常(chang)見(jian)細(xi)胞洗滌液的(de)配(pei)制(zhi)方法

)訓(xun)練目的(de)

掌(zhang)握Hank’s、O．0l mol／L PBS兩種常(chang)見(jian)細(xi)胞洗滌液的(de)配(pei)制(zhi)方法。

2)實(shi)驗(yan)原理

    Hank's、0．Ol mol／L PBS兩種是(shi)細(xi)胞培養(yang)中常(chang)用到的(de)基(ji)礎液(ye)。常(chang)用於洗滌離心後的(de)細(xi)胞沈澱(dian)以及(ji)培(pei)養基等(deng)用液的(de)溶(rong)劑(ji)。Hank's和0．0mol／L PBS兩種BSS液(ye)因(yin)其(qi)不(bu)含對(dui)高(gao)溫高壓敏感(gan)的(de)物(wu)質，故(gu)可(ke)以采用濕(shi)熱(re)滅菌(jun)法滅(mie)菌。

3)實驗(yan)材料(liao)

①器材：高壓蒸(zheng)汽滅(mie)菌鍋、pH計、燒(shao)杯(bei)( 000 mL)、容(rong)量瓶(ping)( 000 mL)、瓶、濾(lv)紙、壹次性0．22μm塑料(liao)微(wei)孔(kong)濾(lv)膜(mo)。

②試劑(ji)：CaCl2、MgSO4·7H20、葡萄糖、KH2PO4、Na2HPO4·H20、新(xin)鮮制(zhi)備的(de)三蒸水、74％NaHC03、KCl、Na2HP04。

4)操作(zuo)步(bu)驟

()Hank's液的(de)配(pei)制(zhi)和無菌處理Hank's液的(de)配(pei)方。

①準確稱取(qu)O．49CaCl2溶解在(zai)裝(zhuang)有(you)00 mL三蒸水的(de)燒(shao)杯(bei)中。

②準確稱取(qu)O．20 g MgSO4·7H2O溶解在(zai)含(han)00 mL三蒸水的(de)另壹燒(shao)杯(bei)中。

③按(an)配(pei)方(表(biao)5．)準確稱取(qu)其(qi)他(ta)試劑(ji)依次溶解在(zai)盛(sheng)有(you)650 mL三蒸水的(de)燒(shao)杯(bei)中，註(zhu)意應待(dai)前(qian)壹(yi)種試劑(ji)*溶解後，再溶解下(xia)壹(yi)種成分(fen)，混勻。細胞

④將(jiang)①、②液緩(huan)慢(man)倒(dao)人③中，並(bing)不時(shi)攪動(dong)，防止出(chu)現(xian)沈澱(dian)。

⑤將(jiang)0．35 g NaHC03溶解在(zai)37℃00 mL三蒸水中。

⑥用(yong)數滴NaHC03液(ye)溶解O．02 g酚(fen)紅(hong)。

⑦將(jiang)⑤、⑥液逐(zhu)滴並(bing)攪拌加入到④液(ye)中。

⑧將(jiang)⑦液移(yi)人容(rong)量瓶(ping)中，補(bu)加三蒸水定容(rong)至(zhi) 000 mL，然(ran)後充分(fen)混勻。

⑨用O．22μm微(wei)孔(kong)濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)除菌(jun)後分(fen)裝(zhuang)，4℃冰(bing)箱內保(bao)存；或(huo)者先分(fen)裝(zhuang)後，再用8磅0 min高(gao)壓蒸(zheng)汽滅(mie)菌，貼上(shang)標簽後於4℃冰箱內保(bao)存。

(2)O．0 mol/L PBS的(de)配(pei)制(zhi)

①準確稱取(qu)NaCl 8．O g、KCl 0.2 g、Na2HPO4.5 g(如為(wei)Na2HPO4·2H20，則(ze)為(wei)2．89 g)、KH2P04 0．2 g。

②將(jiang)上(shang)述試劑(ji)依次溶於 000 mL去(qu)離子(zi)水中，*溶(rong)解後，5℃高壓滅(mie)菌(jun)0～5 min，4℃冰(bing)箱儲存(cun)備用(yong)。細胞