細(xi)胞(bao)凍存(cun)的(de)保存(cun)方(fang)法

    細胞(bao)凍存(cun)是(shi)細胞(bao)保存(cun)的(de)主要(yao)方法之壹。利用(yong)凍(dong)存(cun)技術將(jiang)細(xi)胞(bao)置於-96℃液氮中低溫保存(cun)，可(ke)以(yi)使(shi)細胞(bao)暫時脫(tuo)離(li)生長狀(zhuang)態而(er)將(jiang)其(qi)細胞(bao)特性保存(cun)起(qi)來，這樣(yang)在(zai)需要(yao)的時候再復(fu)蘇細胞(bao)用(yong)於(yu)實(shi)驗。而(er)且(qie)適度(du)地保(bao)存(cun)壹(yi)定量的(de)細胞(bao)，可以(yi)防止(zhi)因正在培(pei)養的細(xi)胞(bao)被汙(wu)染(ran)或其(qi)他意外(wai)事件(jian)而使(shi)細胞(bao)丟種，起(qi)到(dao)了細胞(bao)保種的作(zuo)用(yong)。除(chu)此(ci)之外，還(hai)可(ke)以(yi)利用(yong)細(xi)胞(bao)凍存(cun)的(de)形式(shi)來(lai)購(gou)買(mai)、寄贈(zeng)、交(jiao)換(huan)和(he)運(yun)送(song)某(mou)些細(xi)胞(bao)。 細胞(bao)凍存(cun)時向(xiang)培(pei)養基中(zhong)加(jia)入保(bao)護劑(ji)--終濃(nong)度(du)5%．5%的甘(gan)油(you)或二(er)甲基亞(ya)碸(DMSO)，可使(shi)溶液冰(bing)點降(jiang)低，加(jia)之在緩慢(man)凍(dong)結條(tiao)件(jian)下，細(xi)胞(bao)內(nei)水(shui)分(fen)透(tou)出(chu)，減(jian)少了冰(bing)晶(jing)形(xing)成(cheng)，從(cong)而(er)避(bi)免細胞(bao)損傷(shang)。 采(cai)用(yong)"慢(man)凍快融"的方法能較好地保(bao)證(zheng)細胞(bao)存(cun)活(huo)。標準(zhun)冷凍(dong)速度(du)開始(shi)為- 到(dao) -2℃/min，當(dang)溫度(du)低於-25℃時可加(jia)速，到(dao)-80℃之後可直接投(tou)入(ru)液氮內(nei)(-96℃)。其(qi)方法如(ru)下(xia)：

．細胞(bao)：選對數生細胞(bao)，收集(ji)細(xi)胞(bao)24小時前換液壹次(ci)。

2．計數：按(an)常規方法把(ba)細(xi)胞(bao)制(zhi)成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液，計數，令(ling)細胞(bao)密(mi)度(du)達5×06/ml，離(li)心去(qu)上清(qing)，吸入離(li)心管中(zhong)。

3．凍存(cun)液：先用(yong)培(pei)養液9分＋DMSO 分(fen)（或(huo)甘(gan)油(you)）配成(cheng)0％的DMSO凍(dong)存(cun)液，按(an)上法壹(yi)滴(di)滴(di)加(jia)入離(li)心管中(zhong)，然後用(yong)吸管輕(qing)輕(qing)吹(chui)打令(ling)細胞(bao)重(zhong)懸(xuan)。

4．分(fen)裝(zhuang)：分裝(zhuang)入無菌安(an)剖中(zhong)，每(mei)安(an)剖加(jia).5毫升(sheng)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液。

5．封(feng)口(kou)：用(yong)塑(su)料(liao)安(an)剖時擰緊瓶(ping)口(kou)即(ji)可(ke)；如(ru)用(yong)火(huo)焰封(feng)閉安(an)剖口(kou)後，仔(zai)細(xi)檢查，定要(yao)封(feng)嚴(yan)，必要(yao)時可浸入藍(lan)色(se)液中觀(guan)察(cha)，為安(an)全(quan)起(qi)見，把安(an)剖縫(feng)入(ru)紗布小袋(dai)中，以(yi)防液氮浸入(ru)後，融解(jie)時因受熱發(fa)生爆(bao)炸(zha)傷(shang)人；紗袋(dai)壹端(duan)系(xi)以(yi)線(xian)繩，末端(duan)紮(zha)有小牌(pai)，註(zhu)明(ming)：細(xi)胞(bao)名稱，凍(dong)存(cun)日(ri)期(qi)，以(yi)便(bian)日(ri)後查找。