體外(wai)培(pei)養基傳代細胞(bao)制備(bei)操作(zuo)方(fang)法(fa)

(壹)原(yuan)理(li)

    體外(wai)培(pei)養基的原(yuan)代細胞(bao)或(huo)細胞(bao)株(zhu)要(yao)在(zai)體外(wai)持續地(di)培(pei)養就必須傳代，以便(bian)獲(huo)得(de)穩(wen)定(ding)的細胞(bao)株(zhu)或得到(dao)大(da)量的同種細胞(bao)，並維持細胞(bao)種(zhong)的延續。培(pei)養的細胞(bao)形(xing)成單層匯合(he)以後(hou)，由(you)於密(mi)度過大(da)生存空間不(bu)足而引(yin)起(qi)營(ying)養枯竭(jie)，將培(pei)養的細胞(bao)分(fen)散，從容器(qi)中(zhong)取(qu)出，以:2或(huo)l:3以上(shang)的比率轉移到(dao)另外(wai)的容器(qi)中(zhong)進行培(pei)養，即為(wei)傳(chuan)代培(pei)養。

    細胞(bao)“壹(yi)代"指從細胞(bao)接(jie)種(zhong)到(dao)分離(li)再培(pei)養的壹段期(qi)間(jian)，與(yu)細胞(bao)世代或倍(bei)增(zeng)不(bu)同。在(zai)壹(yi)代中(zhong)，細胞(bao)培(pei)增3～6次(ci)。細胞(bao)傳(chuan)代後(hou)，壹(yi)般經過(guo)三(san)個階(jie)段：遊離期(qi)、指數(shu)增(zeng)生期和停(ting)止(zhi)期(qi)。

    常(chang)用(yong)細胞(bao)分(fen)裂(lie)指數(shu)表(biao)示細胞(bao)增(zeng)殖的旺盛程度，即(ji)細胞(bao)群(qun)的分裂(lie)相數(shu)／00個細胞(bao)。壹(yi)般細胞(bao)分(fen)裂(lie)指數(shu)介(jie)於0.2％～0.5％，腫(zhong)瘤細胞(bao)可(ke)達3～5％。細胞(bao)接(jie)種(zhong)2～3天分裂(lie)增殖(zhi)旺盛(sheng)，是活(huo)力時期(qi)，稱指數(shu)增(zeng)生期(對(dui)數生)，適宜(yi)進行各種(zhong)試驗。

(二)操(cao)作(zuo)

．將(jiang)長成單(dan)層的原(yuan)代培(pei)養細胞(bao)或(huo)HeLa細胞(bao)從二氧化(hua)碳培(pei)養箱中(zhong)取(qu)出，在(zai)超(chao)凈工(gong)作(zuo)臺中(zhong)倒掉(diao)瓶(ping)內(nei)的培(pei)養基液，加入(ru)少(shao)許消(xiao)化(hua)液。(以液(ye)面(mian)蓋(gai)住細胞(bao)為(wei)宜(yi))，靜置5～0分(fen)鐘(zhong)。

2．在(zai)倒置鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)被消(xiao)化(hua)的細胞(bao)，如(ru)果細胞(bao)變(bian)園，相(xiang)互(hu)之(zhi)間不(bu)再連(lian)接(jie)成(cheng)片，這時應(ying)立(li)即在(zai)超(chao)凈臺中(zhong)將消(xiao)化(hua)液倒掉(diao)，加(jia)入(ru)3～5ml新(xin)鮮(xian)培(pei)養液，吹(chui)打(da)，制成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液。

3．將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液吸(xi)出2ml左(zuo)右，加(jia)到(dao)另壹(yi)個培(pei)養瓶中(zhong)並向(xiang)每個瓶(ping)中(zhong)分別(bie)加3ml左(zuo)右(you)培(pei)養液，蓋(gai)好瓶塞，送(song)回二(er)氧化(hua)碳培(pei)養箱中(zhong)，繼續進行培(pei)養。

(三(san))結(jie)果

    壹(yi)般情況，傳代後(hou)的細胞(bao)在(zai)2小時左(zuo)右就(jiu)能(neng)附著(zhe)在(zai)培(pei)養瓶壁(bi)上(shang)，2～4天就可(ke)在(zai)瓶(ping)內(nei)形(xing)成單層，需(xu)要(yao)再次(ci)進行傳代。