SNP的(de)檢測(ce)知識

SNP的(de)檢測(ce)知識：

    人類基因組(zu)中存(cun)在(zai)著(zhe)廣泛的(de)多(duo)態性，zui簡(jian)單(dan)的(de)多(duo)態形(xing)式(shi)是發生在(zai)基因組(zu)中的(de)單個核(he)苷(gan)酸的(de)替代，即(ji)單核(he)苷酸(suan)多(duo)態性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）。SNP通(tong)常是壹種二(er)等位基因的(de)（biallelic），即(ji)二(er)態的(de)遺傳變(bian)異(yi)，SNP的(de)數量大、分(fen)布廣，在(zai)組(zu)成人類基因組(zu)的(de)30億個堿(jian)基中，平均(jun)每000個就(jiu)有(you)壹(yi)個SNP。SNP作(zuo)為(wei)第三代遺傳標(biao)記(ji)，在(zai)復雜(za)疾病的(de)基因定位(wei)、關聯(lian)分(fen)析、個體(ti)疾病易感性分(fen)析與藥(yao)物基因組(zu)學(xue)(pharmacogenomics)的(de)研究(jiu)中發揮(hui)著愈(yu)來愈重(zhong)要(yao)的(de)作用(yong)。ELISA試(shi)劑盒

.直接測(ce)序法(fa)進行SNP分(fen)析

    在(zai)所(suo)有(you)SNP的(de)檢測(ce)方法中，對欲(yu)檢測(ce)片段進行直(zhi)接擴增(zeng)、測(ce)序是zui為準(zhun)確(que)的(de)方法。通(tong)常情(qing)況(kuang)下，純合型(xing)SNP位點(dian)的(de)測(ce)序峰為(wei)單壹峰型(xing)，而(er)雜(za)合型(xing)SNP位點(dian)的(de)測(ce)序峰為(wei)套峰，因而(er)很容易將(jiang)其區分(fen)開(kai)來。通(tong)過直(zhi)接測(ce)序方法進行SNP檢(jian)測(ce)的(de)檢出(chu)率接近00%。

2. PCR-SSCP方法

    單(dan)鏈構(gou)象(xiang)多(duo)態性分(fen)析（single-strand conformation polymorphism，SSCP）是壹種簡單(dan)、地檢測(ce)DNA或RNA序列(lie)中點突(tu)變(bian)的(de)技(ji)術(shu)，由(you)於實驗成本較(jiao)低(di)，也(ye)是壹種目前(qian)較為常用(yong)的(de)方法。

檢(jian)測(ce)原(yuan)理(li)：

    單鏈DNA片段呈(cheng)復雜(za)的(de)空(kong)間折疊(die)構(gou)象(xiang)，這種(zhong)立(li)體(ti)結構(gou)主要(yao)是由(you)其內(nei)部(bu)堿(jian)基配對(dui)等分(fen)子內(nei)相(xiang)互作用(yong)力來(lai)維持(chi)的(de)，當有(you)壹(yi)個堿(jian)基發生改變(bian)時，會(hui)或多(duo)或少(shao)地影響(xiang)其空(kong)間構(gou)象(xiang)，使(shi)構(gou)象(xiang)發生改變(bian)，空(kong)間構(gou)象(xiang)有(you)差(cha)異(yi)的(de)單鏈DNA分(fen)子在(zai)聚(ju)丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)中受(shou)排(pai)阻大小(xiao)不同。因此，通(tong)過非(fei)變(bian)性聚(ju)丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)(PAGE)，可(ke)以(yi)非(fei)常敏(min)銳(rui)地將構(gou)象(xiang)上(shang)有(you)差(cha)異(yi)的(de)分(fen)子分(fen)離(li)開(kai)。ELISA試(shi)劑盒

需要(yao)註(zhu)意(yi)的(de)問題(ti)：

A．PCR-SSCP只(zhi)能作為(wei)壹種(zhong)突(tu)變(bian)檢(jian)測(ce)方法，要(yao)zui後(hou)確(que)定突變(bian)的(de)位置(zhi)和類(lei)型(xing)，還(hai)需(xu)進壹步測(ce)序。

B．由(you)於SSCP是依據點(dian)突變(bian)引(yin)起(qi)單鏈(lian)DNA分(fen)子立(li)體(ti)構(gou)象(xiang)的(de)改變(bian)來(lai)實(shi)現電泳(yong)分(fen)離(li)的(de)，這樣就(jiu)可(ke)能會(hui)出(chu)現(xian)當某(mou)些(xie)位(wei)置(zhi)的(de)點突變(bian)對(dui)單(dan)鏈DNA分(fen)子立(li)體(ti)構(gou)象(xiang)的(de)改變(bian)不(bu)起(qi)作用(yong)或作(zuo)用(yong)很小(xiao)時，再(zai)加(jia)上(shang)其他(ta)條件的(de)影響(xiang)，使(shi)聚(ju)丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)無(wu)法分(fen)辨造(zao)成漏檢(jian)。

C．經實(shi)驗證明小(xiao)於300bp的(de)DNA片段中的(de)單堿基突變(bian)，90%可(ke)被(bei)SSCP發現(xian)。ELISA試(shi)劑盒