流(liu)式(shi)細(xi)胞術方(fang)案

A.所(suo)需溶液(ye)和試(shi)劑

    X磷酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)（PBS）：將8 g氯(lv)化(hua)鈉(na)（NaCl），0.2 g 氯(lv)化(hua)鉀(jia)（KCl），.44 g （Na2HPO4），0.24 g 磷酸(suan)二(er)氫鉀(jia)（KH2PO4）溶解在(zai)800 ml蒸(zheng)餾水（dH2O）中(zhong)。用(yong)鹽(yan)酸(suan)調(tiao)節(jie)pH到7.4，定容(rong)至升(sheng)。室(shi)溫(wen)保(bao)存。細(xi)胞(bao)

    （無(wu)甲醇的）

    孵(fu)育(yu)緩沖(chong)液(ye)：將0.5 g牛(niu)血清白(bai)蛋白(bai)（bovine serum albumin，BSA）溶解在(zai)00 ml的 X PBS中(zhong)。保(bao)存在(zai)4°C。

B. 固(gu)定

    離(li)心(xin)收(shou)集細胞(bao)，棄上清。
    將細(xi)胞重(zhong)懸在(zai)0.5- ml PBS中(zhong)。加(jia)入(ru)至終(zhong)濃度為(wei)2-4%。
    37°C固定0分鐘。
    放(fang)在(zai)冰(bing)上降(jiang)溫(wen)分鐘。
    做(zuo)細胞外(wai)染(ran)色(se)不(bu)需要(yao)細(xi)胞(bao)膜(mo)打(da)孔時(shi)，繼(ji)續D步(bu)或(huo)將細(xi)胞保(bao)存在(zai)4°C含(han)有0.%疊(die)氮鈉(na)的PBS中(zhong)；做細(xi)胞(bao)內染色(se)時，繼(ji)續C步(bu)給(gei)細(xi)胞膜(mo)打(da)孔。

C.細(xi)胞(bao)膜(mo)打(da)孔

    邊(bian)輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)邊將冰(bing)冷的00%甲醇(chun)緩(huan)慢(man)加(jia)入(ru)到預冷的細胞(bao)中(zhong)，至終(zhong)濃度為(wei)90%。或者(zhe)也可(ke)以在(zai)細(xi)胞膜(mo)打(da)孔前離心(xin)去(qu)除固定劑，然(ran)後將細(xi)胞沈澱重(zhong)懸在(zai)90%甲(jia)醇PBS溶液(ye)中(zhong)。
    在(zai)冰(bing)上放置30分鐘。
    進入(ru)染色(se)步(bu)驟(zhou)或是將細(xi)胞在(zai)90%甲(jia)醇PBS溶液(ye)中(zhong)，-20°C保(bao)存。