常見細(xi)胞增(zeng)殖檢測方(fang)法總結

    細胞增(zeng)殖是(shi)生(sheng)物(wu)體(ti)的重(zhong)要生(sheng)命特(te)征(zheng)，細(xi)胞以分(fen)裂的方(fang)式(shi)進(jin)行增(zeng)殖。單細(xi)胞生物(wu)，以細(xi)胞分(fen)裂的方(fang)式(shi)產生新(xin)的個(ge)體(ti)。多(duo)細(xi)胞生物(wu)，以細(xi)胞分(fen)裂的方(fang)式(shi)產生新(xin)的細(xi)胞，用來補(bu)充(chong)體內(nei)衰(shuai)老(lao)或(huo)死(si)亡的細(xi)胞；同時，多(duo)細胞生物(wu)可(ke)以由(you)壹(yi)個(ge)受精(jing)卵，經過(guo)細胞的分(fen)裂和(he)分(fen)化(hua)，zui終(zhong)發育(yu)成(cheng)壹(yi)個(ge)新(xin)的多(duo)細(xi)胞個(ge)體(ti)。必(bi)須(xu)強調(tiao)指出(chu)，通(tong)過(guo)細胞分(fen)裂，可(ke)以將(jiang)復制的遺(yi)傳物(wu)質(zhi)，平(ping)均地分(fen)配(pei)到兩個(ge)子(zi)細(xi)胞中去。可(ke)見，細(xi)胞增(zeng)殖是(shi)生(sheng)物(wu)體(ti)生長、發(fa)育、繁殖和遺(yi)傳的基礎(chu)。

壹(yi)、MTT

    又稱MTT比(bi)色法，是(shi)壹(yi)種(zhong)檢測細(xi)胞存活和生(sheng)長的方(fang)法。其檢測原(yuan)理(li)為(wei)活細胞線粒(li)體(ti)中(zhong)的琥(hu)珀(po)酸(suan)脫氫酶能使外源(yuan)性MTT還(hai)原(yuan)為(wei)水(shui)不溶性(xing)的藍(lan)紫色結晶甲(jia)瓚(zan)（Formazan）並沈(chen)積(ji)在(zai)細胞中，而(er)死(si)細胞無此功能(neng)。二(er)甲(jia)基亞碸（DMSO）能溶(rong)解(jie)細(xi)胞中的甲(jia)瓚(zan)，用酶聯(lian)免疫檢測儀(yi)在(zai)490nm波(bo)長處(chu)測定(ding)其光(guang)吸(xi)收值(zhi)，可間(jian)接(jie)反(fan)映(ying)活細胞數量(liang)。在(zai)壹(yi)定(ding)細胞數範(fan)圍內，MTT結晶形(xing)成(cheng)的量(liang)與細胞數成(cheng)正比。該(gai)方法已廣(guang)泛用於壹(yi)些生物(wu)活性因(yin)子(zi)的活性檢測、大規(gui)模(mo)的抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)藥物(wu)篩選、細(xi)胞毒(du)性試(shi)驗以及(ji)腫(zhong)瘤(liu)放(fang)射敏感(gan)性(xing)測定(ding)等(deng)。它(ta)的特(te)點(dian)是(shi)靈(ling)敏度高(gao)、經(jing)濟(ji)。

二、CCK-8

    Cell Counting Kit-8簡(jian)稱CCK-8試(shi)劑盒(he)，是(shi)壹(yi)種(zhong)基於WST-8的廣(guang)泛應用於細(xi)胞增(zeng)殖和細(xi)胞毒(du)性的快速高靈(ling)敏度檢測試(shi)劑盒(he)。WST-8是(shi)壹(yi)種(zhong)類似(si)於(yu)MTT的化(hua)合物(wu)，在(zai)電子耦(ou)合試(shi)劑存在(zai)的情況(kuang)下(xia)，可以被(bei)線粒(li)體(ti)內(nei)的壹(yi)些脫氫酶還原(yuan)生(sheng)成(cheng)橙(cheng)黃色的formazan。細(xi)胞增(zeng)殖越多(duo)越快，則(ze)顏色越(yue)深；細(xi)胞毒(du)性越(yue)大，則(ze)顏色越(yue)淺。對(dui)於(yu)同樣的細(xi)胞，顏色的深淺(qian)和(he)細胞數目(mu)呈線(xian)性關(guan)系(xi)。

