細(xi)胞(bao)有(you)絲分(fen)裂的實驗方法

(壹(yi))試(shi)驗原理

    細(xi)胞(bao)有(you)絲分(fen)裂指數(mitotic index，MI)是(shi)指屬於(yu)分(fen)裂(lie)期(qi)的細(xi)胞(bao)占(zhan)總(zong)細胞(bao)數的(de)百分(fen)率．用於表(biao)示細胞(bao)增殖(zhi)旺(wang)盛的程度，也可用(yong)於(yu)檢測(ce)藥物對(dui)細胞(bao)增殖(zhi)能(neng)力(li)的影(ying)響。用蓋(gai)玻(bo)片(pian)培養(yang)法(fa)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，做固(gu)定(ding)和染色(se)後，鏡下(xia)觀察(cha)和計數000個(ge)細胞(bao)中處於分裂期(qi)的細(xi)胞(bao)數並(bing)計算MI。

(二)材料

．待(dai)檢(jian)材料(藥(yao)物)。

2．細(xi)胞(bao)培養(yang)成(cheng)層的(de)貼壁(bi)細胞(bao)。

3．試劑(ji) 甲醇(chun)、3％吉(ji)姆(mu)薩(sa)染(ran)液(ye)。

4．器(qi)材CO2培養(yang)箱、倒(dao)置顯微鏡、蓋玻片(pian)(2．2 cm×2．2 cm，需(xu)預先(xian)清(qing)洗(xi)和滅菌處理)、塑(su)料培(pei)養(yang)皿(min)(3．5 cm)、載(zai)玻(bo)片(pian)、封片用蓋(gai)玻片、中性(xing)樹(shu)膠(jiao)。

(三(san))實驗方法

．將細胞(bao)消(xiao)化(hua)成(cheng)單個(ge)細胞(bao)懸液(ye)，將細胞(bao)懸液(ye)分瓶(ping)培養(yang)，分(fen)成(cheng)不加藥(yao)的(de)對(dui)照組(zu)和加人(ren)不同(tong)劑(ji)量藥(yao)物的(de)實驗組(zu)。

2．細胞(bao)傳代(dai)培(pei)養(yang)的(de)方(fang)法(fa)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，並(bing)制(zhi)成(cheng)濃(nong)度為(wei)05／ml的(de)細胞(bao)懸液(ye)。

3．將清洗和滅菌處理的(de)蓋(gai)玻片(pian)放(fang)置在(zai)塑(su)料培(pei)養(yang)皿(min)中，將細胞(bao)懸液(ye)搖(yao)勻(yun)後接種(zhong)於(yu)培養(yang)皿(min)中，各皿中接種(zhong)量相(xiang)同。

4．分(fen)別於培養(yang)24 h、48ht和72h後從培養(yang)皿(min)中取(qu)出(chu)蓋玻(bo)片(pian)，在(zai)Hanks液(ye)中漂洗(xi)2～3次。

5．先(xian)用(yong)甲(jia)醇(chun)固定(ding)30 min，再用吉(ji)姆(mu)薩(sa)染(ran)液(ye)染(ran)色。晾(liang)幹後用中性(xing)樹(shu)膠(jiao)封片。

6．油鏡下(xia)或(huo)高倍鏡下(xia)計數000個(ge)細胞(bao)中處於分裂期(qi)的細(xi)胞(bao)數。

7．計算MI按下(xia)列(lie)公(gong)式計算MI。

(四)結(jie)果與分析(xi)

    將對照組(zu)和藥物組(zu)的實(shi)驗結(jie)果繪(hui)制(zhi)成(cheng)直方圖並(bing)加以(yi)比(bi)較，也可繪(hui)制(zhi)成MI曲線(xian)進行比較：

(五)註意事項

．為(wei)了(le)減(jian)少(shao)誤差，實驗者(zhe)必須(xu)熟(shu)悉(xi)各期(qi)分裂(lie)象(xiang)細胞(bao)的形(xing)態特征(zheng)，該(gai)實驗自始至(zhi)終由(you)壹(yi)人(ren)完(wan)成(cheng)，當兩人以上觀察(cha)時(shi)，應掌握相(xiang)同的(de)標準。

2．MI曲線(xian)與細胞(bao)生長(chang)曲線(xian)趨(qu)勢基(ji)本(ben)相(xiang)似，但(dan)不*相(xiang)同。如(ru)果(guo)在(zai)細(xi)胞(bao)增長(chang)達飽(bao)和密(mi)壁(bi)並(bing)進入停(ting)止(zhi)期(qi)後．細胞(bao)數量很(hen)多，而(er)分裂象(xiang)細胞(bao)可*消(xiao)失(shi)。

3．細胞(bao)在(zai)蓋(gai)玻片上的密(mi)度常(chang)不均(jun)勻(yun)，細胞(bao)密(mi)集(ji)區與區的(de)分裂(lie)象(xiang)細胞(bao)數目(mu)可能(neng)不同(tong)。計數時(shi)要選(xuan)擇(ze)密(mi)度近(jin)似(si)區，以減(jian)少(shao)實(shi)驗誤差。