如何(he)選擇適(shi)合的細胞分離(li)

    從樣(yang)品中分離(li)提純同(tong)種試(shi)劑(ji)盒(he)，是許多(duo)下遊應用的關鍵(jian)壹(yi)步，分離(li)得到的細胞可以(yi)用於(yu)基(ji)因(yin)鑒定(ding)、大(da)鼠(shu)小(xiao)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)計(ji)數(shu)、生(sheng)化分析(xi)、蛋(dan)白分離(li)、宿(xiu)主-病(bing)原(yuan)體互(hu)作以(yi)及細胞間(jian)相(xiang)互(hu)作用等(deng)研(yan)究。

    壹(yi)款合(he)適(shi)的分離(li)試劑(ji)盒(he)可(ke)以(yi)說是實(shi)驗成(cheng)功(gong)的保(bao)障(zhang)，因(yin)為(wei)只有獲(huo)得正(zheng)確的ELISA試劑(ji)盒(he)，下遊的分析(xi)結(jie)果(guo)才(cai)可能準(zhun)確(que)。目(mu)前(qian)，市面(mian)上(shang)有多(duo)種多(duo)樣(yang)的分離(li)試劑(ji)盒(he)可(ke)供(gong)選擇，它(ta)們的主要區別(bie)在於(yu)分離(li)方法和篩選標誌(zhi)。那麽(me)，如(ru)何(he)選擇自己的細胞分離(li)試劑(ji)盒(he)呢？

正向選擇VS負(fu)向選擇

    試(shi)劑(ji)盒(he)分離(li)試劑(ji)盒(he)的工作原(yuan)理主要有兩種，正(zheng)向(xiang)選擇和負向(xiang)選擇。正(zheng)向選擇的試劑(ji)盒(he)直(zhi)接結(jie)合的抗體來進行(xing)捕獲(huo)。這種抗(kang)體通常(chang)與(yu)磁珠相(xiang)連，可以(yi)利(li)用磁鐵(tie)將懸液(ye)中的抗體-磁珠-復合(he)物提(ti)取出來(lai)，再(zai)通過二抗將磁珠與(yu)目標分開(kai)。負(fu)向選擇的試劑(ji)盒(he)也(ye)采用類(lei)似(si)的抗體包被(bei)磁珠，不(bu)過(guo)這(zhe)種試(shi)劑(ji)盒(he)是通過(guo)去(qu)除(chu)樣(yang)品中的非目(mu)的，來間(jian)接(jie)捕獲(huo)目的。

    這兩(liang)種細胞分離(li)試劑(ji)盒(he)如(ru)何(he)取舍(she)，主要取決(jue)於(yu)目(mu)標(biao)細胞的表面(mian)是否具有特異性強(qiang)的篩選標誌(zhi)。這樣(yang)的篩選標誌(zhi)能夠實(shi)現特異性的捕獲(huo)，避免所(suo)獲(huo)得的細胞被非目(mu)標(biao)細胞汙染。如(ru)果(guo)妳(ni)的目標(biao)細胞剛好(hao)具(ju)有這樣(yang)的篩選標誌(zhi)，那麽(me)正(zheng)向(xiang)選擇的細胞分離(li)試劑(ji)盒(he)就(jiu)是選擇。但(dan)如果(guo)目(mu)標細胞並(bing)不(bu)具(ju)有特異性強(qiang)的篩選標誌(zhi)，那我們還(hai)是選用負向(xiang)選擇的細胞分離(li)試劑(ji)盒(he)。

篩(shai)選標誌(zhi)的確定(ding)

    通(tong)過PubMed等(deng)數(shu)據(ju)庫(ku)中的文獻(xian)，我(wo)們壹般可(ke)以(yi)確定(ding)在目(mu)標(biao)上(shang)表(biao)達(da)的篩選標誌(zhi)。如果(guo)文(wen)獻中找(zhao)不(bu)到適合自己的表面(mian)標(biao)誌(zhi)，我們(men)還(hai)可(ke)以(yi)用目標(biao)的DNA序(xu)列進行(xing)BLAST搜(sou)索(suo)。BLAST搜(sou)索(suo)結果(guo)會(hui)顯(xian)示，目(mu)標細胞上(shang)可(ke)能表達(da)的表面(mian)標(biao)誌(zhi)，在此(ci)基(ji)礎上(shang)可(ke)以(yi)選取用於(yu)捕獲(huo)的細胞表面(mian)蛋(dan)白。舉例(li)來說，對(dui)壹個(ge)T進行(xing)BLAST搜(sou)索(suo)，結果(guo)會(hui)顯(xian)示該(gai)是否表達(da)CD4或CD8。在得(de)知目標表達(da)CD4之後(hou)，我(wo)們(men)可(ke)以(yi)先對(dui)樣(yang)品進行(xing)壹個(ge)免疫(yi)實(shi)驗（如(ru)ELISA），以(yi)檢驗(yan)BLAST搜(sou)索(suo)的結果(guo)。壹(yi)旦證(zheng)實(shi)目標(biao)的確表(biao)達(da)CD4，我們就(jiu)可(ke)以(yi)用相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒(he)來(lai)篩(shai)選CD4陽性的T細胞。

壹般流(liu)程(cheng)

    對於(yu)壹(yi)個(ge)旨在分離(li)CD4陽性T的試劑(ji)盒(he)來(lai)說(shuo)小鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)，操作流(liu)程(cheng)主要有以(yi)下幾(ji)步。首(shou)先，將樣(yang)品與(yu)anti-CD4抗體包被(bei)的磁珠共同(tong)孵育，使(shi)抗(kang)體與(yu)CD4+ T結合。然後(hou)洗(xi)去(qu)不(bu)需(xu)要的非目(mu)標(biao)（即(ji)不(bu)表(biao)達(da)CD4的），留下磁珠-抗體-復合(he)物(wu)。ELISA試劑(ji)盒(he)將上(shang)述(shu)復(fu)合物(wu)與(yu)能結合anti-CD4抗體的二抗壹(yi)起(qi)孵育胞，形(xing)成磁珠-抗體-二抗復(fu)合(he)物。我們(men)可以(yi)用磁鐵(tie)去(qu)除這(zhe)種磁珠-抗體-二抗復(fu)合(he)物，而(er)所(suo)有的CD4+細胞留在上(shang)清中。zui後(hou)，只需將上(shang)清轉(zhuan)移(yi)就(jiu)可(ke)以(yi)進行(xing)下遊研(yan)究了(le)。