ELISA試(shi)劑盒操作(zuo)註(zhu)意的5個方面(mian)

ELISA試(shi)劑盒測定步(bu)驟：固相包(bao)被(bei)→加(jia)待測樣品(pin)→溫(wen)育→洗(xi)滌+加(jia)酶標(biao)物→溫(wen)育→洗(xi)滌→加(jia)底(di)物→溫(wen)育壹(yi)加(jia)終止液(ye)→比(bi)色→判(pan)定結果。

ELISA試(shi)劑盒操作(zuo)較繁(fan)雜(za),在操作(zuo)中應(ying)註(zhu)意以(yi)下(xia)5個方面(mian)。

. 隨著病(bing)情(qing)的進展或(huo)由其他因(yin)素(su)影(ying)響(xiang)，某些抗(kang)體在機(ji)體內(nei)的含(han)量發生(sheng)大(da)幅(fu)波(bo)動(dong)，因(yin)此(ci)有必(bi)要(yao)對(dui)標(biao)本(ben)進行預處理(li)。間接(jie)法測(ce)定中(zhong)，標(biao)本(ben)適(shi)當稀(xi)釋還(hai)可降低非(fei)特(te)異性(xing)反(fan)應(ying)。

2. 加(jia)樣壹(yi)般(ban)使用(yong)加(jia)液(ye)器(qi)，在ELISA試(shi)劑盒中壹(yi)般有4次加(jia)樣：加(jia)標(biao)本(ben)、加(jia)酶結合(he)物、加(jia)底(di)物和(he)加(jia)終止液(ye)。加(jia)標(biao)本(ben)時(shi)必(bi)須(xu)每份標(biao)本(ben)使(shi)用(yong)壹(yi)支(zhi)移(yi)液(ye)器(qi)吸嘴(zui)，以免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。加(jia)酶結合(he)物、底(di)物和(he)終止液(ye)時則(ze)不需更(geng)換吸(xi)嘴。

3. 在成(cheng)批(pi)手工檢測中(zhong)，還(hai)應(ying)註(zhu)意操(cao)作(zuo)時差(cha)的影(ying)響(xiang)。加(jia)樣及混(hun)勻(yun)時(shi)間的差(cha)異(yi)，使(shi)抗(kang)原抗(kang)體反(fan)應(ying)和(he)酶促(cu)反(fan)應(ying)時間不(bu)壹(yi)致(zhi)，對(dui)競爭法及定量(liang)檢測影(ying)響(xiang)很大(da)，不(bu)註(zhu)意可(ke)能(neng)會導(dao)致(zhi)錯誤(wu)結果或(huo)定量(liang)不(bu)準。

4. 洗(xi)滌是ELISA試(shi)劑盒操作(zuo)過程(cheng)中決(jue)定實(shi)驗成(cheng)敗(bai)的壹(yi)個關鍵(jian)步(bu)驟。目的是除去(qu)未(wei)結合(he)的免(mian)疫反(fan)應(ying)物，終止抗(kang)原抗(kang)體反(fan)應(ying)，除去(qu)標(biao)本(ben)中(zhong)與(yu)反(fan)應(ying)無關的成(cheng)分、遊(you)離的酶標(biao)物以(yi)及反(fan)應(ying)過程(cheng)中吸(xi)附(fu)於(yu)固相載(zai)體上的非(fei)特異性(xing)物(wu)質。可用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)板(ban)或(huo)手工洗(xi)板(ban)，前(qian)者洗(xi)滌質量較(jiao)好(hao)，各反(fan)應(ying)孔洗(xi)滌效果均壹，批(pi)內(nei)、批(pi)間差(cha)異(yi)小(xiao)，手工洗(xi)板(ban)應(ying)註(zhu)意控制(zhi)各孔洗(xi)滌效果，差(cha)異(yi)不(bu)宜(yi)太(tai)大(da)。

5. 準(zhun)確(que)判(pan)定結果須(xu)使用(yong)ELISA試(shi)劑盒測讀儀，比(bi)色法判(pan)讀可選擇(ze)單(dan)波(bo)長(chang)或(huo)雙(shuang)波(bo)長(chang)，根(gen)據反(fan)應(ying)液顏色的不(bu)同選用(yong)不(bu)同(tong)波(bo)長(chang)的濾(lv)光片，以(yi)空(kong)白(bai)孔校(xiao)零測(ce)定反(fan)應(ying)孔的吸(xi)光度(du)值(zhi)。酶標(biao)儀具(ju)有良好(hao)的重復性。