雞(ji)皮質酮(tong)（CS）試(shi)劑(ji)盒(he)技術原理

雞(ji)皮(pi)質酮(tong)（CS）試(shi)劑(ji)盒(he)技術原理

實(shi)驗原(yuan)理
本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)應用(yong)雙抗(kang)體夾心法(fa)測定(ding)標本(ben)中雞皮(pi)質酮(tong)CS水(shui)平。用(yong)純化的(de)雞皮質酮(tong) （CS）抗(kang)體包(bao)被微孔板，制成固(gu)相(xiang)抗體，往(wang)包(bao)被單抗(kang)的(de)微孔中(zhong)依(yi)次加(jia)入皮(pi)質酮(tong) （CS），再(zai)與(yu)HRP標記的(de)皮(pi)質酮(tong) （CS）抗(kang)體結合(he)，形成(cheng)抗(kang)體-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標抗體復(fu)合(he)物，經(jing)過*洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的催化下(xia)轉化成(cheng)藍色，並(bing)在酸的作用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)zui終的黃(huang)色。顏色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣品中(zhong)的(de)皮質酮(tong) （CS）呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標儀在450nm波(bo)長(chang)下測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值），通過標準曲(qu)線計算樣品中(zhong)雞(ji)皮質酮(tong) （CS）濃(nong)度(du)。

標本(ben)要求(qiu)

．標本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡早進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)進行(xing)，提取(qu)後(hou)應盡快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若不能(neng)馬上(shang)進行(xing)試(shi)驗(yan)，可(ke)將(jiang)標本(ben)放於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)
2．不能(neng)檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑(yi)制辣根過氧(yang)化物(wu)酶的（HRP）活性。

操作步驟(zhou)
.標準品的(de)稀釋(shi)：本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提供原倍(bei)標準品壹(yi)支，用(yong)戶可(ke)按照下列(lie)圖(tu)表在小試(shi)管(guan)中進行(xing)稀釋。

400ng/L5號標準品50μl的(de)原倍(bei)標準品加(jia)入50μl標準品稀(xi)釋液(ye)
200ng/L4號標準品50μl的(de)5號標準品加(jia)入50μl標準品稀(xi)釋液(ye)
00ng/L3號標準品50μl的(de)4號標準品加(jia)入50μl標準品稀(xi)釋液(ye)
50ng/L2號標準品50μl的(de)3號標準品加(jia)入50μl標準品稀(xi)釋液(ye)
25ng/L號標準品50μl的(de)2號標準品加(jia)入50μl標準品稀(xi)釋液(ye)

2.加(jia)樣：雞皮(pi)質酮(tong)CS分(fen)別(bie)設空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對(dui)照孔不加(jia)樣品及酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標準孔、待(dai)測(ce)樣品孔。在酶標包(bao)被板上(shang)標準品準確加(jia)樣50μl，待測(ce)樣品孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後(hou)再加(jia)待測(ce)樣品0μl（樣品zui終(zhong)稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶(mei)標板孔底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。
3.溫育：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後(hou)置37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。  
4.配液(ye)：將(jiang)30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水30倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)
5.洗滌(di)：小心揭掉封(feng)板膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去(qu)，如(ru)此(ci)重復(fu)5次，拍(pai)幹。
6.加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔除外(wai)。
7.溫(wen)育：操作同(tong)3。
8.洗滌(di)：操作同(tong)5。
9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔先(xian)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色(se)5分(fen)鐘(zhong).
0.終止：每(mei)孔加(jia)終止液(ye)50μl，終止反應（此(ci)時藍色立(li)轉黃(huang)色）。
.測(ce)定(ding)：以空白(bai)空調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長(chang)依序測量(liang)各(ge)孔的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）。 測定(ding)應在加(jia)終止液(ye)後(hou)5分(fen)鐘(zhong)以內進(jin)行(xing)。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)
．試(shi)劑(ji)盒(he)從冷(leng)藏環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出應在室溫平衡5-30分(fen)鐘(zhong)後(hou)方可(ke)使(shi)用(yong)，酶標包(bao)被板開(kai)封(feng)後(hou)如(ru)未用(yong)完，板條(tiao)應裝入密(mi)封(feng)袋(dai)中保(bao)存(cun)。
2．濃(nong)洗滌(di)液(ye)可(ke)能會有(you)結晶析出，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在水浴(yu)中加(jia)溫助(zhu)溶(rong)，洗滌(di)時不影響結果。
3．各步加(jia)樣均應使(shi)用(yong)加(jia)樣器，並經(jing)常(chang)校對(dui)其準確性，以避免(mian)試(shi)驗(yan)誤差。壹次加(jia)樣時間(jian)控制在5分(fen)鐘(zhong)內，如(ru)標本(ben)數量(liang)多(duo)，使(shi)用(yong)排槍(qiang)加(jia)樣。
4．請(qing)每(mei)次測(ce)定(ding)的(de)同(tong)時做(zuo)標準曲(qu)線，做(zuo)復(fu)孔。如(ru)標本(ben)中待測(ce)物質含(han)量(liang)過高（樣本(ben)OD值大於標準品孔*孔的(de)OD值），請(qing)先用(yong)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後(hou)再測定(ding)，計算時(shi)請(qing)zui後(hou)乘以總稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封(feng)板膜只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使(shi)用(yong)，以避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。
6．底(di)物(wu)請(qing)避光保(bao)存(cun)。
7．嚴(yan)格按照說明書(shu)的操(cao)作進行(xing)，試(shi)驗(yan)結果判(pan)定(ding)必(bi)須以酶標儀讀數(shu)為準.
8．雞皮(pi)質酮(tong)CS所有樣品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按傳(chuan)染物(wu)處理。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不同(tong)批號(hao)組(zu)分(fen)不得(de)混用(yong)。
0.如(ru)與(yu)英文(wen)說明書(shu)有異，以英文(wen)說明書(shu)為準。