PCR技術的基(ji)本(ben)原(yuan)理

    聚合(he)酶(mei)鏈(lian)反應(ying)(PolymeraseChainReactionm,PCR)是(shi)壹項體外(wai)基(ji)因擴(kuo)增(zeng)技術,985年美國PE公(gong)司人類遺(yi)傳(chuan)研究(jiu)室(shi)發明(ming)了該(gai)項技術,Saiki等首(shou)先應(ying)用(yong)於(yu)鐮(lian)狀紅細胞(bao)貧血的產(chan)前(qian)診斷,但(dan)由(you)於(yu)操作方(fang)法(fa)繁瑣未能(neng)全面(mian)推(tui)廣(guang)應(ying)用(yong)。直到988年耐(nai)熱DNA聚合(he)酶(mei)(Taq酶(mei))的發現和應(ying)用(yong),使PCR技術變(bian)得極(ji)為簡單,才被(bei)迅(xun)速應(ying)用(yong)於(yu)分子生(sheng)物學(xue)、生物工程、醫(yi)學(xue)、法(fa)醫學(xue)和農學(xue)等領域,PCR技術已經作(zuo)為分子(zi)生(sheng)物學(xue)發展(zhan)道(dao)路上壹(yi)個(ge)裏程碑，永載史冊。

PCR技術的基(ji)本(ben)原(yuan)理

    類似於(yu)DNA的天(tian)然復(fu)制過程，其(qi)特(te)異(yi)性(xing)依(yi)賴(lai)於(yu)與(yu)靶(ba)序列(lie)兩端互(hu)補的寡(gua)核苷酸引(yin)物。PCR由(you)變(bian)性(xing)--退(tui)火--延伸三個(ge)基(ji)本(ben)反應(ying)步(bu)驟構(gou)成：細(xi)胞

① 模(mo)板DNA的變(bian)性(xing)：模(mo)板DNA經加(jia)熱至93℃左(zuo)右(you)壹(yi)定(ding)時間(jian)後，使(shi)模(mo)板DNA雙(shuang)鏈或經PCR擴(kuo)增(zeng)形(xing)成的雙(shuang)鏈DNA解離，使之(zhi)成(cheng)為單鏈(lian)，以便它(ta)與(yu)引(yin)物結合，為下輪(lun)反應(ying)作(zuo)準備；

② 模(mo)板DNA與(yu)引(yin)物的退(tui)火(復(fu)性(xing))：模(mo)板DNA經加(jia)熱變(bian)性(xing)成(cheng)單(dan)鏈後，溫(wen)度降至55℃左(zuo)右(you)，引(yin)物與(yu)模(mo)板DNA單(dan)鏈(lian)的互(hu)補序(xu)列(lie)配(pei)對結(jie)合(he)；

③引(yin)物的延伸：DNA模(mo)板--引(yin)物結合物在(zai)TaqDNA聚合(he)酶(mei)的作(zuo)用(yong)下，以dNTP為反應(ying)原(yuan)料，靶序列(lie)為模(mo)板，按(an)堿(jian)基(ji)配(pei)對與(yu)半(ban)保(bao)留復(fu)制原理，合成壹條新(xin)的與(yu)模(mo)板DNA鏈(lian)互(hu)補的半(ban)保(bao)留復(fu)制鏈重(zhong)復(fu)循環變(bian)性(xing)--退(tui)火--延伸三過程，就(jiu)可獲(huo)得更多的“半(ban)保(bao)留復(fu)制鏈"，而(er)且(qie)這種(zhong)新鏈(lian)又(you)可成為下次循環的模(mo)板。每(mei)完成壹個(ge)循環需2～4分鐘(zhong)，2～3小時就(jiu)能(neng)將待擴目(mu)的基(ji)因擴(kuo)增(zeng)放(fang)大幾百(bai)萬(wan)倍(Plateau)。 到達(da)平(ping)臺期(qi)所需循環次數(shu)取(qu)決(jue)於(yu)樣(yang)品中(zhong)模(mo)板的拷(kao)貝。在(zai)此同時認識到(dao)蛋白質(zhi)是(shi)接(jie)受RNA的遺(yi)傳(chuan)信息而合成(cheng)的。細(xi)胞(bao)