    CCK-8的原(yuan)理(li)跟(gen)MTT其實是(shi)相(xiang)同的，不同之處(chu)在(zai)於CCK-8法生成(cheng)的formazan是(shi)水(shui)溶(rong)性(xing)的，不需(xu)要(yao)再(zai)吸(xi)出(chu)培(pei)養(yang)液(ye)加入(ru)有機(ji)溶(rong)劑溶解(jie)這(zhe)個(ge)步(bu)驟(zhou)，因(yin)此可以減(jian)少(shao)壹(yi)定(ding)的誤(wu)差(cha)。其他優點(dian)就(jiu)是(shi)重(zhong)復性(xing)優於MTT；對(dui)細(xi)胞毒(du)性小(xiao)；為(wei)瓶溶液(ye)，不需(xu)預(yu)制，即(ji)開即用。

三、BrdU

    Brdu，即(ji)5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全(quan)名(ming)5-溴(xiu)脫氧(yang)核苷(gan)，為(wei)胸腺嘧啶的衍生物(wu)，可(ke)代替(ti)胸腺嘧啶在(zai)DNA合成(cheng)期(qi)（S期(qi)），活體註(zhu)射或(huo)細胞培養(yang)加入(ru)，而後利用抗(kang)Brdu單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)，ICC染(ran)色，顯示(shi)增(zeng)殖細胞。同時結合其它(ta)細胞標記(ji)物(wu)，雙重(zhong)染(ran)色，可(ke)判斷(duan)增(zeng)殖細胞的種(zhong)類，增(zeng)殖速度，對(dui)研究細(xi)胞動力學有重(zhong)要意(yi)義。

    但由(you)於(yu)抗(kang)體(ti)分(fen)子量(liang)大，難(nan)於(yu)摻(chan)入(ru)並被(bei)有效檢測，因(yin)此BrdU檢測需(xu)采(cai)用DNA酶或(huo)HCl或(huo)加熱(re)使DNA變(bian)性(xing)；這(zhe)些處理(li)方(fang)法會破壞抗(kang)原(yuan)識(shi)別位點(dian)，此外許(xu)多(duo)細(xi)胞周(zhou)期(qi)分(fen)析的染(ran)料都(dou)需(xu)要(yao)dsDNA，這(zhe)種(zhong)處(chu)理方法也使得同壹(yi)樣本(ben)無(wu)法同時進(jin)行細(xi)胞周(zhou)期(qi)分(fen)析。對(dui)於(yu)植物(wu)細(xi)胞等(deng)有細(xi)胞壁的分(fen)析，采(cai)用抗(kang)體(ti)檢測還(hai)需(xu)要(yao)消(xiao)化(hua)細胞壁，細(xi)胞壁消(xiao)化(hua)酶常含(han)有壹(yi)些雜(za)質(zhi)，會(hui)導致檢測的可(ke)靠性降(jiang)低，同時BrdU檢測則(ze)需(xu)要(yao)進(jin)行長時(shi)間(jian)的孵(fu)育(yu)--幾個(ge)小(xiao)時(shi)甚至(zhi)過(guo)夜。

四、EdU

    EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是(shi)壹(yi)種(zhong)胸腺嘧啶核苷類似(si)物(wu)，能(neng)夠在(zai)細胞增(zeng)殖時期(qi)代替(ti)胸腺嘧啶（T）滲入正在(zai)復制的DNA分(fen)子中，通過(guo)基於EdU與Apollo?熒光(guang)染(ran)料的特(te)異性反應快速檢測細(xi)胞DNA復制活性，適(shi)用於細(xi)胞增(zeng)殖、細胞分(fen)化(hua)、生長與(yu)發育(yu)、DNA修(xiu)復、病毒(du)復制、細(xi)胞標記(ji)示(shi)蹤等(deng)方面的研究，尤(you)其適(shi)合進(jin)行siRNA、miRNA、小(xiao)分(fen)子化(hua)合物(wu)及(ji)其他藥物(wu)的篩選實驗。

    與(yu)BrdU檢測方(fang)法相比，EdU檢測方(fang)法更(geng)快速、更(geng)靈(ling)敏、更(geng)準(zhun)確(que)。EdU染(ran)料只(zhi)有BrdU抗(kang)體(ti)的/500，在(zai)細胞內很(hen)容(rong)易(yi)擴散，無(wu)需(xu)DNA變(bian)性(xing)（酸(suan)解(jie)、熱(re)解(jie)、酶(mei)解(jie)等(deng)），可有(you)效避(bi)免樣品(pin)損傷，而(er)且無需(xu)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應，能(neng)在(zai)細胞和組(zu)織(zhi)水平更(geng)準(zhun)確(que)地反映(ying)DNA復制活性。