ELSIA洗滌的(de)過(guo)程(cheng)

洗滌

    洗滌在ELISA過(guo)程(cheng)中雖(sui)不是壹個(ge)反應(ying)步(bu)驟，但卻(que)也(ye)決(jue)定著(zhe)實驗的(de)成(cheng)敗。ELSIA就(jiu)是靠(kao)洗滌來達(da)到(dao)分離(li)遊(you)離(li)的(de)和(he)結合(he)的(de)酶(mei)標記(ji)物的(de)目的(de)。通(tong)過(guo)洗滌以清(qing)除殘留在板孔中沒(mei)能與固(gu)相抗(kang)原或(huo)抗(kang)體結合(he)的(de)物(wu)質，以及在(zai)反應(ying)過(guo)程(cheng)中非(fei)特異性地吸(xi)附於固相(xiang)載(zai)體的(de)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)。聚苯乙(yi)烯等(deng)塑(su)料(liao)對蛋白質(zhi)的(de)吸(xi)附是(shi)普(pu)遍(bian)性的(de)，而(er)在洗滌時(shi)又應(ying)把(ba)這種(zhong)非(fei)特異性吸附的(de)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)洗滌下來(lai)。可以(yi)說在(zai)ELISA操(cao)作(zuo)中(zhong)，洗滌是zui主要的(de)關鍵技(ji)術，應(ying)引(yin)起操(cao)作(zuo)者的(de)高(gao)度(du)重(zhong)視(shi)，操(cao)作(zuo)者應(ying)嚴(yan)格(ge)按要(yao)求(qiu)洗滌，不得馬(ma)虎。

    洗滌的(de)方式除(chu)某(mou)些(xie)ELISA儀(yi)器配有特殊的(de)自(zi)動洗滌儀(yi)外(wai)，手工(gong)操(cao)作(zuo)有(you)浸(jin)泡(pao)式和(he)流(liu)水(shui)沖洗式兩(liang)種(zhong)，過(guo)程(cheng)如下(xia)：抗體

（）浸(jin)泡(pao)式 a.吸(xi)幹(gan)或(huo)甩(shuai)幹(gan)孔內反應(ying)液；b.用洗滌液過(guo)洗壹(yi)遍(bian)（將(jiang)洗滌液註滿(man)板(ban)孔後，即(ji)甩(shuai)去）；c.浸(jin)泡(pao)，即將(jiang)洗滌液註滿(man)板(ban)孔，放置-2分(fen)鐘，間(jian)歇搖(yao)動，浸(jin)泡(pao)時(shi)間(jian)不可隨意縮(suo)短(duan)；d.吸幹(gan)孔內液體。吸幹(gan)應(ying)*，可用(yong)水(shui)泵或真(zhen)空泵(beng)抽(chou)吸，也(ye)可甩(shuai)去液體後在清潔(jie)毛(mao)巾或(huo)吸水(shui)紙上拍幹(gan)；e.重(zhong)復操(cao)作(zuo)c和(he)d，洗滌3-4次（或(huo)按說明(ming)規(gui)定）。在(zai)間(jian)接(jie)法中(zhong)如本底較高(gao)，可增(zeng)加洗滌次數(shu)或延(yan)長浸(jin)泡(pao)時(shi)間(jian)。
微量滴定板(ban)多(duo)采用(yong)浸(jin)泡(pao)式洗滌法。洗滌液多(duo)為(wei)含非(fei)離(li)子(zi)型洗滌劑的(de)中(zhong)性緩(huan)沖液。聚苯乙(yi)烯載體與蛋白質(zhi)的(de)結(jie)合(he)是疏(shu)水(shui)性的(de)，非(fei)離(li)子(zi)型洗滌劑既(ji)含疏(shu)水(shui)基團，也含親(qin)水(shui)基團，其疏(shu)水(shui)基團與蛋白質(zhi)的(de)疏(shu)水(shui)基團借疏(shu)水(shui)鍵結(jie)合(he)，從而(er)削弱(ruo)蛋白質(zhi)與固(gu)相載(zai)體的(de)結(jie)合(he)，並借助於親水(shui)基團和水(shui)分子的(de)結(jie)合(he)作用，使(shi)蛋白質(zhi)回復到(dao)水(shui)溶液狀(zhuang)態(tai)，從而(er)脫(tuo)離(li)固(gu)相載體。洗滌液中的(de)非(fei)離(li)子(zi)型洗滌劑壹(yi)般(ban)是吐溫20，其(qi)濃(nong)度(du)可在(zai)0.05%-0.2%之間(jian)，高(gao)於0.2%時(shi)，可使(shi)包被在固相上的(de)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體解吸附而(er)減低試(shi)驗(yan)的(de)靈(ling)敏(min)度(du)。

（2）流水(shui)沖洗式 流(liu)水(shui)沖洗法(fa)zui初(chu)用於小珠載(zai)體的(de)洗滌，洗滌液僅(jin)為(wei)蒸餾(liu)水(shui)甚至可用(yong)自來(lai)水(shui)。洗滌時(shi)附接(jie)壹特殊裝置，使(shi)小珠在(zai)流(liu)水(shui)沖擊(ji)下不斷地滾動淋(lin)洗，持(chi)續(xu)沖洗2分(fen)鐘後，吸(xi)幹(gan)液體，再用蒸餾(liu)水(shui)浸(jin)泡(pao)2分鐘，吸幹(gan)即(ji)可。浸(jin)泡(pao)式猶(you)如(ru)盆浴，流(liu)水(shui)沖洗式則(ze)好比淋浴，其(qi)洗滌效(xiao)果更(geng)為(wei)*，且也(ye)簡便(bian)、快速(su)。已(yi)有(you)實驗表(biao)明(ming)，流(liu)水(shui)沖洗式同樣也適(shi)用於微量滴定板(ban)的(de)洗滌。洗滌時(shi)設(she)法(fa)加大水(shui)流量或(huo)加大水(shui)壓，讓水(shui)流沖擊(ji)板孔表(biao)面，洗滌效(xiao)果更(geng)佳(jia)。