細胞凍存(cun)生(sheng)物材料(liao)準備

生(sheng)物材料(liao)準備

    生(sheng)物材料(liao)凍存(cun)前(qian)進行(xing)的準備工(gong)作可(ke)能會對凍存(cun)結(jie)果產生(sheng)影響(xiang)。對於(yu)非(fei)復制性(xing)材(cai)料(liao)，如組(zu)織(zhi)，核(he)酸和蛋(dan)白(bai)等(deng)，準備過(guo)程包括確(que)認生(sheng)物材料(liao)處於(yu)合(he)適(shi)的溶(rong)液(ye)或(huo)凍存(cun)培(pei)養基(ji)中(zhong)，此(ci)步驟(zhou)的(de)目的在於(yu)復(fu)蘇(su)時(shi)達到(dao)zui大化(hua)的預期(qi)用途。然而，活(huo)細胞和微(wei)生(sheng)物的穩(wen)定性(xing)及復(fu)蘇(su)活(huo)力受(shou)生(sheng)長條件和凍(dong)存(cun)前(qian)準備工(gong)作的影響(xiang)。

    細胞凍存(cun)前(qian)需(xu)考(kao)慮(lv)多種因素，包括細胞類型(xing)、活(huo)力、生(sheng)長條件、生(sheng)理(li)狀(zhuang)態、數(shu)目以及細胞前(qian)處(chu)理等(deng)。當建立(li)壹(yi)個新分離株或(huo)細胞系(xi)的初次種子(zi)儲(chu)備(bei)時(shi)，必(bi)須對培(pei)養物進行(xing)檢測(ce)並消毒，確(que)保(bao)微(wei)生(sheng)物汙染(ran)的(de)zui小(xiao)化。每次準備工(gong)作後，以(yi)及每次準備新(xin)批(pi)次的培(pei)養物時，均要(yao)重復這個步驟(zhou)。

微(wei)生(sheng)物

    生(sheng)長於(yu)通(tong)氣(qi)培(pei)養條(tiao)件下(xia)的微(wei)生(sheng)物細胞，特別是(shi)細菌和酵(jiao)母，表(biao)現(xian)出比(bi)生(sheng)長於(yu)非(fei)通氣(qi)條(tiao)件下(xia)的細胞更強的(de)耐受(shou)冷卻(que)和凍(dong)存(cun)傷(shang)害(hai) 的能力。T.Nei 認為，在通(tong)氣(qi)培(pei)養條(tiao)件下(xia)，細胞通透性(xing)更(geng)好，且開(kai)放(fang)條件下(xia)培(pei)養細胞在冷(leng)卻過(guo)程中(zhong)比(bi)非(fei)通氣(qi)條(tiao)件下(xia)培(pei)養的(de)細胞失水更(geng)快(kuai)。另外，針(zhen)對微(wei)生(sheng)物細胞，在對數生(sheng)後期(qi)及穩(wen)定期(qi)早(zao)期(qi)獲得的(de)細胞表(biao)現(xian)出更(geng)強(qiang)的(de)冰(bing)凍耐受(shou)性(xing)。從(cong)生(sheng)長後期(qi)和靜(jing)態培(pei)養早(zao)期(qi)收集的微(wei)生(sheng)物細胞比生(sheng)長早(zao)期(qi)和生(sheng)長晚(wan)期(qi)的細胞表(biao)現(xian)了更(geng)強(qiang)的冰(bing)凍耐受(shou)性(xing)。

    壹(yi)般(ban)來(lai)講，初始(shi)凍(dong)存(cun)的(de)細胞數目越(yue)多，復蘇(su)率越(yue)高(gao)。對於(yu)大(da)多數細菌和酵(jiao)母而(er)言(yan)，保(bao)證約 07/ml 的細胞數才能確(que)保(bao)足(zu)夠(gou)數(shu)量(liang)的細胞復蘇(su)。由(you)於(yu)這(zhe)些細胞可(ke)便捷地(di)從(cong)瓊脂(zhi)培(pei)養板(ban)或(huo)斜面上收集，如果需要(yao)更(geng)大量(liang)的細胞，也(ye)可(ke)使細胞生(sheng)長於(yu)液(ye)體培(pei)養基(ji)中(zhong)通(tong)過(guo)離心(xin)收集，在任(ren)何壹(yi)種(zhong)情(qing)況下(xia)，細胞通常(chang)懸浮(fu)在包含(han)凍存(cun)保(bao)護劑的新鮮培(pei)養基(ji)中(zhong)。原(yuan)生(sheng)生(sheng)物可(ke)以通(tong)過(guo)離心(xin)濃縮，但通常(chang)需要(yao)懸浮(fu)於(yu)使(shi)用的培(pei)養基(ji)中(zhong)，之(zhi)後使(shi)用等(deng)體積含(han)凍存(cun)保(bao)護劑的新鮮培(pei)養基(ji)稀釋。

    針(zhen)對芽(ya)孢菌凍存(cun)，需(xu)要(yao)收(shou)集芽(ya)孢並重懸於(yu)含(han)凍存(cun)保(bao)護劑的新鮮培(pei)養基(ji)中(zhong)。凍(dong)存(cun)前(qian)，必(bi)須縮短操(cao)作時間且確(que)保(bao)芽(ya)孢並未萌發。針(zhen)對非(fei)芽(ya)孢菌凍存(cun)，凍(dong)存(cun)前(qian)需(xu)采用特殊程序(xu)收(shou)集菌絲體。某(mou)些具(ju)硬菌絲體的(de)真菌，需將(jiang)含(han)有(you)菌絲體的(de)瓊脂(zhi)塊(kuai)從(cong)培(pei)養基(ji)中(zhong)切(qie)出(chu)，並(bing)將(jiang)其置於(yu)含(han)凍存(cun)保(bao)護劑的新鮮培(pei)養基(ji)中(zhong)。硬(ying)菌絲體無(wu)法(fa)與瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養基(ji)很(hen)好粘(zhan)附(fu)，生(sheng)長於(yu)肉(rou)湯(tang)培(pei)養基(ji)中(zhong)時(shi)，凍(dong)存(cun)前(qian)需(xu)將(jiang)菌絲體團(tuan)進行(xing)混合(he)。

    凍(dong)存(cun)材(cai)料(liao)的活力和復(fu)蘇(su)率由凍(dong)存(cun)前(qian)後的(de)培(pei)養和生(sheng)長狀(zhuang)態決定。活(huo)力是(shi)衡量(liang)培(pei)養物生(sheng)長和繁殖的(de)壹(yi)項(xiang)指標。例如原(yuan)生(sheng)生(sheng)物材料(liao)等(deng)某些(xie)材料(liao)，需經過(guo)多次傳代(dai)才(cai)能保證其穩(wen)定性(xing)。復(fu)蘇(su)細胞數量(liang)的估(gu)算有(you)多種方(fang)法(fa)，包括連(lian)續稀釋，平(ping)板計(ji)數或(huo)直(zhi)接細胞計(ji)數。通(tong)過對比凍(dong)存(cun)前(qian)和復(fu)蘇(su)後細胞數量(liang)的差(cha)異，可(ke)說明細胞復蘇(su)程度(du) 或(huo)凍存(cun)過(guo)程是(shi)否成(cheng)功。