人高密度脂(zhi)蛋白（HDL-C）ELISA試劑(ji)盒技(ji)術原(yuan)理(li)

人高密度脂(zhi)蛋白(HDL-C)ELISA試劑(ji)盒技(ji)術原(yuan)理(li)

本試劑(ji)盒僅供(gong)研究(jiu)使(shi)用(yong)。

檢測範(fan)圍：96T
3μg/L -20μg/L

使(shi)用(yong)目(mu)的(de)：人(ren)高密度脂(zhi)蛋白(HDL-C)ELISA試劑(ji)盒用(yong)於測定大鼠血清、血漿及相關液體(ti)樣(yang)本中(zhong)內皮素 （ET）含量(liang)。

實(shi)驗原(yuan)理(li)
本試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗體(ti)夾(jia)心法測(ce)定標(biao)本中(zhong)大鼠內皮(pi)素(su) （ET）水平(ping)。用(yong)純化(hua)的(de)大鼠內皮(pi)素(su) （ET）抗體(ti)包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制成(cheng)固(gu)相(xiang)抗體(ti)，往(wang)包被(bei)單抗的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加(jia)入內皮素 （ET），再(zai)與HRP標(biao)記的(de)內(nei)皮素 （ET）抗體(ti)結合，形(xing)成(cheng)抗體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗體(ti)復(fu)合物(wu)，經(jing)過*洗(xi)滌(di)後加(jia)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色，並在(zai)酸的(de)作(zuo)用下(xia)轉化(hua)成(cheng)zui終(zhong)的(de)黃色。顏色的(de)深(shen)淺和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)內(nei)皮素 （ET）呈正相關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波長下(xia)測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通過標(biao)準曲線(xian)計算樣(yang)品(pin)中(zhong)大鼠內皮(pi)素(su) （ET）濃度。

人(ren)高密度脂(zhi)蛋白(HDL-C)ELISA試劑(ji)盒標(biao)本要(yao)求
．標(biao)本采(cai)集(ji)後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取按(an)相(xiang)關文獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗。若不(bu)能馬(ma)上(shang)進(jin)行(xing)試驗，可將標(biao)本放於-20℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反(fan)復凍(dong)融
2．不(bu)能檢測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣根過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活性(xing)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
.標(biao)準品(pin)的(de)稀釋(shi)：本(ben)試劑(ji)盒提(ti)供(gong)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品(pin)壹支(zhi)，用戶(hu)可按照(zhao)下(xia)列圖(tu)表在(zai)小(xiao)試管(guan)中(zhong)進行(xing)稀釋(shi)。

20μg/L5號(hao)標(biao)準品(pin)50μl的(de)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
60μg/L4號(hao)標(biao)準品(pin)50μl的(de)5號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
30μg/L3號(hao)標(biao)準品(pin)50μl的(de)4號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
5μg/L2號(hao)標(biao)準品(pin)50μl的(de)3號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液
7.5μg/L號(hao)標(biao)準品(pin)50μl的(de)2號(hao)標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液

2.加(jia)樣(yang)：分別設(she)空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其(qi)余各步操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準品(pin)準確加(jia)樣(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液40μl，然後再(zai)加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於酶標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻。
3.溫育：用封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置37℃溫育30分鐘。  
4.配液：將30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾(liu)水30倍(bei)稀釋(shi)後備用
5.洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去(qu)，如(ru)此(ci)重(zhong)復5次，拍(pai)幹。
6.加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外(wai)。
7.溫育：操(cao)作(zuo)同3。
8.洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同5。
9.顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色5分鐘.
0.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終止反(fan)應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色）。
.測定：以空(kong)白空調(tiao)零(ling)，450nm波長依序測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定應在(zai)加(jia)終(zhong)止液後5分鐘以內進(jin)行(xing)。

人(ren)高密度脂(zhi)蛋白(HDL-C)ELISA試劑(ji)盒註(zhu)意(yi)事(shi)項
．試劑(ji)盒從(cong)冷藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取出(chu)應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)5-30分鐘後方可使用，酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)開(kai)封(feng)後如(ru)未用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應裝入密封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。
2．濃洗滌(di)液可能會有(you)結晶析(xi)出(chu)，稀釋(shi)時(shi)可在(zai)水(shui)浴中(zhong)加(jia)溫(wen)助溶(rong)，洗(xi)滌時不(bu)影響(xiang)結果。
3．各步加(jia)樣(yang)均應(ying)使(shi)用加(jia)樣(yang)器(qi)，並(bing)經常校對(dui)其(qi)準(zhun)確性(xing)，以避(bi)免試驗誤(wu)差(cha)。壹次加(jia)樣(yang)時間控制在(zai)5分(fen)鐘內，如(ru)標(biao)本數量(liang)多，使(shi)用排槍加(jia)樣(yang)。
4．請每次測(ce)定的(de)同(tong)時做標(biao)準曲線(xian)，做復(fu)孔(kong)。如(ru)標(biao)本中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過高（樣(yang)本OD值大於標(biao)準品(pin)孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值(zhi)），請先(xian)用(yong)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)壹定倍數(shu)（n倍(bei)）後再(zai)測定，計算(suan)時(shi)請zui後乘以總稀釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。
5．封(feng)板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹次性(xing)使用(yong)，以避免交叉(cha)汙(wu)染。
6．底物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存。
7．嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明書的(de)操(cao)作(zuo)進行(xing)，試驗結果判定必(bi)須(xu)以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀數為準.
8．所有(you)樣(yang)品(pin)，洗滌(di)液和(he)各種(zhong)廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試劑(ji)不(bu)同批(pi)號(hao)組分(fen)不(bu)得(de)混(hun)用。
0.如(ru)與英(ying)文說明書有(you)異(yi)，以(yi)英(ying)文說明書為準。

保(bao)存條件(jian)及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)
．試劑(ji)盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有(you)效(xiao)：6個(ge)月(yue)