培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)遺傳學(xue)的檢(jian)測(ce)技(ji)術

    細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)是(shi)體(ti)外研究細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)性狀、遺傳學(xue)及(ji)分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性zui直接有效(xiao)的(de)手(shou)段(duan)。培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)遺傳學(xue)的主(zhu)要(yao)檢測(ce)技(ji)術，包(bao)括性(xing)染色體(ti)的(de)檢(jian)測(ce)、染色體(ti)顯(xian)示、染色體(ti)顯(xian)帶(dai)及(ji)染色體(ti)基(ji)因定位等。對培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)檢測(ce)主(zhu)要(yao)包括(kuo)細(xi)胞(bao)DNA檢(jian)測(ce)、RNA檢(jian)測(ce)及(ji)蛋(dan)白質的檢測(ce)，而(er)相關的生物(wu)學(xue)檢測(ce)主(zhu)要(yao)包括(kuo)細(xi)胞(bao)酶(mei)學(xue)檢測(ce)及(ji)細(xi)胞(bao)雕(diao)亡(wang)的檢測(ce)。

    組(zu)織(zhi)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)是(shi)研究細(xi)胞(bao)遺傳zui便利(li)、zui有效(xiao)的(de)方法(fa)和對(dui)象；也是(shi)揭(jie)示培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)性(xing)狀的重要方面。具有46條染色體(ti)數(shu)就(jiu)是(shi)用(yong)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)法(fa)所(suo)確(que)定出(chu)來的(de)。當前(qian)已發(fa)展出(chu)染色體(ti)分(fen)帶(dai)、姊(zi)妹染色單體(ti)分(fen)化(hua)染色、染色體(ti)原(yuan)位雜交等多(duo)種技術。近(jin)年(nian)染色體(ti)熒(ying)光(guang)基(ji)因標記(ji)法(fa)又獲(huo)得(de)迅(xun)速發(fa)展，使(shi)基(ji)因作為(wei)實體(ti)得(de)以在染色體(ti)上(shang)顯(xian)現(xian)，從而(er)*染色體(ti)和(he)分(fen)子(zi)遺傳學(xue)之間(jian)的(de)空(kong)白。染色體(ti)的(de)研究已成為(wei)組(zu)織(zhi)培(pei)養(yang)技(ji)術中(zhong)重要(yao)組(zu)成(cheng)部(bu)分(fen)。

壹(yi)、性(xing)染色體(ti)檢(jian)測(ce)

(壹(yi))原(yuan)理(li)

    在間期細胞(bao)核(he)中，女(nv)性(xing)x染色質和男性Y染色質均可用特(te)殊(shu)染色法(fa)顯示出(chu)來。女(nv)性(xing)的兩(liang)個x染色體(ti)中(zhong)的(de)壹(yi)個，在間期時的(de)染色質呈(cheng)異(yi)固(gu)縮(heteropycnosis)，呈(cheng)深(shen)染的小(xiao)體(ti)稱Barr氏體(ti)(圖(tu)9—)。Barr氏(shi)體(ti)位(wei)於(yu)問(wen)期細胞(bao)核(he)內(nei)面，呈(cheng)三(san)角形(xing)或半(ban)月(yue)形(xing)小(xiao)體(ti)，易為(wei)碳酸(suan)復葒(hong)等染料著色(se)。正常(chang)女(nv)性(xing)Barr氏體(ti)陽(yang)性(xing)，男性為(wei)陰性。男性Y染色質位於間期細胞(bao)核(he)近(jin)部(bu)，易為(wei)鹽(yan)酸(suan)阿的(de)平著色(se)，熒(ying)光顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)發(fa)較(jiao)強熒(ying)光，呈(cheng)點(dian)狀小(xiao)體(ti)，發(fa)光部(bu)分(fen)系Y姿(zi)色體(ti)異(yi)固(gu)縮的長臂。初代培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)和(he)二(er)倍體(ti)細(xi)胞(bao)株均可觀察(cha)到性染色質，傳代細胞(bao)系表(biao)現(xian)不規(gui)律(lv)。

(二(er))方法(fa)

.碳酸(suan)復紅(hong)(basic fuchsin)顯示x染色質法(fa)

()材(cai)料：蓋(gai)玻(bo)片(pian)培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)。

(2)染色液

儲存(cun)液(ye)：稱堿(jian)性(xing)復(fu)紅(hong)3g，溶(rong)於(yu)OOml 70％乙(yi)醇中，可保(bao)存(cun)。

工作液(ye)：(現(xian)用現(xian)配)

儲存(cun)液(ye)               0．0ml

5％石(shi)炭(tan)酸(suan)水溶(rong)液(ye)      90．0ml

冰(bing)醋(cu)酸(suan)               0．0 ml 

甲醛(40％)           0．0ml

(3)染色步驟(zhou)

)細(xi)胞(bao)：蓋(gai)玻(bo)片(pian)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)用(yong)37℃的(de)BSS漂(piao)洗(xi)後，立(li)即(ji)投(tou)入(ru)染色液內(nei)染色5～lOmin(亦(yi)可先固(gu)定再染色)；如(ru)用塗片(pian)標本(ben)則(ze)應(ying)待塗片(pian)幹後，迅(xun)速投(tou)入(ru)96％酒(jiu)精(jing)固定0～5min後再染色。

2)分化：用(yong)96％酒(jiu)精(jing)分化(hua)lmin，分化(hua)時(shi)要不斷搖動，把(ba)片(pian)子(zi)上(shang)多(duo)余的(de)染料漂(piao)洗(xi)掉。

3)脫(tuo)水：通過(guo)純酒精lmin。

4)封片(pian)：二(er)甲苯(ben)透(tou)明(ming)2~3min，樹(shu)膠(jiao)封固(gu)。

(4)結(jie)果：細(xi)胞(bao)質不著色(se)，細(xi)胞(bao)核(he)染成紫紅(hong)色；陽性Barr氏(shi)體(ti)附於細(xi)胞(bao)核(he)膜(mo)內(nei)面呈(cheng)三(san)角或半(ban)月(yue)形(xing)小(xiao)體(ti)。

2．熒(ying)光(guang)染色顯不Y染色質法(fa)

()材(cai)料：蓋(gai)玻(bo)片(pian)培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)。

(2)染色液

PBS(pH5．5～6．6)    00．0ml

鹽酸(suan)阿的(de)平(atebrine)   0．2g

(3)染色步驟(zhou)：Y染色質顯示染色與(yu)染色體(ti)熒(ying)光(guang)顯(xian)帶法(fa)相同。

(4)結果：在熒光(guang)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，Y染色質呈(cheng)特(te)別(bie)明(ming)亮黃綠色熒(ying)光圓點(dian)，直徑(jing)0．25～ 0．3μm，可位於(yu)核(he)內(nei)任(ren)何(he)位置，但(dan)以近(jin)時居多(duo)。