修(xiu)飾(shi)性工具酶(mei)

修飾(shi)性工具酶(mei)

（壹）末(mo)端(duan)轉移酶(mei)（terminal transferase）

l 末(mo)端(duan)轉移酶(mei)是壹類不(bu)依賴(lai)於DNA模板(ban)的(de)DNA聚合酶(mei)。ELISA試(shi)劑盒

l 特性：該類酶(mei)可以(yi)在沒有模(mo)板鏈存(cun)在的(de)情(qing)況下，將核(he)苷(gan)酸(suan)連接到dsDNA或(huo)ssDNA的(de)在3’－OH。特(te)別(bie)是對(dui)於平末(mo)端(duan)的(de)雙(shuang)鏈DNA末端(duan)加(jia)尾(wei)十(shi)分有用。

l zui常(chang)見的(de)用途：給外(wai)源(yuan)DNA片(pian)段(duan)及(ji)載(zai)體分子加(jia)上(shang)互補的同(tong)聚(ju)物尾(wei)巴，以創(chuang)造黏(nian)性末端(duan)，便於重組。

（二） SI核(he)酸酶(mei)（SI nuclease）

這(zhe)是壹種(zhong)從(cong)米(mi)曲黴(mei)（Aspergillus oryzae）中(zhong)分離的(de)高度(du)單(dan)鏈特異的外(wai)切(qie)酶(mei)。

活(huo)性：可以(yi)降解(jie)單(dan)鏈DNA或RNA或(huo)雙(shuang)鏈的單(dan)鏈區。

其(qi)主(zhu)要(yao)用途有(you)：

⑴　在cDNA合(he)成(cheng)過(guo)程中(zhong)，切(qie)開(kai)cDNA的(de)發夾末端(duan)；

⑵　載(zai)體構(gou)建過(guo)程中(zhong)，切(qie)去DNA片(pian)段(duan)的(de)單(dan)鏈尾(wei)巴，ELISA試劑盒

形成(cheng)平末(mo)端(duan)結構。

（三）堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)

從(cong)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)中(zhong)分離的(de)細菌(jun)堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)（Bacterial Alkaline Phosphatase）簡(jian)稱BAP。

從小(xiao)牛腸(chang)中(zhong)分離的(de)叫(jiao)小(xiao)牛腸(chang)堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)（ Calf Intestinal Alkaline Phosphatase） ，簡(jian)稱CIP，用的廣(guang)泛。

酶(mei)催(cui)功(gong)能：

脫磷(lin)酸(suan)作用，將單(dan)鏈或雙(shuang)鏈DNA或RNA5’－P轉化成(cheng)5’－OH。

其(qi)主(zhu)要(yao)用途有(you)：

⑴在用32P標記(ji)DNA 5′端之(zhi)前，去除(chu)5′端的(de)磷(lin)；ELISA試(shi)劑盒

⑵在DNA重(zhong)組技術(shu)中(zhong)，去除(chu)DNA片段(duan)的5′磷(lin)酸(suan)，防止(zhi)載體的(de)自(zi)身環(huan)化(hua)，提(ti)高重(zhong)組子比(bi)例。