免疫(yi)組(zu)化(hua)實驗中(zhong)的抗(kang)原修復(fu)

免疫(yi)組(zu)化(hua)實驗中(zhong)的抗(kang)原修復(fu)

、酶(mei)消(xiao)化(hua)：如(ru)、、蛋(dan)白水(shui)解酶(mei)

2、抗(kang)原熱修復(fu)：高(gao)壓法、微波法、水煮(zhu)法(fa)

*，免疫(yi)組(zu)化(hua)染色中zui關(guan)鍵(jian)的(de)莫過於(yu)抗(kang)原修復(fu)，而絕(jue)大多數(shu)常(chang)用抗(kang)體(ti)的(de)修復(fu)是通過加熱來(lai)完成的(de)，熱(re)抗(kang)原修復(fu)優(you)於(yu)酶消(xiao)化(hua)，更(geng)有(you)效(xiao)，染色結果(guo)更(geng)易(yi)壹(yi)致，操(cao)作(zuo)單壹(yi)。

3、修復(fu)時(shi)間：既(ji)要(yao)獲得zui強的(de)染(ran)色結果(guo)，又(you)要(yao)保持(chi)組(zu)織(zhi)形態(tai)的完整性(xing)。許(xu)多抗(kang)原修復(fu)存(cun)在的(de)問(wen)題(ti)是組(zu)織(zhi)固(gu)定時間過短(duan)時，強(qiang)烈(lie)的抗(kang)原修復(fu)可(ke)引(yin)起(qi)形態(tai)破壞、脫(tuo)片及組(zu)織(zhi)*消(xiao)化(hua)，解(jie)決的方(fang)法可采(cai)用較短(duan)時間的(de)熱(re)修復(fu)或(huo)減少(shao)酶的(de)消(xiao)化(hua)時(shi)間。

4、抗(kang)原修復(fu)緩(huan)沖(chong)液(ye)：有(you)檸(ning)檬酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)（pH6.0）、 Tris （pH7-8）、EDTA（pH8.0~9.0） 、 EGTA（pH9.0） 等，檸(ning)檬酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)（pH6.0）的優(you)點(dian)是染(ran)色背(bei)景(jing)清(qing)晰(xi)，適(shi)合於(yu)大多數(shu)抗(kang)體(ti)，Tris和 EDTA兩種(zhong)修復(fu)液(ye)對部分(fen)抗(kang)原修復(fu)效(xiao)果(guo)較(jiao)強(qiang)，但(dan)其(qi)染(ran)色背(bei)景(jing)同(tong)時加(jia)深，如(ru)使(shi)用不當易(yi)造(zao)成假陽(yang)性(xing)結果(guo)的(de)判(pan)斷(duan)。目(mu)前還(hai)沒有(you)壹(yi)種(zhong)抗(kang)原修復(fu)液(ye)能(neng)適(shi)合於(yu)所有(you)的(de)抗(kang)體(ti)，檸(ning)檬酸(suan)緩(huan)沖(chong)液(ye)（pH6.0）可作(zuo)為(wei)免疫(yi)組(zu)化(hua)常(chang)規(gui)使用的抗(kang)原修復(fu)緩(huan)沖(chong)液(ye)，但也(ye)不(bu)能(neng)除(chu)外(wai)某些抗(kang)體(ti)適(shi)用於(yu)EDTA和EGTA緩(huan)沖(chong)修復(fu)液(ye)，壹(yi)般抗(kang)原比較難(nan)於(yu)表達(da)的(de)抗(kang)體(ti)多(duo)選(xuan)擇(ze)高pH值(zhi)的(de)修復(fu)液(ye)。例如(ru)：ER、PR、Bcl-2、Bcl-6、TdT、Ki-67、Cyclin D等。

5、抗(kang)原熱修復(fu)註(zhu)意(yi)事(shi)項：無論(lun)哪(na)壹(yi)步都(dou)不(bu)要(yao)讓切片幹(gan)凅，加熱(re)後需要(yao)冷卻5-30分(fen)鐘。充分的抗(kang)原修復(fu)是影響染色結果(guo)的(de)*重(zhong)要(yao)因素，加(jia)熱(re)的溫(wen)度(du)和時(shi)間可(ke)導(dao)致修復(fu)不(bu)足或過度(du)修復(fu)。

6、抗(kang)原熱修復(fu)對組(zu)織(zhi)中內源(yuan)性(xing)的(de)影響：抗(kang)原熱修復(fu)在增強抗(kang)原決定簇表達(da)的(de)同(tong)時，也(ye)增強了(le)組(zu)織(zhi)中內源(yuan)性(xing)的(de)反(fan)應。采(cai)用卵白素-（Avidin-biotin）檢測系統(tong)，組(zu)織(zhi)中內源(yuan)性(xing)容(rong)易(yi)出(chu)現人(ren)為(wei)假象(xiang)，在加(jia)熱(re)抗(kang)原處理(li)條件(jian)*相同(tong)的陰(yin)性(xing)對照(zhao)片中可(ke)以觀察到(dao)較(jiao)強(qiang)的(de)內(nei)源性(xing)的(de)反(fan)應，沒(mei)有(you)經(jing)過熱抗(kang)原處理(li)的切(qie)片中沒(mei)有(you)出(chu)現類似的(de)情(qing)況(kuang)。在細(xi)胞漿(jiang)中(zhong)呈(cheng)均(jun)壹(yi)的細(xi)顆粒狀(zhuang)的淺棕色陽(yang)性(xing)，有(you)時(shi)表達(da)也(ye)非常(chang)強，與真陽(yang)性(xing)的(de)結果(guo)表達(da)很(hen)相似，在以往(wang)的(de)免疫(yi)組(zu)化(hua)染色中內(nei)源(yuan)性(xing)的(de)影響對診(zhen)斷造(zao)成許(xu)多的(de)誤差(cha)，卻(que)常(chang)常(chang)被忽(hu)略。值(zhi)得提醒(xing)的(de)是在概(gai)念(nian)上(shang)壹(yi)定要(yao)十(shi)分清(qing)楚(chu)，陰(yin)性(xing)對照(zhao)片必須(xu)與壹(yi)抗(kang)的(de)抗(kang)原修復(fu)處(chu)理條件(jian)*相同(tong)，才(cai)能(neng)準(zhun)確發(fa)現內(nei)源(yuan)性(xing)出(chu)現的部(bu)位(wei)。

7、內源(yuan)性(xing)封(feng)閉(bi)方(fang)法：壹(yi)般在抗(kang)原修復(fu)以後(hou)，加(jia)抗(kang)體(ti)前使(shi)用卵白素進(jin)行阻斷處理(li)，也可(ke)使用非的檢測系統(tong)，如(ru)：EliVision、EnVision、SuperVesion等。