實驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬上進行試(shi)驗，可(ke)將標本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍(dong)融

2．雞(ji)粘桿菌(jun)素Colistin不能檢測(ce)含NaN3的(de)樣品(pin)，因(yin)NaN3抑制辣(la)根過氧(yang)化物酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性。

操(cao)作步驟

.標準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)試(shi)劑(ji)盒提供(gong)原(yuan)倍標準品(pin)壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可(ke)按照下(xia)列圖表在小試(shi)管中(zhong)進行稀(xi)釋(shi)。

2.加(jia)樣：分(fen)別設空白孔(kong)（空白對(dui)照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣品(pin)及酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作相同(tong)）、標準孔、待測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標包被(bei)板上(shang)標準品(pin)準確(que)加(jia)樣50μl，待測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後再加(jia)待測(ce)樣品(pin)0μl（樣品(pin)zui終稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔壁，輕輕晃動混勻(yun)。

3.溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板膜(mo)封板後置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。  

4.配(pei)液：將30倍濃縮洗滌(di)液用蒸餾水30倍稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)

5.洗滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液，靜置30秒後棄(qi)去(qu)，如此重復(fu)5次，拍幹(gan)。

6.加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔(kong)除外(wai)。

7.溫(wen)育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

8.洗滌(di)：操(cao)作同(tong)5。

9.顯色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光顯色(se)5分(fen)鐘.

0.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終止液50μl，終止反應(ying)（此時藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色）。

.測(ce)定：以空白空調零(ling)，450nm波(bo)長依序測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度（OD值）。 測(ce)定應(ying)在加(jia)終止液後5分(fen)鐘以內進行。

註意事項

．試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡5-30分(fen)鐘後方可(ke)使(shi)用，酶(mei)標包被(bei)板開封後如未用完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝入(ru)密封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存(cun)。

2．濃洗滌(di)液可(ke)能會有結(jie)晶析(xi)出，稀(xi)釋(shi)時可(ke)在水浴中(zhong)加(jia)溫(wen)助(zhu)溶(rong)，洗滌(di)時不(bu)影響(xiang)結果。

3．各步加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用加(jia)樣器(qi)，並(bing)經(jing)常校(xiao)對其準確(que)性(xing)，以避(bi)免(mian)試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時(shi)間控(kong)制在(zai)5分(fen)鐘內，如標本(ben)數(shu)量多(duo)，使(shi)用排(pai)槍加(jia)樣。

4．請每(mei)次(ci)測(ce)定的同(tong)時做(zuo)標準曲線(xian)，做(zuo)復(fu)孔(kong)。如標本(ben)中(zhong)待測(ce)物(wu)質含量過(guo)高(gao)（樣本(ben)OD值大於(yu)標準品(pin)孔(kong)*孔的(de)OD值），請先(xian)用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數(shu)（n倍）後再測(ce)定，計算時(shi)請zui後乘(cheng)以總稀(xi)釋(shi)倍數(shu)（×n×5）。

5．封板膜(mo)只(zhi)限壹(yi)次(ci)性使(shi)用，以避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

6．底(di)物請避光保(bao)存(cun)。

7．嚴格按照說(shuo)明(ming)書的(de)操(cao)作進行，試(shi)驗結(jie)果判(pan)定必(bi)須以酶(mei)標儀讀數(shu)為準.

8．所(suo)有(you)樣品(pin)，洗滌(di)液和各種廢棄(qi)物都應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處理。

9．本(ben)試(shi)劑(ji)不同(tong)批號組(zu)分(fen)不得混用。

0.如與英(ying)文說(shuo)明(ming)書有(you)異，以英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書為(wei)準。

保(bao)存(cun)條件及有效期

．雞(ji)粘桿菌(jun)素Colistin試(shi)劑(ji)盒保(bao)存(cun)：；2-8℃。

2．有效期：6個月